汉滩病毒M,S基因部分片段在大肠杆菌中的融合表达
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罗雯；徐志凯；阎岩；吴兴安；张芳琳；刘勇；赵茜；白文涛；王海涛；潘伯荣
汉滩病毒M|S基因|部分片段|大肠杆菌|融合表达
参见附件(53kb)。
罗雯；徐志凯；阎岩；吴兴安；张芳琳；刘勇；赵茜；白文涛；王海涛；潘伯荣
关键词：汉滩病毒M；S基因；部分片段；大肠杆菌；融合表达
摘要：目的 在大肠杆菌中融合表达含主要抗原位点的汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与NP片段.方法 将汉滩病毒76-118株M基因编码G1的片段与S基因编码区5′端约0.7kb的片段连接,克隆入pGEX-4T2,构建嵌合基因原核表达载体pGEX-4T2-G1S0.7,并在大肠杆菌XL1-Blue中,诱导GST-G1S0.7融合蛋白的表达.表达产物用ELISA和Westernblot进行鉴定.结果 成功地构建了嵌合原核表达载体pGEX-4T2-G1S0.7.经IPTG诱导后,ELISA活性测定结果表明,该融合蛋白可与抗汉滩病毒NP及糖蛋白的mAb特异性结合.Westernblot结果显示,诱导出相对分子质量(Mr)大于1×105的G1S0.7与GST的融合蛋白.结论 获得具有特异性结合活性的融合蛋白GST-G1S0.7,为汉滩病毒基因工程疫苗的研制奠定了基础。
罗雯；徐志凯；阎岩；吴兴安；张芳琳；刘勇；赵茜；白文涛；王海涛；潘伯荣
关键词：汉滩病毒M；S基因；部分片段；大肠杆菌；融合表达
摘要：目的 在大肠杆菌中融合表达含主要抗原位点的汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与NP片段.方法 将汉滩病毒76-118株M基因编码G1的片段与S基因编码区5′端约0.7kb的片段连接,克隆入pGEX-4T2,构建嵌合基因原核表达载体pGEX-4T2-G1S0.7,并在大肠杆菌XL1-Blue中,诱导GST-G1S0.7融合蛋白的表达.表达产物用ELISA和Westernblot进行鉴定.结果 成功地构建了嵌合原核表达载体pGEX-4T2-G1S0.7.经IPTG诱导后,ELISA活性测定结果表明,该融合蛋白可与抗汉滩病毒NP及糖蛋白的mAb特异性结合.Westernblot结果显示,诱导出相对分子质量(Mr)大于1×105的G1S0.7与GST的融合蛋白.结论 获得具有特异性结合活性的融合蛋白GST-G1S0.7,为汉滩病毒基因工程疫苗的研制奠定了基础。
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