小鼠蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与序列分析
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广东医学院医学遗传研究室；广东医学院生物化学和分子生物学研究所 广东湛江524023 刘新光；彭海艳；陈小文
β调节亚基,蛋白激酶CK2,小鼠|表达载体pT7-7|分子克隆|DNA序列分析
参见附件(131kb)。
广东医学院医学遗传研究室；广东医学院生物化学和分子生物学研究所 广东湛江524023 刘新光；彭海艳；陈小文；郑克勤；梁念慈
关键词：β调节亚基/蛋白激酶CK2/小鼠；表达载体pT7-7；分子克隆；DNA序列分析
摘要：目的 :构建小鼠蛋白激酶 CK2 β亚基 c DNA重组表达质粒 ,以便深入进行 CK2结构与功能的研究。方法 :通过反转录 PCR从 NIH3T3小鼠成纤维细胞中获得小鼠蛋白激酶 CK2 β亚基编码区 c DNA,PCR扩增酶为高保真 DNA聚合酶。将 N de I/ H ind 彻底双酶切 PCR产物定向连接到牛小肠碱性磷酸酶去 5′端磷酸的同样彻底 Nde I/ H ind 双酶切的表达载体 p T7- 7中 ,转化感受态大肠杆菌 DH5 α获得转化子 ,用 0 .8%琼脂糖凝胶电泳初步筛选转化子 ,将阳性克隆进行单和双酶切分析鉴定。随机挑选两个阳性克隆进行 DNA测序。结果 :转化子的阳性筛选率为 10 0 % ,限制
广东医学院医学遗传研究室；广东医学院生物化学和分子生物学研究所 广东湛江524023 刘新光；彭海艳；陈小文；郑克勤；梁念慈
关键词：β调节亚基/蛋白激酶CK2/小鼠；表达载体pT7-7；分子克隆；DNA序列分析
摘要：目的 :构建小鼠蛋白激酶 CK2 β亚基 c DNA重组表达质粒 ,以便深入进行 CK2结构与功能的研究。方法 :通过反转录 PCR从 NIH3T3小鼠成纤维细胞中获得小鼠蛋白激酶 CK2 β亚基编码区 c DNA,PCR扩增酶为高保真 DNA聚合酶。将 N de I/ H ind 彻底双酶切 PCR产物定向连接到牛小肠碱性磷酸酶去 5′端磷酸的同样彻底 Nde I/ H ind 双酶切的表达载体 p T7- 7中 ,转化感受态大肠杆菌 DH5 α获得转化子 ,用 0 .8%琼脂糖凝胶电泳初步筛选转化子 ,将阳性克隆进行单和双酶切分析鉴定。随机挑选两个阳性克隆进行 DNA测序。结果 :转化子的阳性筛选率为 10 0 % ,限制
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