硫氧还原蛋白突变基因用于鲑鱼降钙素的高效可溶性融合表达
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中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所；北京100005 刘深基；陈松森；狄旭；熊安琪；张友鸿
鲑鱼降钙素|定点突变|高效表达|表达渗漏
参见附件(49kb)。
中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所；北京100005 刘深基；陈松森；狄旭；熊安琪；张友鸿
关键词：鲑鱼降钙素；定点突变；高效表达；表达渗漏
摘要：为了化学裂解后重组多肽的分离纯化 ,用双引物定点突变的方法将表达质粒pTrx sCT Gly中硫氧还原蛋白 (Trx)与鲑鱼降钙素 (sCT)的融合基因的第 38位Met突变为Ala,并将突变后的基因克隆到pET30a中 ,然后转入大肠杆菌BL2 1,以IPTG诱导 ,使降钙素与硫氧还原蛋白融合表达 ,融合蛋白占菌体总蛋白的 5 6 %左右。并发现本原核表达体系存在“表达渗漏”现象 ,此现象为在菌体的对数生长期中 ,外源蛋白极少表达 ,随着培养时间的延长 ,外源蛋白逐步积累 ,达到 5 1%的高水平。该发现在基因工程生产重组蛋白工艺中具有应用价值。
中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所；北京100005 刘深基；陈松森；狄旭；熊安琪；张友鸿
关键词：鲑鱼降钙素；定点突变；高效表达；表达渗漏
摘要：为了化学裂解后重组多肽的分离纯化 ,用双引物定点突变的方法将表达质粒pTrx sCT Gly中硫氧还原蛋白 (Trx)与鲑鱼降钙素 (sCT)的融合基因的第 38位Met突变为Ala,并将突变后的基因克隆到pET30a中 ,然后转入大肠杆菌BL2 1,以IPTG诱导 ,使降钙素与硫氧还原蛋白融合表达 ,融合蛋白占菌体总蛋白的 5 6 %左右。并发现本原核表达体系存在“表达渗漏”现象 ,此现象为在菌体的对数生长期中 ,外源蛋白极少表达 ,随着培养时间的延长 ,外源蛋白逐步积累 ,达到 5 1%的高水平。该发现在基因工程生产重组蛋白工艺中具有应用价值。
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