小鼠胚胎干细胞p16~(INK4a)基因外显子1α打靶研究

http://www.100md.com 第二军医大学医学遗传教研室 上海200433上海交通大学动物科学系；上海201101 龚振明；李坚；傅继梁

    参见附件(69kb)。

     第二军医大学医学遗传教研室 上海200433上海交通大学动物科学系；上海201101 龚振明；李坚；傅继梁

    关键词：p16INK4a；基因打靶

    摘要：在活体水平上 ,小鼠p16 INK4a基因是否具有抑制肿瘤发生和发展的功能是一个悬而未决的问题。利用筛选基因组文库得到的小鼠p16 INK4a基因组DNA片段 ,构建了针对小鼠p16 INK4a 基因外显子 1α的基因打靶载体 ,其短臂为1.5kbEco81Ⅰ AccⅡ片段 ,长臂为 5 .9kbXbaⅠ XhoⅠ片段。打靶载体经线性化和纯化后通过电穿孔转导小鼠R1ES细胞 ,获得 37个G418和Gancyclovir双药抗性克隆。用Southern杂交法对双药抗性克隆进行鉴定 ,获得一个敲除了p16 INK4a基因外显子 1α的阳性ES细胞克隆。

    http://www.100md.com/html/analecta/2003/01/01/96/394.htm

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