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编号:10203858
扩增我国登革2型病毒全长cDNA分子的技术方法融合PCR方法
http://www.100md.com 军事医学科学院微生物学流行病学研究所;北京100071 范宝昌;赵卫;胡志君;于曼;陈水平;杨佩英;秦鄂德
登革热病毒|全长cDNA|长链逆转录PCR|融合PCR
    参见附件(35kb)。

     军事医学科学院微生物学流行病学研究所;北京100071 范宝昌;赵卫;胡志君;于曼;陈水平;杨佩英;秦鄂德

    关键词:登革热病毒;全长cDNA;长链逆转录PCR;融合PCR

    摘要:目的:建立扩增登革2型病毒基因组全长cDNA的融合PCR法,为深入探讨病毒基因组的结构与功能提供有效的技术途径。方法:根据我国登革2型病毒D2 43株序列设计引物,首先采用长链RT PCR技术扩增病毒基因组5′及3′半分子,然后以半分子采用融合PCR法将两个半分子构建成全长cDNA分子。为进一步证实所构建全长cDNA分子的特异性,再以融合PCR产物为模板扩增5′非编码区序列,与pGEM T载体连接,在377A型自动测序仪进行序列分析。结果:通过对逆转录反应及PCR扩增条件的优化,建立了制备大片段cDNA及构建全长cDNA分子的融合PCR方法。扩增的我国登革2型病毒的5′及3′半分子的长度均为5kb左右,采用融合PCR方法制备的全长cDNA长约11kb,与预期大小一致,非编码区测序结果表明扩增产物为D2 43所特有。结论:所建立的融合PCR方法是构建登革病毒基因组全长cDNA的有效技术。

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