类胰升血糖素肽-1免疫细胞在大鼠和胎儿胃肠道的分布
作者：王树山 李艳君 刘宋玲
单位：王树山(佳木斯大学基础医学院)；李艳君(佳木斯大学基础医学院)；刘宋玲(双鸭山矿务局总医院)
关键词：类胰升血糖素肽-1；胃肠道；免疫组织化学；大鼠
黑龙江医药科学000107
提要 为了研究类胰升血糖素肽-1(Glucagon-like peptide,GLP-1)免疫细胞在大鼠和胎儿胃肠道中的分布情况，应用免疫组织化学ABC法，对大鼠和胎儿胃肠道中GLP-1进行研究。结果表明，大鼠胃肠道中GLP-1免疫细胞密度最大的是回肠，其次是结肠和直肠，胎儿胃肠道中GLP-1免疫细胞密度最大的是直肠，其次是结肠和回肠。
Location of glucagon-like peptide-1 immunoreactive ceus in the gastrointestinal tract of rat and foetus
, http://www.100md.com
Wang Shushan,et al
Abstract The localization of GLP-1 immunoreactive cells of gastrointestinal tract of rat and foetus were studlied by immunohistochemical ABC method.The results indicated that the hightest GLP-1 immunoreactive cells density of rat occurred in the ileum,next in the colon and rectum,the hightest GLP-1 immunoreactive cells censity of foetus occurred in the rectum,next in the colon and ileum.
Key words Glucagon-like peptide-1;gastrointestinal tract;immunohistochemistry
, 百拇医药
类胰升糖素肽-1(GLP-1)是一种新发现的作用很强的肠道肽类激素[1]，是肠道胰升血糖素前体翻译后修饰的产物。由肠道内分泌细胞分泌，主要分布在远端肠管，并在餐后释放入血，通过与特异性GLP-1受体结合发挥其生物学作用。本实验应用免疫组织化学ABC法，观察了大鼠和胎儿胃肠道中GLP-1免疫细胞分布情况，为进一步研究GLP-1奠定基础。
1 材料和方法
1.1 取材及标本制备
取Wistar大鼠6只和新鲜水囊引产胎儿5例的各段肠管(十二指肠、空肠、回肠、升结肠、横结肠、降结肠和直肠)、胃窦和胃体，入Bouin液固定24h，常规石蜡包埋，制成5um厚的连续切片。
1.2 免疫组织化学染色
采用免疫组织化学ABC法染色。第一抗体为抗GLP-1(7～36)酰胺抗体，稀释度为1:4000，37℃温育1h。第二抗体为生物素标记的抗免血清，稀释度为1:50，37℃温育30min。ABC复合物，稀释度为1:50，37℃温育30min。反应后用DAB显色，常规脱水、透明和封片，显微镜下观察并计数。以PBS缓冲液代替第一抗体作为阴性对照。
, 百拇医药
2 结果
光镜下，在大鼠和胎儿肠壁内，可见GLP-1免疫细胞的染色呈棕红色，散在分布于肠腺柱状绒毛上皮细胞之间，大多数位于肠腺的基底部(图1～2)。只在大鼠的胃体内发现少量的GLP-1免疫细胞存在，在胎儿胃内未见GLP-1免疫细胞。经统计学分析，各段肠管的GLP-1免疫细胞密度不同，总体存在显著性差异。大鼠中，GLP-1免疫细胞密度最大是回肠，其次是结肠和直肠。胎儿中，GLP-1免疫细胞密度最大是直肠，其次是结肠和回肠(附表)。因此，GLP-1免疫细胞自小肠和大肠近端向远端部分逐渐增加。在阴性对照片上未见GLP-1免疫细胞。
附表 大鼠及胎儿胃肠道GLP-1免疫细胞
密度(
±s,细胞数/400倍视野)
Position
, 百拇医药
大鼠(n=6)
胎儿(n=5)
Corpus
0.22±0.42
0
Duodeum
0.46±0.052
0.16±0.37
Jejunum
1.58±0.81
1.52±0.61
Ileum
, 百拇医药
3.64±1.69
1.86±0.73
Colon ascendens
1.88±0.82
1.76±0.69
Colon transversum
1.90±0.79
1.90±0.84
Colon descendens
2.92±1.10
2.40±0.78
, 百拇医药
Rectum
2.54±1.16
2.98±1.20
图1 大鼠回肠GLP-1免疫细胞(10×40)
图2 胎儿直肠GLP-1免疫细胞(10×40)
3 讨论
所有的肽类激素都来源于大的前体分子，即所谓的“前体激素”。GLP-1的前体激素是胰升血糖类前体激素，即胰升血糖素前体。它在不同组织内化学修饰后形成各自不同的终产物[2]。在肠道L细胞中，胰升血糖素前体主要分解成Glicentin和两个较短的肽GLP-1和GLP-2[3]，GLP-1有两种形式，即GLP-1(1～37)和GLP-1(7～37)，其中部分GLP-1(7～37)的分子C端一个氨基酸发生酰胺化，生成GLP-1(7-36)酰胺。此酰胺由肠道的内分泌细胞分泌，刺激胰岛素的分泌，抑制胰升血糖素的释放，可见，GLP-1是由肠道L细胞分泌，并主要以GLP-1(7-36)酰胺形式存在。本实验结果表明，GLP-1免疫细胞在不同种属的胃肠道含量不同，鼠比胎儿含量高。在胃肠道中，GLP-1免疫细胞主要存在于胃体的类A细胞中和肠道的L细胞中。关于GLP-1免疫细胞分布趋势上，本实验结果与Eissels等[4]的实验结果相一致，即GLP-1免疫细胞主要存在于远端肠管，从小肠和大肠的近端向远端部分呈递增的趋势。在肠管中，GLP-1免疫细胞不仅存在于空肠、回肠、结肠和直肠，而且也存在于十二指肠。特别是在胎儿的十二指肠中，发现有少量的GLP-1免疫细胞的存在。目前，GLP-1成为非胰岛素依赖型糖尿病治疗新手段受到了很大的关注[5]。
, 百拇医药
参考文献
1，Nauck MA,Bortels E,et al.Additive insulinitropic effects of exogenous synthetic human gastric inhibitory polypeptide and glucagon-like peptide-1(7-36) amide infused at near-physiological insulinotropic hormone and glucose concentrations.J clin Endocrinol Metab,1993,76:912
2，Mojsov S,Heinrich G,Willson B,et al.Preproglucagon gene expression in pancreas and intestine diversifies at the level of posttranscriptional processing.J Biol Chem,1986,261:1180
, http://www.100md.com
3，Goke,Fehmann HC,Glucagon-Like peptide-1(7-36) amide is a new incretin.Eur J Clin Invest 1991,21,135
4，Eissele R,Goke R,Willemer S,et al.Glucagon-like peptide-1(7-26) cells in the gastrointestinal tract and pancreas of rat,pig and man ,Eur J clin Invest,1992,22,283
5，Amiel SA.Glucagon-like peptide:a therapeutic glimmer.Lancet,1994,343,4
(收稿：1999-10-15), 百拇医药
单位：王树山(佳木斯大学基础医学院)；李艳君(佳木斯大学基础医学院)；刘宋玲(双鸭山矿务局总医院)
关键词：类胰升血糖素肽-1；胃肠道；免疫组织化学；大鼠
黑龙江医药科学000107
提要 为了研究类胰升血糖素肽-1(Glucagon-like peptide,GLP-1)免疫细胞在大鼠和胎儿胃肠道中的分布情况，应用免疫组织化学ABC法，对大鼠和胎儿胃肠道中GLP-1进行研究。结果表明，大鼠胃肠道中GLP-1免疫细胞密度最大的是回肠，其次是结肠和直肠，胎儿胃肠道中GLP-1免疫细胞密度最大的是直肠，其次是结肠和回肠。
Location of glucagon-like peptide-1 immunoreactive ceus in the gastrointestinal tract of rat and foetus
, http://www.100md.com
Wang Shushan,et al
Abstract The localization of GLP-1 immunoreactive cells of gastrointestinal tract of rat and foetus were studlied by immunohistochemical ABC method.The results indicated that the hightest GLP-1 immunoreactive cells density of rat occurred in the ileum,next in the colon and rectum,the hightest GLP-1 immunoreactive cells censity of foetus occurred in the rectum,next in the colon and ileum.
Key words Glucagon-like peptide-1;gastrointestinal tract;immunohistochemistry
, 百拇医药
类胰升糖素肽-1(GLP-1)是一种新发现的作用很强的肠道肽类激素[1]，是肠道胰升血糖素前体翻译后修饰的产物。由肠道内分泌细胞分泌，主要分布在远端肠管，并在餐后释放入血，通过与特异性GLP-1受体结合发挥其生物学作用。本实验应用免疫组织化学ABC法，观察了大鼠和胎儿胃肠道中GLP-1免疫细胞分布情况，为进一步研究GLP-1奠定基础。
1 材料和方法
1.1 取材及标本制备
取Wistar大鼠6只和新鲜水囊引产胎儿5例的各段肠管(十二指肠、空肠、回肠、升结肠、横结肠、降结肠和直肠)、胃窦和胃体，入Bouin液固定24h，常规石蜡包埋，制成5um厚的连续切片。
1.2 免疫组织化学染色
采用免疫组织化学ABC法染色。第一抗体为抗GLP-1(7～36)酰胺抗体，稀释度为1:4000，37℃温育1h。第二抗体为生物素标记的抗免血清，稀释度为1:50，37℃温育30min。ABC复合物，稀释度为1:50，37℃温育30min。反应后用DAB显色，常规脱水、透明和封片，显微镜下观察并计数。以PBS缓冲液代替第一抗体作为阴性对照。
, 百拇医药
2 结果
光镜下，在大鼠和胎儿肠壁内，可见GLP-1免疫细胞的染色呈棕红色，散在分布于肠腺柱状绒毛上皮细胞之间，大多数位于肠腺的基底部(图1～2)。只在大鼠的胃体内发现少量的GLP-1免疫细胞存在，在胎儿胃内未见GLP-1免疫细胞。经统计学分析，各段肠管的GLP-1免疫细胞密度不同，总体存在显著性差异。大鼠中，GLP-1免疫细胞密度最大是回肠，其次是结肠和直肠。胎儿中，GLP-1免疫细胞密度最大是直肠，其次是结肠和回肠(附表)。因此，GLP-1免疫细胞自小肠和大肠近端向远端部分逐渐增加。在阴性对照片上未见GLP-1免疫细胞。
附表 大鼠及胎儿胃肠道GLP-1免疫细胞
密度(
±s,细胞数/400倍视野)Position
, 百拇医药
大鼠(n=6)
胎儿(n=5)
Corpus
0.22±0.42
0
Duodeum
0.46±0.052
0.16±0.37
Jejunum
1.58±0.81
1.52±0.61
Ileum
, 百拇医药
3.64±1.69
1.86±0.73
Colon ascendens
1.88±0.82
1.76±0.69
Colon transversum
1.90±0.79
1.90±0.84
Colon descendens
2.92±1.10
2.40±0.78
, 百拇医药
Rectum
2.54±1.16
2.98±1.20
图1 大鼠回肠GLP-1免疫细胞(10×40)
图2 胎儿直肠GLP-1免疫细胞(10×40)
3 讨论
所有的肽类激素都来源于大的前体分子，即所谓的“前体激素”。GLP-1的前体激素是胰升血糖类前体激素，即胰升血糖素前体。它在不同组织内化学修饰后形成各自不同的终产物[2]。在肠道L细胞中，胰升血糖素前体主要分解成Glicentin和两个较短的肽GLP-1和GLP-2[3]，GLP-1有两种形式，即GLP-1(1～37)和GLP-1(7～37)，其中部分GLP-1(7～37)的分子C端一个氨基酸发生酰胺化，生成GLP-1(7-36)酰胺。此酰胺由肠道的内分泌细胞分泌，刺激胰岛素的分泌，抑制胰升血糖素的释放，可见，GLP-1是由肠道L细胞分泌，并主要以GLP-1(7-36)酰胺形式存在。本实验结果表明，GLP-1免疫细胞在不同种属的胃肠道含量不同，鼠比胎儿含量高。在胃肠道中，GLP-1免疫细胞主要存在于胃体的类A细胞中和肠道的L细胞中。关于GLP-1免疫细胞分布趋势上，本实验结果与Eissels等[4]的实验结果相一致，即GLP-1免疫细胞主要存在于远端肠管，从小肠和大肠的近端向远端部分呈递增的趋势。在肠管中，GLP-1免疫细胞不仅存在于空肠、回肠、结肠和直肠，而且也存在于十二指肠。特别是在胎儿的十二指肠中，发现有少量的GLP-1免疫细胞的存在。目前，GLP-1成为非胰岛素依赖型糖尿病治疗新手段受到了很大的关注[5]。
, 百拇医药
参考文献
1，Nauck MA,Bortels E,et al.Additive insulinitropic effects of exogenous synthetic human gastric inhibitory polypeptide and glucagon-like peptide-1(7-36) amide infused at near-physiological insulinotropic hormone and glucose concentrations.J clin Endocrinol Metab,1993,76:912
2，Mojsov S,Heinrich G,Willson B,et al.Preproglucagon gene expression in pancreas and intestine diversifies at the level of posttranscriptional processing.J Biol Chem,1986,261:1180
, http://www.100md.com
3，Goke,Fehmann HC,Glucagon-Like peptide-1(7-36) amide is a new incretin.Eur J Clin Invest 1991,21,135
4，Eissele R,Goke R,Willemer S,et al.Glucagon-like peptide-1(7-26) cells in the gastrointestinal tract and pancreas of rat,pig and man ,Eur J clin Invest,1992,22,283
5，Amiel SA.Glucagon-like peptide:a therapeutic glimmer.Lancet,1994,343,4
(收稿：1999-10-15), 百拇医药