简化的大鼠心脏异位移植术*
作者：李敬来 夏家红 黄毅 杨辰垣
单位：同济医科大学(430022)心血管研究所
关键词：大鼠；异位；心脏移植
简化的大鼠心脏异位移植术
摘要 简化和改进大鼠异位心脏移植模型。不需要显微放大设备，先准备受体，将供心升主动脉和主肺动脉分别端侧吻合于受体的腹主动脉和下腔静脉上。手术成功率达85%以上。这种方法简便易行，成功率高。
自60年代成功地进行了大白鼠心脏异位移植以来[1]，一些学者相继对这种模型进行了研究[2～4]，但所用设备及操作的复杂，一直是限制其广泛开展的主要原因。近年来，我们在Ono氏[2]术式的基础上对异位心脏移植模型进行了简化和改进，使其更加简便易行，整个手术在一个人操作的情况下在1～2h内完成。我们共进行预实验46例，正式实验40例，效果满意。
, 百拇医药
材料与方法
一、动物与设备 健康雄性Wistar及SD大鼠，近交系，体重250～300g，同品系移植供受体均为Wistar大鼠，不同品系移植受体为Wistar大鼠，供体为SD大鼠。显微手术器械包1个(上海医疗器械厂)。
二、手术步骤 先准备受体，后切取供心。供受体均采用0.3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，用量为1ml/100g大鼠。
1.受体准备 沿腹正中线剪开大鼠腹腔，将肠管推向右侧，剪开后腹膜，分离腹主动脉和下腔静脉(不分开血管鞘)，必要时可结扎切断下腔静脉向背侧的1～2支分支。
2.供心切取 沿腹正中线剪开腹腔，从下腔静脉注入25u/ml肝素2ml。待全身肝素化后，沿胸骨正中剪开胸腔，并立即向胸腔内加入冰块。剪开心包，在接近右房处结扎切断下腔静脉和右上腔静脉。暴露并分离升主动脉和主肺动脉，在无名动脉以下剪断升主动脉，在横窦处剪断主肺动脉，用5—0丝线将左上腔静脉及所有肺静脉一次性结扎切断(图1)。
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图1 供心切取示意图
3.供心移植 用微血管钳将受体腹主动脉和下腔静脉拟定吻合口处的上下两端横行钳夹，用尖刀片在腹主动脉和下腔静脉上靠外侧挑一小口，用25u/ml肝素生理盐水冲去积血后，将切口纵向剪大，使腹主动脉和下腔静脉的切口长度分别为3～4mm和4～5mm。
吻合时将供心置于两棉片之间，其上覆以冰块。用9—0的无创缝合线先将共心主动脉和受体的腹主动脉切口对角缝合2针，然后先内侧壁，后外侧壁，从右向左进行连续缝合，(图2)针距和边距均为0.3～0.5mm。
图2 将供心主动脉与受体腹主动脉进行吻合
同样，用9—0无创缝合线将供心主肺动脉与下腔静脉切口对角缝合两针。然后在下腔静脉腔内从右向左连续缝合内侧壁，继而从左向右在下腔静脉腔外缝合外侧壁(图3)，针距和边距均为0.3～0.5mm。
, 百拇医药
图3 将供心主肺动脉与下腔静脉吻合
缝合最后2针前，用钝性弯针头向吻合口腔内注入25u/ml肝素生理盐水，排除残留空气，以防气栓形成。
吻合完毕，松开两把微血管钳，供心可在1～3min内复跳。供心总缺血时间为20～30min。吻合后将肠管复位，常规从腹壁静脉输入生理盐水1ml/100g大鼠。分两层缝合腹腔。
三、术后观察
1.触诊 术后观察主要采用腹壁外触诊法，移植成功后，近期心跳有力且心脏富有弹性，随着时间的延长，则心跳乏力，心脏变硬。
2.心电图 术前对受体常规进行心电图检查，对每例移植成功的大鼠从术后第1天起隔天行心电图检查。心电图检查在乙醚麻醉下进行：将针式电极分别刺入大鼠四肢及心尖处皮下，记录各导联心电图(图4)。由于体内有两个心脏，心电图波形可出现协同或抑制现象。有排斥反应发生时，移植心的心率可变慢。
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图4 移植心导联心电图A：正常大鼠B：移植
后3天(协同与抑制交替)C：移植后7天(协同)
结 果
1.成功率及存活情况 以腹膜外触诊的方法来判断移植心存活情况，将术后受体和移植心均存活1天以上做为手术成功的标志。正式实验40例，其中同品系之间的移植和不同品系之间的移植各为20例，且移植心存活1天以上者均为17例，其总成功率为85%(34/40)，同品系移植心1个月存活率为70.5%(12/17)。不同品系移植成功17例，对其中10例进行了移植心存活情况观察，结果移植心停跳高峰在6～10天之间(表1)。 表1 移植心停跳高峰
术后天数
3
6
, 百拇医药
8
9
10
11
12
移植心停跳例数
1
2
2
1
2
1
1
2.病理 对7例不同品系移植的大鼠，分别于术后第1天，第3天，第5天，第7天，第9天，第11天等不同时点进行病理检查，其中术后第3天和第7天各为2例，余均为1例。通过病理检查发现，其大体解剖可见移植心和肠管、大网膜等周围组织粘连，移植心的颜色较暗，水肿，变硬。病理切片显示，心肌组织内有大量的淋巴细胞和单核细胞浸润(图5)。
, 百拇医药
3.术式的沿改及本实验的简化特点
1933年Mann等[5]对哺乳动物设计了冠状循环途径：受体动脉→供心升主动脉→冠状动脉→心肌→冠状静脉→右心房→右心室→肺动脉→受体静脉。1964年Abbott等[1]用这种循环模式进行了大白鼠的腹腔异位心脏移植术，其后很多学者又对其进行了改进[2～4]，但所有改进均离不开复杂的显微放大和降温设备，以及均是先准备供心，供心缺血时间长。对此，我们做了如下改进和简化：①不用显微放大装置，整个手术均在肉眼下进行。②手术过程中不要特殊的降温设备。③先准备受体，后切取供心。④从下腔静脉注入肝素使供体肝素化。⑤供心主肺动脉切断部位选在横窦处。⑥供体胸腔打开时选择正中切口。⑦灵活选择吻合口部位。⑧术后不输血及血浆代用品，常规从腹壁静脉输入生理盐水。 讨 论
由于大鼠心脏异位移植模型具有明显的手术成败标志，即复跳-成功，不复跳-失败，停跳-免疫排斥反应的终点。所以这种模型在免疫排斥反应的研究、以及病理、心肌保护等基础研究中倍受青睐。通过简化，使该手术在只有几把简单的显微器械的情况下即可进行。
, 百拇医药
手术失败的原因一是受体死亡，其次是供心不能复跳。受体死亡的原因主要有两个：一是吻合口漏血；其次是吻合口处静脉血流受阻。为此，我们强调：手术区暴露要充分；受体的腹主动脉和下腔静脉切口要稍长于供心升主动脉和主肺动脉横径，以便吻合；操作要轻柔，把握好针距和边距；吻合线最好用9-0为宜。供心不能复跳的主要原因是供心缺血时间过长，为此，我们采取了下列措施：打开胸腔时立即向胸腔内加入生理盐水冰块，尽量减少热缺血时间；先准备受体，缩短供心缺血时间。在手术过程中将共心置于2棉片之间，上覆以冰块，使供心始终处在冰水中，这样既经济又简单，且效果非常满意。
吻合口部位的选择要以手术操作便利为准，不拒泥于腰静脉以上或以下。必要时可结扎下腔静脉向背侧的1～2支分支。术中术后不输血和血浆代用品，但手术后适当的补液是非常必要的。我们常规在吻合完毕后从腹壁静脉输入生理盐水1ml/100g大鼠。
总之，大鼠心脏异位移植模型越来越被广泛地应用于各种基础研究。我们相信，随着术式的简化，这种模型在各种基础研究中的应用前景会越来越光明。
, 百拇医药
*本课题受国家自然科学基金资助，批准号39670720
参考文献
1 Abbott CP, Edward S.Lindse ES, Creech，O，et al.A t echnique for Heart Transplantation in the Rat.Arch of Surg,1964,89:645.
2 Oho k,Lindsey ES.Improved technique of heart transplantation in rats. J Thorac Cardiovasc Surg,1969,57:225.
3 陈忠华，何藕聪，钟妙英，等.改进的大白鼠同种异位心脏移植术.中华器官移植杂志 ，1982，3(1)：38.
4 徐志云，张保仁，朱家麟，等.改进的大鼠异位心脏移植术：第二军医大学学报，1992 ，13(2)：116.
5 Mann FC.Tramsplantation of the intact mammalian heart.Arch Surg,1933,26:219.
(1998-12-09收稿)
(1999-01-25修回), 百拇医药
单位：同济医科大学(430022)心血管研究所
关键词：大鼠；异位；心脏移植
简化的大鼠心脏异位移植术
摘要 简化和改进大鼠异位心脏移植模型。不需要显微放大设备，先准备受体，将供心升主动脉和主肺动脉分别端侧吻合于受体的腹主动脉和下腔静脉上。手术成功率达85%以上。这种方法简便易行，成功率高。
自60年代成功地进行了大白鼠心脏异位移植以来[1]，一些学者相继对这种模型进行了研究[2～4]，但所用设备及操作的复杂，一直是限制其广泛开展的主要原因。近年来，我们在Ono氏[2]术式的基础上对异位心脏移植模型进行了简化和改进，使其更加简便易行，整个手术在一个人操作的情况下在1～2h内完成。我们共进行预实验46例，正式实验40例，效果满意。
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材料与方法
一、动物与设备 健康雄性Wistar及SD大鼠，近交系，体重250～300g，同品系移植供受体均为Wistar大鼠，不同品系移植受体为Wistar大鼠，供体为SD大鼠。显微手术器械包1个(上海医疗器械厂)。
二、手术步骤 先准备受体，后切取供心。供受体均采用0.3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，用量为1ml/100g大鼠。
1.受体准备 沿腹正中线剪开大鼠腹腔，将肠管推向右侧，剪开后腹膜，分离腹主动脉和下腔静脉(不分开血管鞘)，必要时可结扎切断下腔静脉向背侧的1～2支分支。
2.供心切取 沿腹正中线剪开腹腔，从下腔静脉注入25u/ml肝素2ml。待全身肝素化后，沿胸骨正中剪开胸腔，并立即向胸腔内加入冰块。剪开心包，在接近右房处结扎切断下腔静脉和右上腔静脉。暴露并分离升主动脉和主肺动脉，在无名动脉以下剪断升主动脉，在横窦处剪断主肺动脉，用5—0丝线将左上腔静脉及所有肺静脉一次性结扎切断(图1)。
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图1 供心切取示意图
3.供心移植 用微血管钳将受体腹主动脉和下腔静脉拟定吻合口处的上下两端横行钳夹，用尖刀片在腹主动脉和下腔静脉上靠外侧挑一小口，用25u/ml肝素生理盐水冲去积血后，将切口纵向剪大，使腹主动脉和下腔静脉的切口长度分别为3～4mm和4～5mm。
吻合时将供心置于两棉片之间，其上覆以冰块。用9—0的无创缝合线先将共心主动脉和受体的腹主动脉切口对角缝合2针，然后先内侧壁，后外侧壁，从右向左进行连续缝合，(图2)针距和边距均为0.3～0.5mm。
图2 将供心主动脉与受体腹主动脉进行吻合
同样，用9—0无创缝合线将供心主肺动脉与下腔静脉切口对角缝合两针。然后在下腔静脉腔内从右向左连续缝合内侧壁，继而从左向右在下腔静脉腔外缝合外侧壁(图3)，针距和边距均为0.3～0.5mm。
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图3 将供心主肺动脉与下腔静脉吻合
缝合最后2针前，用钝性弯针头向吻合口腔内注入25u/ml肝素生理盐水，排除残留空气，以防气栓形成。
吻合完毕，松开两把微血管钳，供心可在1～3min内复跳。供心总缺血时间为20～30min。吻合后将肠管复位，常规从腹壁静脉输入生理盐水1ml/100g大鼠。分两层缝合腹腔。
三、术后观察
1.触诊 术后观察主要采用腹壁外触诊法，移植成功后，近期心跳有力且心脏富有弹性，随着时间的延长，则心跳乏力，心脏变硬。
2.心电图 术前对受体常规进行心电图检查，对每例移植成功的大鼠从术后第1天起隔天行心电图检查。心电图检查在乙醚麻醉下进行：将针式电极分别刺入大鼠四肢及心尖处皮下，记录各导联心电图(图4)。由于体内有两个心脏，心电图波形可出现协同或抑制现象。有排斥反应发生时，移植心的心率可变慢。
, 百拇医药
图4 移植心导联心电图A：正常大鼠B：移植
后3天(协同与抑制交替)C：移植后7天(协同)
结 果
1.成功率及存活情况 以腹膜外触诊的方法来判断移植心存活情况，将术后受体和移植心均存活1天以上做为手术成功的标志。正式实验40例，其中同品系之间的移植和不同品系之间的移植各为20例，且移植心存活1天以上者均为17例，其总成功率为85%(34/40)，同品系移植心1个月存活率为70.5%(12/17)。不同品系移植成功17例，对其中10例进行了移植心存活情况观察，结果移植心停跳高峰在6～10天之间(表1)。 表1 移植心停跳高峰
术后天数
3
6
, 百拇医药
8
9
10
11
12
移植心停跳例数
1
2
2
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2.病理 对7例不同品系移植的大鼠，分别于术后第1天，第3天，第5天，第7天，第9天，第11天等不同时点进行病理检查，其中术后第3天和第7天各为2例，余均为1例。通过病理检查发现，其大体解剖可见移植心和肠管、大网膜等周围组织粘连，移植心的颜色较暗，水肿，变硬。病理切片显示，心肌组织内有大量的淋巴细胞和单核细胞浸润(图5)。
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3.术式的沿改及本实验的简化特点
1933年Mann等[5]对哺乳动物设计了冠状循环途径：受体动脉→供心升主动脉→冠状动脉→心肌→冠状静脉→右心房→右心室→肺动脉→受体静脉。1964年Abbott等[1]用这种循环模式进行了大白鼠的腹腔异位心脏移植术，其后很多学者又对其进行了改进[2～4]，但所有改进均离不开复杂的显微放大和降温设备，以及均是先准备供心，供心缺血时间长。对此，我们做了如下改进和简化：①不用显微放大装置，整个手术均在肉眼下进行。②手术过程中不要特殊的降温设备。③先准备受体，后切取供心。④从下腔静脉注入肝素使供体肝素化。⑤供心主肺动脉切断部位选在横窦处。⑥供体胸腔打开时选择正中切口。⑦灵活选择吻合口部位。⑧术后不输血及血浆代用品，常规从腹壁静脉输入生理盐水。 讨 论
由于大鼠心脏异位移植模型具有明显的手术成败标志，即复跳-成功，不复跳-失败，停跳-免疫排斥反应的终点。所以这种模型在免疫排斥反应的研究、以及病理、心肌保护等基础研究中倍受青睐。通过简化，使该手术在只有几把简单的显微器械的情况下即可进行。
, 百拇医药
手术失败的原因一是受体死亡，其次是供心不能复跳。受体死亡的原因主要有两个：一是吻合口漏血；其次是吻合口处静脉血流受阻。为此，我们强调：手术区暴露要充分；受体的腹主动脉和下腔静脉切口要稍长于供心升主动脉和主肺动脉横径，以便吻合；操作要轻柔，把握好针距和边距；吻合线最好用9-0为宜。供心不能复跳的主要原因是供心缺血时间过长，为此，我们采取了下列措施：打开胸腔时立即向胸腔内加入生理盐水冰块，尽量减少热缺血时间；先准备受体，缩短供心缺血时间。在手术过程中将共心置于2棉片之间，上覆以冰块，使供心始终处在冰水中，这样既经济又简单，且效果非常满意。
吻合口部位的选择要以手术操作便利为准，不拒泥于腰静脉以上或以下。必要时可结扎下腔静脉向背侧的1～2支分支。术中术后不输血和血浆代用品，但手术后适当的补液是非常必要的。我们常规在吻合完毕后从腹壁静脉输入生理盐水1ml/100g大鼠。
总之，大鼠心脏异位移植模型越来越被广泛地应用于各种基础研究。我们相信，随着术式的简化，这种模型在各种基础研究中的应用前景会越来越光明。
, 百拇医药
*本课题受国家自然科学基金资助，批准号39670720
参考文献
1 Abbott CP, Edward S.Lindse ES, Creech，O，et al.A t echnique for Heart Transplantation in the Rat.Arch of Surg,1964,89:645.
2 Oho k,Lindsey ES.Improved technique of heart transplantation in rats. J Thorac Cardiovasc Surg,1969,57:225.
3 陈忠华，何藕聪，钟妙英，等.改进的大白鼠同种异位心脏移植术.中华器官移植杂志 ，1982，3(1)：38.
4 徐志云，张保仁，朱家麟，等.改进的大鼠异位心脏移植术：第二军医大学学报，1992 ，13(2)：116.
5 Mann FC.Tramsplantation of the intact mammalian heart.Arch Surg,1933,26:219.
(1998-12-09收稿)
(1999-01-25修回), 百拇医药