小鼠重组Periostin C端肽在大肠杆菌中的表达及其产物的活性检测
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第四军医大学口腔医学院；陕西西安710032 万玲；吴织芬；陈平；张晓光；宋应亮
细胞外基质蛋白质类|DNA重组|基因表达,小鼠重组PeriostinC端肽在大肠杆菌中的表达及其产物的活性检测
参见附件(36kb)。
第四军医大学口腔医学院；陕西西安710032 万玲；吴织芬；陈平；张晓光；宋应亮
关键词：细胞外基质蛋白质类；DNA重组；基因表达
摘要：目的:利用大肠杆菌系统表达小鼠重组PeriostinC端肽。方法:将编码小鼠PeriostinC端肽的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pRSET-B上,使其受控于T7启动子,构建成表达质粒pRS-B-Peri,以大肠杆菌E.cokiBL21(DE3)为宿主菌。对工程菌用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropykthio-β-D-gakacto side,IPTG)诱导表达,表达产物纯化后进行复性处理,再通过观察成骨细胞的伸展性检测其生物活性。结果:经IPTG诱导5h,工程菌在SDS-PAGE上出现一条新蛋白带,相对分子质量(Mr)与预期的一致,约为36000,主要以包涵体形式存在。所得包涵体经纯化和复性处理,得到纯度高于95%的有良好活性的小鼠重组PeriostinC端肽。结论:小鼠重组PeriostinC端肽在大肠杆菌中得到表达并具有良好的生物学活性。
第四军医大学口腔医学院；陕西西安710032 万玲；吴织芬；陈平；张晓光；宋应亮
关键词：细胞外基质蛋白质类；DNA重组；基因表达
摘要：目的:利用大肠杆菌系统表达小鼠重组PeriostinC端肽。方法:将编码小鼠PeriostinC端肽的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pRSET-B上,使其受控于T7启动子,构建成表达质粒pRS-B-Peri,以大肠杆菌E.cokiBL21(DE3)为宿主菌。对工程菌用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropykthio-β-D-gakacto side,IPTG)诱导表达,表达产物纯化后进行复性处理,再通过观察成骨细胞的伸展性检测其生物活性。结果:经IPTG诱导5h,工程菌在SDS-PAGE上出现一条新蛋白带,相对分子质量(Mr)与预期的一致,约为36000,主要以包涵体形式存在。所得包涵体经纯化和复性处理,得到纯度高于95%的有良好活性的小鼠重组PeriostinC端肽。结论:小鼠重组PeriostinC端肽在大肠杆菌中得到表达并具有良好的生物学活性。
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