应用重组PCR技术构建人单链白细胞介素12融合基因
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西安交通大学第一医院血液病研究室；陕西西安710061 张梅；司履生；王一理
重组PCR|人白细胞介素12(hIL-12)|人单链白细胞介素12(hscIL-12)|融合基因
参见附件。
西安交通大学第一医院血液病研究室；陕西西安710061 张梅；司履生；王一理
关键词：重组PCR；人白细胞介素12(hIL-12)；人单链白细胞介素12(hscIL-12)；融合基因
摘要：目的构建人单链白细胞介素12(hscIL-12)融合基因并在真核细胞中进行表达,为进一步研究hscIL-12融合蛋白的生物学活性奠定基础。方法应用重组PCR技术将hIL-12p40和p35亚单位两段编码序列的cDNA通过一疏水性多肽接头(Gly4Ser)3碱基序列进行前后拼接(IL-12p40-多肽接头-p35),构建hscIL-12融合基因,并进行核苷酸序列测定,进一步将hscIL-12融合基因插入pcDNA3.1真核表达载体中,转染COS-7细胞表达hscIL-12融合蛋白,并行Westernblot分析。结果该融合基因经DNA序列分析表明:p40、p35、linker的连接顺序、方向及序列完全正确,融合基因可在COS-7细胞中表达hscIL-12融合蛋白。Westernblot显示该融合蛋白分子量为70000u,可与鼠抗人IL-12p40/p70单克隆抗体特异性结合。结论重组PCR技术是十分有效、可靠的体外基因重组方法。
西安交通大学第一医院血液病研究室；陕西西安710061 张梅；司履生；王一理
关键词：重组PCR；人白细胞介素12(hIL-12)；人单链白细胞介素12(hscIL-12)；融合基因
摘要：目的构建人单链白细胞介素12(hscIL-12)融合基因并在真核细胞中进行表达,为进一步研究hscIL-12融合蛋白的生物学活性奠定基础。方法应用重组PCR技术将hIL-12p40和p35亚单位两段编码序列的cDNA通过一疏水性多肽接头(Gly4Ser)3碱基序列进行前后拼接(IL-12p40-多肽接头-p35),构建hscIL-12融合基因,并进行核苷酸序列测定,进一步将hscIL-12融合基因插入pcDNA3.1真核表达载体中,转染COS-7细胞表达hscIL-12融合蛋白,并行Westernblot分析。结果该融合基因经DNA序列分析表明:p40、p35、linker的连接顺序、方向及序列完全正确,融合基因可在COS-7细胞中表达hscIL-12融合蛋白。Westernblot显示该融合蛋白分子量为70000u,可与鼠抗人IL-12p40/p70单克隆抗体特异性结合。结论重组PCR技术是十分有效、可靠的体外基因重组方法。
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