趋化因子受体CCR_5反义RNA在真核细胞中的表达
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北京大学第一医院感染疾病科;中山医科大学;卫生部艾滋病中心 100034北京 邢卉春;徐小元;王勤环;于敏;
参见附件(47kb)。
北京大学第一医院感染疾病科;中山医科大学;卫生部艾滋病中心 100034北京 邢卉春;徐小元;王勤环;于敏;公伟波;邵一鸣
关键词:受体;趋化因子;载体;假病毒
摘要:目的 构建趋化因子受体CCR5反义RNA真核表达载体并获取重组假病毒颗粒以用于抗HIV 1研究。方法 用RT PCR法从健康人外周血单个核细胞 (PBMCs)中获得趋化因子受体CCR5翻译起始区的基因片段 ,并以正、反两个方向定向插入到真核表达载体pLXSN上。重组载体用脂质体转染剂 (lipofectAMINE)转染PA317包装细胞 ,抗 G418克隆的细胞上清经逆转录后用荧光定量PCR(FQ PCR)测定假病毒滴度 ,进一步感染NIH 3T3细胞。结果 CCR5正、反义RNA的真核表达载体 ,经PA317细胞包装形成的假病毒颗粒已成功地感染NIH 3T3细胞 ,目的基因在该细胞中得到整合与表达。结论 从PBM
北京大学第一医院感染疾病科;中山医科大学;卫生部艾滋病中心 100034北京 邢卉春;徐小元;王勤环;于敏;公伟波;邵一鸣
关键词:受体;趋化因子;载体;假病毒
摘要:目的 构建趋化因子受体CCR5反义RNA真核表达载体并获取重组假病毒颗粒以用于抗HIV 1研究。方法 用RT PCR法从健康人外周血单个核细胞 (PBMCs)中获得趋化因子受体CCR5翻译起始区的基因片段 ,并以正、反两个方向定向插入到真核表达载体pLXSN上。重组载体用脂质体转染剂 (lipofectAMINE)转染PA317包装细胞 ,抗 G418克隆的细胞上清经逆转录后用荧光定量PCR(FQ PCR)测定假病毒滴度 ,进一步感染NIH 3T3细胞。结果 CCR5正、反义RNA的真核表达载体 ,经PA317细胞包装形成的假病毒颗粒已成功地感染NIH 3T3细胞 ,目的基因在该细胞中得到整合与表达。结论 从PBM
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