分光光度法测定大豆磷脂中磷的含量
作者：马金玲 张红军 蹇小兵
单位：马金玲(大连弘丰制药厂 116052)；张红军(大连弘丰制药厂 116052)；蹇小兵(佳木斯市晨星制药厂)
关键词：分光光度法；磷；大豆磷脂
提要 目的
提要 目的：研究分光光度法测定大豆磷脂中磷的含量。方法：将样品中的有机磷酸化合物分解转化为无机磷酸盐，再利用在酸性溶液中磷酸盐与钼酸铵及Fiske-Subbarow试剂作用生成蓝色的化合物，在660nm处用分光光度法测定。结果：磷的浓度在0.04ug/ml-0.16ug/ml之间线性关系良好，相关系数r=0.9999，平均回收率为100.1%，RSD=0.57%(n=9)。结论：本方法简便、准确、重现性好。
Determination of phosphorus level in soya lecithin by spectrophotometry
, 百拇医药
Ma Jinling,et al
Abstract Objective:To develop an assay for the determination of phosphorus level in soya lecithin by spectrophotometry.Methods:Spectrophotometry was selected to determine the phosphorus level in soya lecithin,based on the formation of the blue complex by phosphate with ammonium molybdate and Fiske-Subbarow reagent in acid solution.Resulits:The linearity for phosphorus was ranged over 0.04～0.16ug/ml with r=0.9999,the average recovery of 100.1% and RSD of 0.57% (n=9).Conclusion:The method was proved to be simple,precise and reproduciable.
, 百拇医药
Key words soya lecithin,phosphorus,spectrophotometry
大豆磷脂主要用于神经衰弱，动脉硬化，亦可用乳剂基质[1]。黑龙江省药品标准(1987～1993)中，对大豆磷脂的含量测定系采用硫酸-硝酸小火下加热分解成无机磷酸盐，在酸性条件下加氯化铵及氯化镁使生成焦性磷酸镁沉淀，用重量法测其含量。此法操作复杂，重现性差，本文根据无机磷酸盐与钼铵作用生成磷钼酸铵，再经还原形成钼蓝，在660nm，用分光光度法测定其含量。
1 仪器、试剂与药品
可见紫外分光光度计WD-800(北京分析仪器厂)；大豆磷脂(市售)；钼酸铵(分析纯)；无水磷酸氢二钠(基准物)；无水亚硫酸钠(分析纯)；亚硫酸氢钠(分析纯)；1-氨基-2-萘酸-磺酸(分析纯)。
2 方法与结果
, http://www.100md.com
2.1 测定方法
对照品溶液的制备：取以115℃干燥至恒重的无水磷酸氢二钠对照品适量，精密称取，加水溶解至定量稀释制成每1ml含0.04磷的溶液即得。供试品的制备：取大豆磷脂约0.1g，精密称定，加乙醚2ml使溶解，加乙醇10ml，混匀，加水稀释至50ml即得。Fiske-Subbarow试液的配制[2]：将0.5g 1-萘酚-2-氨基-4-磺酸钠溶于195ml 15%亚硫酸氢钠溶液和5ml 20%亚硫酸钠溶液中。若严密加塞防止二氧化硫的损失，此溶液可稳定数周。测定法：精密称取供试液及对照品液各0.1ml，加入硫酸0.5ml，电炉上(300℃)加热约5min放冷，加入10%高氯酸0.5ml，再加热至浅黄色(约5min)，放冷，加入新制钼酸铵溶液10ml，Fiske-Subbarow试液1.25ml，用力振摇，沸水浴上加热1min冷至室温，加水稀释至50ml以水0.1ml同法操作的溶液作空白，在660nm处测吸收度，计算，即得。
, 百拇医药 2.2 测定波长的选择
根据文献[2]记载，选择波长为660nm。
2.3 Fiske-Subbarow试液用量的选择
按2.1 所述操作，仅改变Fiske-Subbarow试液用量进行试验，结果表明Fiske-Subbarow试液的用量在1.0～1.6ml范围内吸收度保持稳定且最大，故Fiske-Subbarow试液用量定为1.25ml。
2.4 线性关系考察
取对照品加水稀释成0.04ug/ml，0.06ug/ml，0.08ug/ml，0.10ug/ml，0.12ug/ml，0.16ug/ml的对照品溶液，照分光光度法测定吸收度，计算结果表明，磷的浓度在0.04ug/ml～0.16ug/ml之间的线性关系良好，其回归方程为A=1.4×10-3+4.76C，r=0.9999。
, 百拇医药
2.5 回收率试验
取对照品采用加样回收方法测定回收率，平均回收率为100.1%，RSD为0.57(n=9)。
2.6 两种方法重现性试验及统计分析
取市售大豆磷脂一批，依上述测定法及法定大豆磷脂含量测定法重复测定5次，结果见表1。
表1 两种方法重现性试验结果(%)
本法测定结果
法定方法测定结果
3.01
2.99
3.00
, http://www.100md.com
2.84
3.03
3.00
3.00
2.94
3.02
3.05
平均值
3.012
2.964
RSD%
0.43
2.68
, http://www.100md.com
以上结果，平均值t检验得结果表明t0.05,8，说明这两个平均结果之间没有显著差别，也就是说，这两种方法可以互相代替。F检验表明F>F0.054,4，说明两种方法的精密度有显著差异。
3 讨论
由以上分析可知，本法操作方便、迅速、精密度高、重现性好，测定结果与法定方法无显著差异，可替代法定方法。法定方法操作繁琐，中间过程容易损失，结果亦造成偏低，精密度亦不如本法。
参考文献
1，黑龙江省卫生厅黑龙江省药品标准汇编.(1987～1993)
2，楼书聪.化学试剂配制手册.南京:江苏科学技术出版社,1993
(收稿：1999-09-01), http://www.100md.com
单位：马金玲(大连弘丰制药厂 116052)；张红军(大连弘丰制药厂 116052)；蹇小兵(佳木斯市晨星制药厂)
关键词：分光光度法；磷；大豆磷脂
提要 目的
提要 目的：研究分光光度法测定大豆磷脂中磷的含量。方法：将样品中的有机磷酸化合物分解转化为无机磷酸盐，再利用在酸性溶液中磷酸盐与钼酸铵及Fiske-Subbarow试剂作用生成蓝色的化合物，在660nm处用分光光度法测定。结果：磷的浓度在0.04ug/ml-0.16ug/ml之间线性关系良好，相关系数r=0.9999，平均回收率为100.1%，RSD=0.57%(n=9)。结论：本方法简便、准确、重现性好。
Determination of phosphorus level in soya lecithin by spectrophotometry
, 百拇医药
Ma Jinling,et al
Abstract Objective:To develop an assay for the determination of phosphorus level in soya lecithin by spectrophotometry.Methods:Spectrophotometry was selected to determine the phosphorus level in soya lecithin,based on the formation of the blue complex by phosphate with ammonium molybdate and Fiske-Subbarow reagent in acid solution.Resulits:The linearity for phosphorus was ranged over 0.04～0.16ug/ml with r=0.9999,the average recovery of 100.1% and RSD of 0.57% (n=9).Conclusion:The method was proved to be simple,precise and reproduciable.
, 百拇医药
Key words soya lecithin,phosphorus,spectrophotometry
大豆磷脂主要用于神经衰弱，动脉硬化，亦可用乳剂基质[1]。黑龙江省药品标准(1987～1993)中，对大豆磷脂的含量测定系采用硫酸-硝酸小火下加热分解成无机磷酸盐，在酸性条件下加氯化铵及氯化镁使生成焦性磷酸镁沉淀，用重量法测其含量。此法操作复杂，重现性差，本文根据无机磷酸盐与钼铵作用生成磷钼酸铵，再经还原形成钼蓝，在660nm，用分光光度法测定其含量。
1 仪器、试剂与药品
可见紫外分光光度计WD-800(北京分析仪器厂)；大豆磷脂(市售)；钼酸铵(分析纯)；无水磷酸氢二钠(基准物)；无水亚硫酸钠(分析纯)；亚硫酸氢钠(分析纯)；1-氨基-2-萘酸-磺酸(分析纯)。
2 方法与结果
, http://www.100md.com
2.1 测定方法
对照品溶液的制备：取以115℃干燥至恒重的无水磷酸氢二钠对照品适量，精密称取，加水溶解至定量稀释制成每1ml含0.04磷的溶液即得。供试品的制备：取大豆磷脂约0.1g，精密称定，加乙醚2ml使溶解，加乙醇10ml，混匀，加水稀释至50ml即得。Fiske-Subbarow试液的配制[2]：将0.5g 1-萘酚-2-氨基-4-磺酸钠溶于195ml 15%亚硫酸氢钠溶液和5ml 20%亚硫酸钠溶液中。若严密加塞防止二氧化硫的损失，此溶液可稳定数周。测定法：精密称取供试液及对照品液各0.1ml，加入硫酸0.5ml，电炉上(300℃)加热约5min放冷，加入10%高氯酸0.5ml，再加热至浅黄色(约5min)，放冷，加入新制钼酸铵溶液10ml，Fiske-Subbarow试液1.25ml，用力振摇，沸水浴上加热1min冷至室温，加水稀释至50ml以水0.1ml同法操作的溶液作空白，在660nm处测吸收度，计算，即得。
, 百拇医药 2.2 测定波长的选择
根据文献[2]记载，选择波长为660nm。
2.3 Fiske-Subbarow试液用量的选择
按2.1 所述操作，仅改变Fiske-Subbarow试液用量进行试验，结果表明Fiske-Subbarow试液的用量在1.0～1.6ml范围内吸收度保持稳定且最大，故Fiske-Subbarow试液用量定为1.25ml。
2.4 线性关系考察
取对照品加水稀释成0.04ug/ml，0.06ug/ml，0.08ug/ml，0.10ug/ml，0.12ug/ml，0.16ug/ml的对照品溶液，照分光光度法测定吸收度，计算结果表明，磷的浓度在0.04ug/ml～0.16ug/ml之间的线性关系良好，其回归方程为A=1.4×10-3+4.76C，r=0.9999。
, 百拇医药
2.5 回收率试验
取对照品采用加样回收方法测定回收率，平均回收率为100.1%，RSD为0.57(n=9)。
2.6 两种方法重现性试验及统计分析
取市售大豆磷脂一批，依上述测定法及法定大豆磷脂含量测定法重复测定5次，结果见表1。
表1 两种方法重现性试验结果(%)
本法测定结果
法定方法测定结果
3.01
2.99
3.00
, http://www.100md.com
2.84
3.03
3.00
3.00
2.94
3.02
3.05
平均值
3.012
2.964
RSD%
0.43
2.68
, http://www.100md.com
以上结果，平均值t检验得结果表明t
3 讨论
由以上分析可知，本法操作方便、迅速、精密度高、重现性好，测定结果与法定方法无显著差异，可替代法定方法。法定方法操作繁琐，中间过程容易损失，结果亦造成偏低，精密度亦不如本法。
参考文献
1，黑龙江省卫生厅黑龙江省药品标准汇编.(1987～1993)
2，楼书聪.化学试剂配制手册.南京:江苏科学技术出版社,1993
(收稿：1999-09-01), http://www.100md.com