谈使用透射式电镜提高生物样品观察效果的方法
作者：刘英芹 侯丽然 齐亚玲 刘英杰
单位：刘英芹(佳木斯大学基础医学院)；侯丽然(佳木斯大学基础医学院)；齐亚玲(佳木斯大学基础医学院)；刘英杰(佳木斯市第二人民医院)
关键词：透射式电镜；生物样品
透射式电镜较普遍地用于观察生物样品
透射式电镜较普遍地用于观察生物样品，其成像效果主要决定于样品质量和电镜性能两个方面。电镜使用者在观察过程中一定要注意保护样品，尽量减少样品受电子照射的量，其次是要有良好的合轴操作，保证机器处在最佳状态。
1 保护样品
透射式电镜的成像原理可由附图表示。
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附图 透射式电镜成像原理图
由图可见，在透射式电镜中，电子束直接轰击样品、部分入射电子穿透样品并发生散射，成为散射电子(也称透射电子)。透射电子的数量及散射角度与样品的质量厚度有关(质量厚度＝样品质量×样品厚度)，所以荧光屏上的电镜图像反映了样品的质量厚度。电镜中生物样品的特点是结构柔软，超薄(均在1nm以下)，电子束对样品的轰击会使样品产生热效应，过度的照射可导致样品受热变形。因此注意保护样品，尽量减少样品受电子束的照射是我们观察生物样品时应遵循的首要原则。为减少样品所受的电子照射量，首先应有效地缩短寻找样品的时间。在电镜观察中，寻找样品花费的时间占整个上镜时间的60%以上。缩短寻找样品的时间就能大大地减少样品受照射的量。电镜观察和光镜不同，往往由于放大倍数高而分不清各部分的关系，也确定不了是什么结构。为了准确快速地寻找到样品中有价值的部分应采用先低倍低压后高倍高压的观察顺序，同时充分利用CRT屏上的位置指示器。具体做法是：首先在更换样品之前，须将位置指示标志移至CRT屏中心，这样就使更换的样品处在可移动范围的中心位置，当样品前后左右移动时，我们能最大范围地观察到样品。其次是装上样品以后不要急于观察，应先放下物镜光栏，再按下Lowmag(最低倍)钮，观察样品的全貌。最后选择视野中亮度适中的位点，将其位置标记在CRT屏的page-2中。(视野中太亮的位点可能是没有任何组织，只有承载膜；而太暗的位点往往是被污染的地方)。以上操作都完成之后，再选择某个已做了标记的位点，将其移至视野中心，开始正式观察。当一个位点观察完之后，可根据预先所做的标记，将样品移到CRT屏中心位置，继续一个新视野的观察。这种寻找样品的方式克服了直接观察的盲目性，做到有的放矢，缩短了寻找样品的时间，有效地减少了样品受照射量。
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2 电镜性能
除了在观察中遵循保护样品，减少照射的原则以外，还要在拍照之前，重新进行部分合轴操作，以求获得高分辨率，高放大倍数的照片。高质量的照片是电镜观察圆满成功的标志。这些操作包括：①物镜象散必须完全校正。随着时间的推移，像散的方向和数量会发生改变，因此拍照前一定要重新消像散。物镜象散校正不完全时，不管怎样调焦，由于焦点不对称，总也得不到清楚的图像。象散校正，用比照相倍率更高的放大倍率进行，因此一旦像散校正完毕之后，在低于放大倍率摄影时，并没有必要再进行校正。②要充分聚焦，拍照前重新聚焦是因为照相机底片上的乳胶颗粒比荧光屏上的颗粒要小得多，其分辨率比荧光屏要高，往往在荧光屏上看不出的细节，曝光后在底片上可以显示出来。为了在高放大倍数时也能充分聚焦，可把菲涅耳条纹(过焦点或欠焦点的)与背景的微小质点象合用，也就是先在欠焦点的范围内正确聚焦，然后把质点象的反差调到最小，而进行更细微的调焦(调成正焦点)。另外，在高放大倍率下，图象把焦点的差异错看成试样微细结构的情况较多，所以有必要拍照略改变焦点的一组照片(变焦法)，从中再选出最佳焦点的照片。
(收稿：1999-10-21), http://www.100md.com
单位：刘英芹(佳木斯大学基础医学院)；侯丽然(佳木斯大学基础医学院)；齐亚玲(佳木斯大学基础医学院)；刘英杰(佳木斯市第二人民医院)
关键词：透射式电镜；生物样品
透射式电镜较普遍地用于观察生物样品
透射式电镜较普遍地用于观察生物样品，其成像效果主要决定于样品质量和电镜性能两个方面。电镜使用者在观察过程中一定要注意保护样品，尽量减少样品受电子照射的量，其次是要有良好的合轴操作，保证机器处在最佳状态。
1 保护样品
透射式电镜的成像原理可由附图表示。
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附图 透射式电镜成像原理图
由图可见，在透射式电镜中，电子束直接轰击样品、部分入射电子穿透样品并发生散射，成为散射电子(也称透射电子)。透射电子的数量及散射角度与样品的质量厚度有关(质量厚度＝样品质量×样品厚度)，所以荧光屏上的电镜图像反映了样品的质量厚度。电镜中生物样品的特点是结构柔软，超薄(均在1nm以下)，电子束对样品的轰击会使样品产生热效应，过度的照射可导致样品受热变形。因此注意保护样品，尽量减少样品受电子束的照射是我们观察生物样品时应遵循的首要原则。为减少样品所受的电子照射量，首先应有效地缩短寻找样品的时间。在电镜观察中，寻找样品花费的时间占整个上镜时间的60%以上。缩短寻找样品的时间就能大大地减少样品受照射的量。电镜观察和光镜不同，往往由于放大倍数高而分不清各部分的关系，也确定不了是什么结构。为了准确快速地寻找到样品中有价值的部分应采用先低倍低压后高倍高压的观察顺序，同时充分利用CRT屏上的位置指示器。具体做法是：首先在更换样品之前，须将位置指示标志移至CRT屏中心，这样就使更换的样品处在可移动范围的中心位置，当样品前后左右移动时，我们能最大范围地观察到样品。其次是装上样品以后不要急于观察，应先放下物镜光栏，再按下Lowmag(最低倍)钮，观察样品的全貌。最后选择视野中亮度适中的位点，将其位置标记在CRT屏的page-2中。(视野中太亮的位点可能是没有任何组织，只有承载膜；而太暗的位点往往是被污染的地方)。以上操作都完成之后，再选择某个已做了标记的位点，将其移至视野中心，开始正式观察。当一个位点观察完之后，可根据预先所做的标记，将样品移到CRT屏中心位置，继续一个新视野的观察。这种寻找样品的方式克服了直接观察的盲目性，做到有的放矢，缩短了寻找样品的时间，有效地减少了样品受照射量。
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2 电镜性能
除了在观察中遵循保护样品，减少照射的原则以外，还要在拍照之前，重新进行部分合轴操作，以求获得高分辨率，高放大倍数的照片。高质量的照片是电镜观察圆满成功的标志。这些操作包括：①物镜象散必须完全校正。随着时间的推移，像散的方向和数量会发生改变，因此拍照前一定要重新消像散。物镜象散校正不完全时，不管怎样调焦，由于焦点不对称，总也得不到清楚的图像。象散校正，用比照相倍率更高的放大倍率进行，因此一旦像散校正完毕之后，在低于放大倍率摄影时，并没有必要再进行校正。②要充分聚焦，拍照前重新聚焦是因为照相机底片上的乳胶颗粒比荧光屏上的颗粒要小得多，其分辨率比荧光屏要高，往往在荧光屏上看不出的细节，曝光后在底片上可以显示出来。为了在高放大倍数时也能充分聚焦，可把菲涅耳条纹(过焦点或欠焦点的)与背景的微小质点象合用，也就是先在欠焦点的范围内正确聚焦，然后把质点象的反差调到最小，而进行更细微的调焦(调成正焦点)。另外，在高放大倍率下，图象把焦点的差异错看成试样微细结构的情况较多，所以有必要拍照略改变焦点的一组照片(变焦法)，从中再选出最佳焦点的照片。
(收稿：1999-10-21), http://www.100md.com