四环素基因表达调控系统介导的HBVX基因体外表达细胞株的建立
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四川大学华西医院；四川省感染病分子生物学重点实验室 610046成都 唐红；林勇；秦山；赵连三
乙型肝炎病毒|X基因|细胞株|基因表达调控|四环素
参见附件(53kb)。
四川大学华西医院；四川省感染病分子生物学重点实验室 610046成都 唐红；林勇；秦山；赵连三
关键词：乙型肝炎病毒；X基因；细胞株；基因表达调控；四环素
摘要：目的 建立稳定、高效的HBxAg体外表达细胞株 ,以便进一步研究HBVX基因和HBxAg的致癌作用及机理。方法 构建带有完整四环素基因关闭 (Tet off)系统的HBVX基因重组表达质粒pBPSTR1 FlagX ,用该重组质粒转染NIH 3T3细胞 ,筛选嘌呤霉素抗性细胞克隆 ,用抗 FlagM2 单抗和兔抗 HBx作蛋白质免疫印迹分析 ,检测细胞内Flag HBxAg表达和四环素调控其表达的情况。结果 重组质粒pBPSTR1 FlagX转染NIH 3T3细胞后获得 30个生长良好的嘌呤霉素抗性细胞克隆。其中 12个细胞克隆有Flag HBxAg的稳定表达 ,且有 5个克隆的Flag HBxAg表达受四环素调控。当四环素浓度逐...
四川大学华西医院；四川省感染病分子生物学重点实验室 610046成都 唐红；林勇；秦山；赵连三
关键词：乙型肝炎病毒；X基因；细胞株；基因表达调控；四环素
摘要：目的 建立稳定、高效的HBxAg体外表达细胞株 ,以便进一步研究HBVX基因和HBxAg的致癌作用及机理。方法 构建带有完整四环素基因关闭 (Tet off)系统的HBVX基因重组表达质粒pBPSTR1 FlagX ,用该重组质粒转染NIH 3T3细胞 ,筛选嘌呤霉素抗性细胞克隆 ,用抗 FlagM2 单抗和兔抗 HBx作蛋白质免疫印迹分析 ,检测细胞内Flag HBxAg表达和四环素调控其表达的情况。结果 重组质粒pBPSTR1 FlagX转染NIH 3T3细胞后获得 30个生长良好的嘌呤霉素抗性细胞克隆。其中 12个细胞克隆有Flag HBxAg的稳定表达 ,且有 5个克隆的Flag HBxAg表达受四环素调控。当四环素浓度逐...
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