重组胸腺素α_1的克隆、表达与纯化
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第四军医大学生物技术中心陕西西安710033 薛晓畅；颜真；石继红；韩苇；张英起
胸腺素α1|串联体|克隆|基因表达|融合蛋白
参见附件(136kb)。
第四军医大学生物技术中心陕西西安710033 薛晓畅；颜真；石继红；韩苇；张英起
关键词：胸腺素α1；串联体；克隆；基因表达；融合蛋白
摘要：目的 利用基因工程方法表达胸腺素α1 (thymosinalpha1,Tα1 )的串联体并进行纯化、鉴定 .方法 将 Tα1 的基因拆分为 4个片段进行合成 ,退火后经 PCR获得串联体基因 ,测序正确后克隆在硫氧还蛋白 (thioredoxin)融合蛋白表达载体 p Thio His A中 ,转化大肠杆菌 TOP10菌株 ,IPTG诱导表达 ,表达的融合蛋白经过 80℃热处理及阴离子交换柱Q- Sepharose Fast Flow进行纯化 ,Western- blot进行鉴定 .结果 获得了纯化的 Thioredoxin- Tα1 3,分子质量约为 31ku.结论 用基因串联思路表达小分子多肽是一种可行的方法 ,Tα1 3的成功表达为检测其生物学活性奠定了基础。
第四军医大学生物技术中心陕西西安710033 薛晓畅；颜真；石继红；韩苇；张英起
关键词：胸腺素α1；串联体；克隆；基因表达；融合蛋白
摘要：目的 利用基因工程方法表达胸腺素α1 (thymosinalpha1,Tα1 )的串联体并进行纯化、鉴定 .方法 将 Tα1 的基因拆分为 4个片段进行合成 ,退火后经 PCR获得串联体基因 ,测序正确后克隆在硫氧还蛋白 (thioredoxin)融合蛋白表达载体 p Thio His A中 ,转化大肠杆菌 TOP10菌株 ,IPTG诱导表达 ,表达的融合蛋白经过 80℃热处理及阴离子交换柱Q- Sepharose Fast Flow进行纯化 ,Western- blot进行鉴定 .结果 获得了纯化的 Thioredoxin- Tα1 3,分子质量约为 31ku.结论 用基因串联思路表达小分子多肽是一种可行的方法 ,Tα1 3的成功表达为检测其生物学活性奠定了基础。
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