毛细管气相色谱法测定复方利福平片中异烟肼和吡嗪酰胺的含量
作者：张亮 杭太俊 毕宝英
单位：张亮 杭太俊 南京 210009 中国药科大学药物分析研究室；毕宝英 本校93届毕业生
关键词：毛细管气相色谱法；异烟肼；吡嗪酰胺；含量测定
中国现代应用药学990618
摘要 目的：建立复方利福平片中异烟肼和吡嗪酰胺的含量测定方法。方法：毛细管气相色谱法，以乙酰苯胺为内标，色谱柱为弹性石英毛细管柱25m×0.32mm×0.52μm(DB-1);柱温170℃;气化室温度250℃;检测器温度250℃;载气为高纯氮。结果：异烟肼和吡嗪酰胺的线性范围分别是0.426～2.13mg/ml和1.23～6.13mg/ml;平均回收率分别为99.81%和99.63%。结论：方法简便，快速，准确，可作为该制剂的检测方法。
Determination of isoniazid and pyrazinamide in tablet of Lifuping compound by capillary gas chromatography
, 百拇医药
Zhang Liang(Zhang L),Hang Taijun(Hang TJ),Bi Baoying(Bi BY)
(Department of Pharmacutical Analysis,China Pharmaceutical University,Nanjing 210009)
ABSTRACT OBJECTIVE：To determine isoniazid and pyrazinamide in tablet of Lifuping compound.METHOD:A capillary gas chromatography was employed.The internal stardand reference was acetanilide.Operating conditions were:injector temperature 250℃,detector temperature 250℃,column temperature 170℃,FID detector.Fused-silica columns with dimension of 25m×0.32mm ID was coated with chemically bonded SE 30.RESULTS:The calibration equations were linear in the range of 0.426～2.13mg/ml for isoniazid and 1.23～6.13mg/ml for pyrazinamide.The average recoveries were 99.81% for isoniazid and 99.63% for pyrazinamide.CONCLUSION:This method was found to be simple,quick and accurated for the determination of two constituents in tablet of Lifuping compound.
, 百拇医药
KEY WORDS capillary gas chromatography,isoniazid,pyrazinamide
复方利福平片含利福平、异烟肼和吡嗪酰胺三主药，临床主要应用于治疗结核病，目前，国内市场为进口制剂。关于该进口制剂中各组分的含量测定方法，文献报道有紫外分光光度法[1]和液相色谱法[2]，本文采用毛细管气相色谱法建立了国产仿制药复方利福平片中异烟肼和吡嗪酰胺的含量测定方法。
1 仪器、药品和试剂
VARIAN-3400气相色谱仪，氢火焰离子化检测器。
异烟肼，吡嗪酰胺和利福平原料药(华裕制药有限公司)，对照品(中国药品生物制品检定所)，内标：乙酰苯胺为分析纯。
2 方法和结果
, http://www.100md.com
2.1 色谱条件
色谱柱：弹性石英毛细管柱25m×0.32mm×0.52μm(DB-1)。
色谱条件：柱温170℃;气化室温度250℃;检测器温度250℃;载气为高纯氮，柱前压10psi;分流进样，分流比为40∶1。
2.2 干扰试验
按处方比配制异烟肼和吡嗪酰胺乙酸乙酯溶液1份，另取利福平及空白辅料乙酸乙酯溶液一份，分别取1～3μl注入气相色谱仪，利福平和空白辅料对异烟肼和吡嗪酰胺测定无干扰。
2.3 标准曲线的制备
取乙酰苯胺适量，加乙酸乙酯溶解并稀释成每1ml中含6mg的溶液，摇匀，作为内标溶液，备用。另取异烟肼对照品和吡嗪酰胺对照品适量，置100ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释成每1ml中含异烟肼4mg,吡嗪酰胺12mg的对照品贮备液，另取上述贮备液1.0,2.0,3,0,4.0和5.0ml,置10ml量瓶中，加入内标溶液2.0ml,用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，放置，取2μl注入气相色谱仪，以对照品与内标的浓度比作为横坐标，峰面积比为纵坐标，进行回归分析，得回归方程异烟肼为:Y=-0.2008X+0.5236,r=0.9992,线性范围为0.426～2.13mg/ml；吡嗪酰胺为:Y=-0.0815X+0.6134,r=0.9998,线性范围为1.23～6.13mg/ml。
, 百拇医药
2.4 回收率试验
量取2.3项下对照品贮备液1.5,2.0,2.5,3.0和3.5ml,置10ml量瓶中，加入内标溶液2ml,再加入按处方配比的利福平及空白辅料，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，取上清液2μl注入气相色谱仪，按回归方程计算回收率，结果见表1，2。
表1 吡嗪酰胺回收率试验结果
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收
, 百拇医药
率/%
RSD
/%
1
18.47
17.91
99.97
2
24.62
24.53
99.63
3
30.78
, http://www.100md.com
30.51
99.13
99.63
1.8
4
36.93
37.62
101.87
5
40.09
40.32
100.57
表2 异烟肼回收率试验结果
, http://www.100md.com
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收
率/%
RSD
/%
1
6.39
6.32
, http://www.100md.com
98.90
2
8.52
8.47
99.41
3
10.65
10.64
99.91
99.81
1.3
4
12.78
, 百拇医药
12.86
100.63
5
14.91
15.20
100.00
2.5 精密度及重现性试验
取模拟样品，按含量测定项下2.6方法进行精密度考察及重现性试验，结果异烟肼和吡嗪酰胺的日内误差和日间误差(RSD%，n=5)分别为1.87，2.10和0.43，0.56。
2.6 含量测定
校正因子测定：取乙酰苯胺适量，加乙酸乙酯溶解并稀释成每1ml中含3.0mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另分别取异烟肼对照品约20mg,吡嗪酰胺对照品约60mg,精密称定，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液10ml,振摇使溶解，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，取1～3μl注入气相色谱仪，计算校正因子。
, http://www.100md.com
测定法：取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于异烟肼20mg或吡嗪酰胺60mg),置25ml量瓶中，精密加入内标溶液10ml,振摇使溶解，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，静置；取1～3μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得(见表3)。表3 国产仿制产品测定结果 成 分
批 号
百分标示量/n=2
异烟肼
970103
97.40
970104
99.69
970105
, 百拇医药
96.21
吡嗪酸胺
970103
99.30
970104
100.7
970105
99.31
3 结果和讨论
复方利福平片含三主药，采用HPLC测定时，由于利福平有较多杂质(杂质总量约9%)，且这些杂质不同程度地干扰利福平自身及异烟肼和吡嗪酰胺的测定。本文利用利福平和辅料在气相色谱条件下难以气化的性质，采用气相法测定时，异烟肼和吡嗪酰胺的测定不受干扰，方法学考察结果表明：该法回收率高，稳定，适于两主药的含量测定。
, 百拇医药
本文曾使用水为样品溶液，但当载气流速不合适时会出现双峰现象，改用乙酸乙酯即可避免。
参考文献
1 薛大权，谢云，高绪侠，等.P-矩阵紫外分光光度法测定复方利福平注射液的含量.现代应用药学，1997，14(1)∶38.
2 Chandrashekhar DG,Prita Vp.Rapid and sensitive estimation of isoniazid,pyrazinamide and rifampicin in combined dosage form by reversed-phase liquid chromatography.Drug Development and Industrial Pharmacy,1991,17(9)∶1201.
收稿日期：1998-10-12, http://www.100md.com
单位：张亮 杭太俊 南京 210009 中国药科大学药物分析研究室；毕宝英 本校93届毕业生
关键词：毛细管气相色谱法；异烟肼；吡嗪酰胺；含量测定
中国现代应用药学990618
摘要 目的：建立复方利福平片中异烟肼和吡嗪酰胺的含量测定方法。方法：毛细管气相色谱法，以乙酰苯胺为内标，色谱柱为弹性石英毛细管柱25m×0.32mm×0.52μm(DB-1);柱温170℃;气化室温度250℃;检测器温度250℃;载气为高纯氮。结果：异烟肼和吡嗪酰胺的线性范围分别是0.426～2.13mg/ml和1.23～6.13mg/ml;平均回收率分别为99.81%和99.63%。结论：方法简便，快速，准确，可作为该制剂的检测方法。
Determination of isoniazid and pyrazinamide in tablet of Lifuping compound by capillary gas chromatography
, 百拇医药
Zhang Liang(Zhang L),Hang Taijun(Hang TJ),Bi Baoying(Bi BY)
(Department of Pharmacutical Analysis,China Pharmaceutical University,Nanjing 210009)
ABSTRACT OBJECTIVE：To determine isoniazid and pyrazinamide in tablet of Lifuping compound.METHOD:A capillary gas chromatography was employed.The internal stardand reference was acetanilide.Operating conditions were:injector temperature 250℃,detector temperature 250℃,column temperature 170℃,FID detector.Fused-silica columns with dimension of 25m×0.32mm ID was coated with chemically bonded SE 30.RESULTS:The calibration equations were linear in the range of 0.426～2.13mg/ml for isoniazid and 1.23～6.13mg/ml for pyrazinamide.The average recoveries were 99.81% for isoniazid and 99.63% for pyrazinamide.CONCLUSION:This method was found to be simple,quick and accurated for the determination of two constituents in tablet of Lifuping compound.
, 百拇医药
KEY WORDS capillary gas chromatography,isoniazid,pyrazinamide
复方利福平片含利福平、异烟肼和吡嗪酰胺三主药，临床主要应用于治疗结核病，目前，国内市场为进口制剂。关于该进口制剂中各组分的含量测定方法，文献报道有紫外分光光度法[1]和液相色谱法[2]，本文采用毛细管气相色谱法建立了国产仿制药复方利福平片中异烟肼和吡嗪酰胺的含量测定方法。
1 仪器、药品和试剂
VARIAN-3400气相色谱仪，氢火焰离子化检测器。
异烟肼，吡嗪酰胺和利福平原料药(华裕制药有限公司)，对照品(中国药品生物制品检定所)，内标：乙酰苯胺为分析纯。
2 方法和结果
, http://www.100md.com
2.1 色谱条件
色谱柱：弹性石英毛细管柱25m×0.32mm×0.52μm(DB-1)。
色谱条件：柱温170℃;气化室温度250℃;检测器温度250℃;载气为高纯氮，柱前压10psi;分流进样，分流比为40∶1。
2.2 干扰试验
按处方比配制异烟肼和吡嗪酰胺乙酸乙酯溶液1份，另取利福平及空白辅料乙酸乙酯溶液一份，分别取1～3μl注入气相色谱仪，利福平和空白辅料对异烟肼和吡嗪酰胺测定无干扰。
2.3 标准曲线的制备
取乙酰苯胺适量，加乙酸乙酯溶解并稀释成每1ml中含6mg的溶液，摇匀，作为内标溶液，备用。另取异烟肼对照品和吡嗪酰胺对照品适量，置100ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释成每1ml中含异烟肼4mg,吡嗪酰胺12mg的对照品贮备液，另取上述贮备液1.0,2.0,3,0,4.0和5.0ml,置10ml量瓶中，加入内标溶液2.0ml,用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，放置，取2μl注入气相色谱仪，以对照品与内标的浓度比作为横坐标，峰面积比为纵坐标，进行回归分析，得回归方程异烟肼为:Y=-0.2008X+0.5236,r=0.9992,线性范围为0.426～2.13mg/ml；吡嗪酰胺为:Y=-0.0815X+0.6134,r=0.9998,线性范围为1.23～6.13mg/ml。
, 百拇医药
2.4 回收率试验
量取2.3项下对照品贮备液1.5,2.0,2.5,3.0和3.5ml,置10ml量瓶中，加入内标溶液2ml,再加入按处方配比的利福平及空白辅料，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，取上清液2μl注入气相色谱仪，按回归方程计算回收率，结果见表1，2。
表1 吡嗪酰胺回收率试验结果
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收
, 百拇医药
率/%
RSD
/%
1
18.47
17.91
99.97
2
24.62
24.53
99.63
3
30.78
, http://www.100md.com
30.51
99.13
99.63
1.8
4
36.93
37.62
101.87
5
40.09
40.32
100.57
表2 异烟肼回收率试验结果
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加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收
率/%
RSD
/%
1
6.39
6.32
, http://www.100md.com
98.90
2
8.52
8.47
99.41
3
10.65
10.64
99.91
99.81
1.3
4
12.78
, 百拇医药
12.86
100.63
5
14.91
15.20
100.00
2.5 精密度及重现性试验
取模拟样品，按含量测定项下2.6方法进行精密度考察及重现性试验，结果异烟肼和吡嗪酰胺的日内误差和日间误差(RSD%，n=5)分别为1.87，2.10和0.43，0.56。
2.6 含量测定
校正因子测定：取乙酰苯胺适量，加乙酸乙酯溶解并稀释成每1ml中含3.0mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另分别取异烟肼对照品约20mg,吡嗪酰胺对照品约60mg,精密称定，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液10ml,振摇使溶解，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，取1～3μl注入气相色谱仪，计算校正因子。
, http://www.100md.com
测定法：取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于异烟肼20mg或吡嗪酰胺60mg),置25ml量瓶中，精密加入内标溶液10ml,振摇使溶解，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，静置；取1～3μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得(见表3)。表3 国产仿制产品测定结果 成 分
批 号
百分标示量/n=2
异烟肼
970103
97.40
970104
99.69
970105
, 百拇医药
96.21
吡嗪酸胺
970103
99.30
970104
100.7
970105
99.31
3 结果和讨论
复方利福平片含三主药，采用HPLC测定时，由于利福平有较多杂质(杂质总量约9%)，且这些杂质不同程度地干扰利福平自身及异烟肼和吡嗪酰胺的测定。本文利用利福平和辅料在气相色谱条件下难以气化的性质，采用气相法测定时，异烟肼和吡嗪酰胺的测定不受干扰，方法学考察结果表明：该法回收率高，稳定，适于两主药的含量测定。
, 百拇医药
本文曾使用水为样品溶液，但当载气流速不合适时会出现双峰现象，改用乙酸乙酯即可避免。
参考文献
1 薛大权，谢云，高绪侠，等.P-矩阵紫外分光光度法测定复方利福平注射液的含量.现代应用药学，1997，14(1)∶38.
2 Chandrashekhar DG,Prita Vp.Rapid and sensitive estimation of isoniazid,pyrazinamide and rifampicin in combined dosage form by reversed-phase liquid chromatography.Drug Development and Industrial Pharmacy,1991,17(9)∶1201.
收稿日期：1998-10-12, http://www.100md.com