高效液相色谱法测定萘丁美酮的含量
作者：熊发高 汪若跃 刘凯
单位：熊发高 汪若跃 刘凯(江西黎明制药厂质监科 景德镇 333032)
关键词：高效液相色谱法；萘丁美酮；内标法
药物分析杂志000313 摘要 目的：建立高效液相色谱法测定萘丁美酮含量的方法。方法：色谱柱：Spherisorb SiO2，流动相：1，4-二氧六环-环己烷(1∶30)，内标物：β-萘酚，检测波长：254 nm。结果：萘丁美酮的线性范围0.1～1.3 mg.mL-1,r=0.999 4，回收率为100.3%，RSD=0.26%。结论：方法准确、快速、简便。
The Determination of Nabumetone by HPLC
Xiong Fagao，Wang Ruoyue，Liu Kai
, 百拇医药
(Jiangxi Liming Pharmaceutical Factory,Jingdezhen 333032)
Abstract Objective：To develop a HPLC method for the determination of nabumetone.Methods:Spherisorb SiO2 column(5.0 mm×150 mm,5 μm,Dalian Elite Co.)was used with a mobile phase of 1,4-dioxane and cyclohexane(1∶30),β-naphthol was used as internal standard,and UV detector at 254nm.Results:The linear range of nabumetone was 0.1～1.3 mg.mL-1,r=0.999 4.The recovery rate was 100.3%,RSD=0.26%.Conclusion:This method is accurate,rapid and sample for the determination of nabumetone.
, 百拇医药
Key words HPLC,nabumetone,internal standard method
萘丁美酮(Nabumetone)为新一代非类固醇解热、镇痛、抗炎药，主要用于风湿性、类风湿性关节炎和骨关节炎的治疗[1]。目前，国内外对萘丁美酮含量的测定方法主要有羟胺法[2]、紫外分光光度法[3]、高效液相色谱法[4]，也有气相色谱法[5]和重量法[6]的报道。BP 1993 Add 1996开始收载萘丁美酮质量标准，采用高效液相色谱法外标法测定萘丁美酮的含量及有关杂质；本文所述高效液相色谱法，分离效果好而且准确，结果令人满意。
1 仪器与试药
Shimadzu LC-9A高效液相色谱仪，Shimadzu SPD-6AV紫外检测器，Shimadzu C-R4A色谱积分仪，CQ-1K超声波清洗器(上海超声波仪器厂)。
, http://www.100md.com
萘丁美酮原料药(江西黎明制药厂，批号：9805048，9805052，9805054，9806066，9806068；上海某药厂，批号：971001)；萘丁美酮对照品，自制。
环己烷，1，4-二氧六环，β-萘酚，1，2-二氯乙烷，无水乙醇等均为分析纯。
2 色谱条件
Spherisorb硅胶不锈钢液相色谱柱(5.0 mm×150 mm,5 μm，大连依利特公司)，流动相：1，4-二氧六环-环己烷(1∶30)，流速：1.2 mL.min-1，检测波长：254 nm，内标物：β-萘酚。
3 内标物的选择与精制
在既定条件下，分别试用萘、α-萘酚、β-萘酚作内标，结果β-萘酚保留时间(12 min)合适，与样品中各峰有良好的分离，故选作内标物。因市售的β-萘酚杂质较多，需对β-萘酚进行精制，精制方法如下[7，8]：
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将β-萘酚溶于适量的0.1 mol.L-1盐酸中，移至500 mL分液漏斗中，用乙醚提取2～3次，每次15～20 mL，合并乙醚提取液，用新制的5%碳酸氢钠溶液提取2次，其体积为乙醚液的0.1倍，然后用0.1 mol.L-1的氢氧化钠溶液提取2次，体积为乙醚液的0.1倍，合并氢氧化钠液，用0.1 mol.L-1盐酸酸化，再用乙醚抽提，醚层用无水硫酸钠脱水干燥，过滤，蒸去乙醚，用苯适量溶解，加正庚烷至析出结晶，滤过，80 ℃真空干燥，备用。
4 萘丁美酮对照品的制备和纯度检查
取萘丁美酮(含量大于99.0%)适量，用无水乙醇反复精制，60 ℃减压干燥至恒重，照薄层色谱法[9]，以硅胶G为固定相，用甲苯-醋酸乙酯-正己烷(7∶2∶5)为展开剂，展开后晾干，在105 ℃干燥10 min，放冷，喷以10%硫酸乙醇溶液，再在105 ℃干燥10 min后，在365 nm紫外灯下检视，不得有杂质斑点。
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5 线性关系考察
精密称取萘丁美酮的对照品0.5 g置于100 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，即得对照品溶液。
精密称取β-萘酚精制品0.1 g置于50 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，即得内标溶液。
精密量取内标溶液5 mL共7份，分别置于50 mL量瓶中，分别精密加入萘丁美酮对照品溶液1，2，5，8，10，12，13 mL，用流动相稀释至刻度，摇匀，取各溶液20 μL进样，记录色谱图，以萘丁美酮主峰面积和内标峰面积之比Y与萘丁美酮浓度X(mg.mL-1)进行回归分析，得回归方程：
Y=12.53X+0.252 8 r=0.999 4
在0.1～1.3 mg.mL-1范围内峰面积之比与浓度有良好的线性关系。
, 百拇医药
6 回收率的测定
精密称取萘丁美酮对照品约40 mg共5份于50 mL量瓶中，分别加入内标溶液5 mL，用流动相溶解并稀释至刻度，混匀后进样，测定萘丁美酮的含量，计算回收率，测得萘丁美酮的平均回收率为100.3%，RSD=0.35%,n=5。
7 方法的精密度
精密称取对照品约40 mg至50 mL量瓶中，加内标溶液5 mL，用流动相溶解并稀释至刻度，混匀，平行进样5次，计算精密度，结果含量的RSD=0.26%,n=5。
8 样品的测定
精密称取样品及对照品各约40 mg，分别置于50 mL量瓶中，分别精密加入内标溶液5 mL，用流动相溶解并稀释至刻度，取各溶液20 μL进样，记录色谱图，计算萘丁美酮含量，并与BP 1993 Add 1996法、卫生部部标羟胺法及紫外分光光度法比较，结果见表1。色谱图见图1。
, 百拇医药
表1 样品测定结果(%，n=3) 批号
本法
BP 1993 Add 1996
羟胺法
UV法
98050489805052
9805054
9806066
9806068
971001
99.39
99.81
, http://www.100md.com
99.49
99.25
99.26
97.57
99.49
100.88
100.00
99.32
100.41
97.66
99.48
99.66
99.72
, http://www.100md.com
99.66
99.56
99.16
100.95
100.40
99.75
100.04
100.37
101.41
图1 以本法不加内标(A)、加内标(B)及BP 1993
Add 1996法(C)所得的样品(971001)色谱图
, 百拇医药
1.萘丁美酮 2.β-萘酚 3.萘 4.双酮
9 讨论
采用经典的羟胺法测定萘丁美酮的含量时，由于滴定终点颜色变化不明显，终点不易判断，而萘丁美酮又无其它可用于经典容量分析的官能团，故卫生部药品标准WS-394(X-340)-95(试行)采用紫外分光光度法测定含量，但是样品中存在萘、双酮等生产过程中带来的杂质，在262 nm波长处也有吸收，仍影响测定结果；BP 1993 Add 1996采用HPLC外标法测定萘丁美酮的含量，但是流动相中1，2-二氯乙烷毒性较大，且对有些杂质的分离效果欠佳；为此，作者曾采用反相高效液相色谱法，以甲醇-水(1∶1)为流动相对萘丁美酮进行分离，但未能将杂质有效分离；本文所述高效液相色谱法克服了以上各种缺陷，流动相毒性小，对杂质具有良好的分离，效果较为理想，见图1；该法重现性、回收率好，方法可行且操作简便，也可用于有关杂质的检验。
将萘丁美酮与适量0.5 mol.L-1的氢氧化钠溶液混合，加热至沸，用无水乙醚萃取，挥干溶剂，残渣用流动相溶解；另取中间体、粗品适量，分别用流动相溶解。分别进样测定，记录色谱图，结果表明，本法对中间体、粗品及碱处理后的样品仍有理想的分离效果，见图2。
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图2 样品(9806066)的中间体(A)、粗品(B)及碱处理物(C)的色谱图
1.双酮 2.萘丁美酮
刘凯：沈阳药科大学98届毕业生
参考文献
1，王泽民，康葵，冯梅等.当代结构药物全集.第一版.北京：北京科学技术出版社，1993.1100
2，卫生部新药转正式生产标准.WS-042(X-032)-95(试行)
3，卫生部药品标准.WS-394(X-340)-95(试行)
4，BP 1993 Add 1996.1808
5，李平，宁雅君.气相色谱法测定萘丁美酮及其制剂的含量.药物分析杂志，1993，13(2)：96
6，吴联奎，武秀英，黄慧敏等.萘丁美酮分析方法的研究.江西药学，1993，(1)：41
7，沈克温，王绪明，韩永平等.实用药物分离鉴定手册.第一版.北京：人民军医出版社，1986.10
8，(澳大利亚)D.D.佩林，W.L.F.阿马里戈，D.R.佩林.实验室化学药品的提纯方法.第二版.北京：化学工业出版社，1987.75
9，中国药典.1995.二部：附录23
(本文于1999年3月9日收到), 百拇医药
单位：熊发高 汪若跃 刘凯(江西黎明制药厂质监科 景德镇 333032)
关键词：高效液相色谱法；萘丁美酮；内标法
药物分析杂志000313 摘要 目的：建立高效液相色谱法测定萘丁美酮含量的方法。方法：色谱柱：Spherisorb SiO2，流动相：1，4-二氧六环-环己烷(1∶30)，内标物：β-萘酚，检测波长：254 nm。结果：萘丁美酮的线性范围0.1～1.3 mg.mL-1,r=0.999 4，回收率为100.3%，RSD=0.26%。结论：方法准确、快速、简便。
The Determination of Nabumetone by HPLC
Xiong Fagao，Wang Ruoyue，Liu Kai
, 百拇医药
(Jiangxi Liming Pharmaceutical Factory,Jingdezhen 333032)
Abstract Objective：To develop a HPLC method for the determination of nabumetone.Methods:Spherisorb SiO2 column(5.0 mm×150 mm,5 μm,Dalian Elite Co.)was used with a mobile phase of 1,4-dioxane and cyclohexane(1∶30),β-naphthol was used as internal standard,and UV detector at 254nm.Results:The linear range of nabumetone was 0.1～1.3 mg.mL-1,r=0.999 4.The recovery rate was 100.3%,RSD=0.26%.Conclusion:This method is accurate,rapid and sample for the determination of nabumetone.
, 百拇医药
Key words HPLC,nabumetone,internal standard method
萘丁美酮(Nabumetone)为新一代非类固醇解热、镇痛、抗炎药，主要用于风湿性、类风湿性关节炎和骨关节炎的治疗[1]。目前，国内外对萘丁美酮含量的测定方法主要有羟胺法[2]、紫外分光光度法[3]、高效液相色谱法[4]，也有气相色谱法[5]和重量法[6]的报道。BP 1993 Add 1996开始收载萘丁美酮质量标准，采用高效液相色谱法外标法测定萘丁美酮的含量及有关杂质；本文所述高效液相色谱法，分离效果好而且准确，结果令人满意。
1 仪器与试药
Shimadzu LC-9A高效液相色谱仪，Shimadzu SPD-6AV紫外检测器，Shimadzu C-R4A色谱积分仪，CQ-1K超声波清洗器(上海超声波仪器厂)。
, http://www.100md.com
萘丁美酮原料药(江西黎明制药厂，批号：9805048，9805052，9805054，9806066，9806068；上海某药厂，批号：971001)；萘丁美酮对照品，自制。
环己烷，1，4-二氧六环，β-萘酚，1，2-二氯乙烷，无水乙醇等均为分析纯。
2 色谱条件
Spherisorb硅胶不锈钢液相色谱柱(5.0 mm×150 mm,5 μm，大连依利特公司)，流动相：1，4-二氧六环-环己烷(1∶30)，流速：1.2 mL.min-1，检测波长：254 nm，内标物：β-萘酚。
3 内标物的选择与精制
在既定条件下，分别试用萘、α-萘酚、β-萘酚作内标，结果β-萘酚保留时间(12 min)合适，与样品中各峰有良好的分离，故选作内标物。因市售的β-萘酚杂质较多，需对β-萘酚进行精制，精制方法如下[7，8]：
, http://www.100md.com
将β-萘酚溶于适量的0.1 mol.L-1盐酸中，移至500 mL分液漏斗中，用乙醚提取2～3次，每次15～20 mL，合并乙醚提取液，用新制的5%碳酸氢钠溶液提取2次，其体积为乙醚液的0.1倍，然后用0.1 mol.L-1的氢氧化钠溶液提取2次，体积为乙醚液的0.1倍，合并氢氧化钠液，用0.1 mol.L-1盐酸酸化，再用乙醚抽提，醚层用无水硫酸钠脱水干燥，过滤，蒸去乙醚，用苯适量溶解，加正庚烷至析出结晶，滤过，80 ℃真空干燥，备用。
4 萘丁美酮对照品的制备和纯度检查
取萘丁美酮(含量大于99.0%)适量，用无水乙醇反复精制，60 ℃减压干燥至恒重，照薄层色谱法[9]，以硅胶G为固定相，用甲苯-醋酸乙酯-正己烷(7∶2∶5)为展开剂，展开后晾干，在105 ℃干燥10 min，放冷，喷以10%硫酸乙醇溶液，再在105 ℃干燥10 min后，在365 nm紫外灯下检视，不得有杂质斑点。
, http://www.100md.com
5 线性关系考察
精密称取萘丁美酮的对照品0.5 g置于100 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，即得对照品溶液。
精密称取β-萘酚精制品0.1 g置于50 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，即得内标溶液。
精密量取内标溶液5 mL共7份，分别置于50 mL量瓶中，分别精密加入萘丁美酮对照品溶液1，2，5，8，10，12，13 mL，用流动相稀释至刻度，摇匀，取各溶液20 μL进样，记录色谱图，以萘丁美酮主峰面积和内标峰面积之比Y与萘丁美酮浓度X(mg.mL-1)进行回归分析，得回归方程：
Y=12.53X+0.252 8 r=0.999 4
在0.1～1.3 mg.mL-1范围内峰面积之比与浓度有良好的线性关系。
, 百拇医药
6 回收率的测定
精密称取萘丁美酮对照品约40 mg共5份于50 mL量瓶中，分别加入内标溶液5 mL，用流动相溶解并稀释至刻度，混匀后进样，测定萘丁美酮的含量，计算回收率，测得萘丁美酮的平均回收率为100.3%，RSD=0.35%,n=5。
7 方法的精密度
精密称取对照品约40 mg至50 mL量瓶中，加内标溶液5 mL，用流动相溶解并稀释至刻度，混匀，平行进样5次，计算精密度，结果含量的RSD=0.26%,n=5。
8 样品的测定
精密称取样品及对照品各约40 mg，分别置于50 mL量瓶中，分别精密加入内标溶液5 mL，用流动相溶解并稀释至刻度，取各溶液20 μL进样，记录色谱图，计算萘丁美酮含量，并与BP 1993 Add 1996法、卫生部部标羟胺法及紫外分光光度法比较，结果见表1。色谱图见图1。
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表1 样品测定结果(%，n=3) 批号
本法
BP 1993 Add 1996
羟胺法
UV法
98050489805052
9805054
9806066
9806068
971001
99.39
99.81
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99.49
99.25
99.26
97.57
99.49
100.88
100.00
99.32
100.41
97.66
99.48
99.66
99.72
, http://www.100md.com
99.66
99.56
99.16
100.95
100.40
99.75
100.04
100.37
101.41
图1 以本法不加内标(A)、加内标(B)及BP 1993
Add 1996法(C)所得的样品(971001)色谱图
, 百拇医药
1.萘丁美酮 2.β-萘酚 3.萘 4.双酮
9 讨论
采用经典的羟胺法测定萘丁美酮的含量时，由于滴定终点颜色变化不明显，终点不易判断，而萘丁美酮又无其它可用于经典容量分析的官能团，故卫生部药品标准WS-394(X-340)-95(试行)采用紫外分光光度法测定含量，但是样品中存在萘、双酮等生产过程中带来的杂质，在262 nm波长处也有吸收，仍影响测定结果；BP 1993 Add 1996采用HPLC外标法测定萘丁美酮的含量，但是流动相中1，2-二氯乙烷毒性较大，且对有些杂质的分离效果欠佳；为此，作者曾采用反相高效液相色谱法，以甲醇-水(1∶1)为流动相对萘丁美酮进行分离，但未能将杂质有效分离；本文所述高效液相色谱法克服了以上各种缺陷，流动相毒性小，对杂质具有良好的分离，效果较为理想，见图1；该法重现性、回收率好，方法可行且操作简便，也可用于有关杂质的检验。
将萘丁美酮与适量0.5 mol.L-1的氢氧化钠溶液混合，加热至沸，用无水乙醚萃取，挥干溶剂，残渣用流动相溶解；另取中间体、粗品适量，分别用流动相溶解。分别进样测定，记录色谱图，结果表明，本法对中间体、粗品及碱处理后的样品仍有理想的分离效果，见图2。
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图2 样品(9806066)的中间体(A)、粗品(B)及碱处理物(C)的色谱图
1.双酮 2.萘丁美酮
刘凯：沈阳药科大学98届毕业生
参考文献
1，王泽民，康葵，冯梅等.当代结构药物全集.第一版.北京：北京科学技术出版社，1993.1100
2，卫生部新药转正式生产标准.WS-042(X-032)-95(试行)
3，卫生部药品标准.WS-394(X-340)-95(试行)
4，BP 1993 Add 1996.1808
5，李平，宁雅君.气相色谱法测定萘丁美酮及其制剂的含量.药物分析杂志，1993，13(2)：96
6，吴联奎，武秀英，黄慧敏等.萘丁美酮分析方法的研究.江西药学，1993，(1)：41
7，沈克温，王绪明，韩永平等.实用药物分离鉴定手册.第一版.北京：人民军医出版社，1986.10
8，(澳大利亚)D.D.佩林，W.L.F.阿马里戈，D.R.佩林.实验室化学药品的提纯方法.第二版.北京：化学工业出版社，1987.75
9，中国药典.1995.二部：附录23
(本文于1999年3月9日收到), 百拇医药