野菊花水提液抗氧化作用的实验研究
作者：严亦慈 娄小娥 蒋惠娣
单位：严亦慈 桐庐 311500 浙江桐庐药品检验所；娄小娥 蒋惠娣 杭州 310006 浙江大学药学院
关键词：野菊花；脂质过氧化；谷胱甘肽过氧化物酶；过氧化氢酶
中国现代应用药学990606
摘要 目的：观察野菊花水提液的体内外抗氧化作用。方法：分别用TBA法、DTNB法及紫外分光光度法测定脂质过氧化(LPO)产物MDA的含量、全血谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及过氧化氢酶(CAT)活力。结果：野菊花水提液体外可抑制大鼠心、脑、肝、肾组织自动LPO及由H2O2引发的红细胞脂质过氧化及溶血；小鼠 ig给药2g/(kg.d) 7d，可显著升高全血GSH-Px、CAT活力(P<0.05)。结论：野菊花水提液具有很好的抗氧化作用。
, http://www.100md.com
Experimental studies on the anti-oxidation effects of water extract from Chrysanthemum indicum L.
Yan Yici(Yan YC),Lou Xiaoe(Lou XE),Jiang Huidi(Jiang HD)
(Zhejiang Tonglu Institute of Drug Control,Tonglu 311500)
ABSTRACT OBJECTIVE：To observe the anti-oxidation effects of Chrysanthemum indicum L. water extract in vivo and in vitro.METHOD:The content of MDA,the whole blood GSH-Px and CAT activities were measured with TBA,DTNB and UV methods respectively.RESULTS:Chrysanthemum indicum L. water extract could inhibit lipid peroxidation of tissue homogenate of heart,brain,liver,kidney of rat and it could also inhibit lipid peroxidation and hemolysis of red blood cell caused by H2O2.When mice were given(ig) the water extract 2g/(kg.d) for 7 days,the whole blood GSH-Px and CAT activities were significantly higher than those in control group (P<0.05).CONCLUSION:Water extract from Chrysanthemum indicum L. has strong anti-oxidation effects in vivo and in vitro.
, 百拇医药
KEY WORDS Chrysanthemum indicum L.,lipid peroxidation,GSH-Px,CAT
自由基医学的研究表明，炎症、肿瘤、组织缺血再灌注损伤均与活性氧引发的脂质过氧化(LPO)密切相关[1]。菊科菊属植物野菊花含挥发油、黄酮等成份，据报道可用于治疗肠炎、前列腺炎、盆腔炎等各种炎症，对狗冠状动脉结扎所形成的实验性心肌梗塞有明显的保护作用，可减少梗塞范围[2]。但是，野菊花抗氧化作用的研究至今未见文献报道。本研究观察野菊花水提液体外对大鼠心、脑、肝、肾组织脂质过氧化及由过氧化氢(H2O2)引发的红细胞(RBC)脂质过氧化及溶血的抑制作用；体内对抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及过氧化氢酶(CAT)活力的影响，以探讨野菊花治疗上述疾病可能的依据，同时也为野菊花治疗由活性氧引起的其它疾病提供参考。
1 材 料
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1.1 实验动物 SD雄性大鼠(200～250g)，NIH小鼠(18～25g)，雌雄各半(浙江医科大学实验动物中心)。
1.2 主要药品及试剂 野菊花(Chrysanthemum indicum L.)(浙江省中医院中药房，经原浙江医科大学药学系生药教研室薛祥骥副教授鉴定)；DTNB(Fluka公司)，GSH(Sigma公司)，其余试剂为国产分析纯或生化试剂。
1.3 仪器 THZ-80型恒温振荡器(上海跃进医疗仪器厂)，80-2型离心沉淀器(上海手术器械厂)，722型分光光度计(上海分析仪器三厂)。
2 方 法
2.1 野菊花提取 野菊花粉碎，加10倍量水回流2次，每次1h，合并2次滤液，减压浓缩至0.5g/ml，临用前用生理盐水或缓冲液稀释。
, 百拇医药 2.2 野菊花对大鼠离体组织脂质过氧化抑制率的测定[3] 大鼠禁食16h，按文献方法取脏器，制成5%匀浆，每试管加匀浆1.5ml，样品管加0.1ml不同浓度野菊花提取液，对照管及未温育管加0.1ml生理盐水，未温育管立即加入1.5ml 20%三氯醋酸，样品管及对照管于(37±0.5)℃恒温振荡反应2h，加入20%三氯醋酸1.5ml终止反应，各管3500r/min离心15min，取上清液2ml，加0.67%硫代巴比妥酸(TBA)1ml，沸水浴加热15min，冷却，测535nm光密度(OD)，计算脂质过氧化产物丙二醛(MDA)生成抑制率，即代表脂质过氧化(LPO)抑制率。
2.3 野菊花对H2O2引发的RBC脂质过氧化及溶血抑制率的测定[4] 小鼠眼眶取血，肝素抗凝，以PBS(10mmol/L生理盐水磷酸盐缓冲液，pH7.4)制成血红蛋白含量为5%的红细胞悬液。各管取300mmol/L H2O2 0.5ml，加入0.1ml上述红细胞悬液，样品管再加入0.1ml不同浓度野菊花提取液，各管以PBS补充至1.5ml，按2.2法温育并测LPO抑制率，另按文献[4]法测定溶血抑制率。
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2.4 野菊花对小鼠GSH-Px、CAT活力的影响 小鼠随机分成对照组及药物组，药物组灌胃野菊花水提液2g/(kg.d)7d，对照组给以同体积生理盐水，至第8天眼眶取血，以DTNB直接法测定GSH-Px活力[5]，以紫外分光光度法测定CAT活力[5]。
3 结果与讨论
3.1 野菊花对大鼠离体组织脂质过氧化的抑制 由表1结果知，野菊花水提液对大鼠心、脑、肝、肾体外脂质过氧化均有不同程度的抑制作用，并呈量效关系，提取液对心脏脂质过氧化的抑制作用更为突出；在实验中我们还测定了公认的抗氧化中药丹参水提液的抗氧化作用，结果表明，在丹参浓度为0.125,0.250及0.500mol/L时对肝匀浆LPO的抑制率分别为78.2±4.5%,90.9±3.8%和93.3±5.6%，即低浓度时丹参水提液对肝匀浆LPO的抑制作用大于野菊花，而在浓度达0.50mol/L 时其抑制率相近。
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表1 野菊花对大鼠离体组织LPO抑制率(%，n=8) 组 织
不同浓度(g/L)对LPO抑制率
0.125
0.250
0.500
心脑肝肾
40.3±3.3
71.4±2.3
96.2±3.5
32.8±3.5
69.5±4.8
, http://www.100md.com 93.2±4.2
26.4±2.5
62.5±3.8
89.2±4.3
21.5±2.7
53.4±2.9
85.3±2.5
大量研究表明，炎症、缺血组织再灌注时均可产生较多的氧自由基，它可以引发生物膜中脂质过氧化，生成脂质过氧化产物，从而使生物膜遭到破坏[1]，因此清除氧自由基、抑制脂质过氧化反应，可以消除炎症、减轻组织缺血再灌注损伤，实验结果表明野菊花水提液体外具有较强的抗脂质过氧化作用，提示其对抗炎症及心肌梗塞作用可能与其对脂质过氧化抑制作用有一定关系。
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3.2 野菊花对H2O2引发的红细胞膜稳定性的影响 从表2可知，野菊花水提液对H2O2引发的红细胞脂质过氧化、红细胞溶血均有很好的抑制作用，而且LPO抑制率与溶血抑制率大小趋势一致。表2 野菊花对H2O2引发的RBC脂质过氧化及溶血 抑制率(%，n=7) 浓度/g.L-1
LPO抑制率
溶血抑制率
0.05
34.7±5.3
21.0±3.5
0.10
, 百拇医药
58.3±4.5
38.4±3.3
0.20
86.5±4.8
67.5±5.0
H2O2属活性氧，在一定条件下可产生活性更强的羟自由基.OH，从而引发红细胞膜脂质过氧化，野菊花水提液对该脂质过氧化有很强的抑制作用，而且其抑制作用的大小与溶血抑制率大小趋势一致，提示其对溶血的抑制可能与其抑制膜脂质过氧化，从而增加膜稳定性有关。
3.3 野菊花对体内抗氧化酶活力的影响 表3结果表明，小鼠灌胃野菊花水提液2g/(kg.d) 7d后，全血GSH-Px、CAT活力均显著高于正常对照组(P<0.05)。表3 野菊花对小鼠GSH-Px及CAT活力的影响(
±s，n=10) 组 别
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GSH-Px(单位)
CAT(单位)
对照组
21.1±4.9
27.8±4.1
野菊花组
27.8±3.8*
36.5±8.3*
注：与对照组比较，*P<0.05
生物体发生氧化代谢的同时不断产生活性氧，但生物体内不仅存在着小分子抗氧化物质还存在着由超氧化物歧化酶(SOD)、GSH-Px、CAT三者组成的抗氧化酶性保护系统，正常情况下生物体内活性氧的生成和清除处于平衡状态，当炎症、组织缺血再灌注时可产生大量的活性氧，因此，提高体内抗氧化酶的活力，可以对抗由活性氧以及由其引发的脂质过氧化产生的疾病。野菊花可以提高GSH-Px、CAT活力，提示其抗炎及对心肌梗塞的保护作用可能与此也有一定的关系。
, 百拇医药
参考文献
1 孙存普，张建中，段绍瑾.自由基生物医学导论.合肥：中国科技大学出版社，1999∶236.
2 刘国应.野菊花的药理研究及临床应用进展.山东中医杂志，1990，9(6)∶37.
3 王爱民，王玉坤，刘民生，等.托盘根乙酸乙酯萃取物对组织脂质过氧化作用的影响.中草药，1995，26(7)∶358.
4 任彬彬，马永萍，沈泳，等.宁夏枸杞及甜菜碱对H2O2引发的RBC膜脂质过氧化的影响.中国中药杂志，1995，20(5)∶303358.
5 张企兰，郑英，张如松，等.虎丈南星、白附片抗氧化作用的实验研究.中草药，1996，20(9)∶544.
收稿日期：1998-09-21, 百拇医药
单位：严亦慈 桐庐 311500 浙江桐庐药品检验所；娄小娥 蒋惠娣 杭州 310006 浙江大学药学院
关键词：野菊花；脂质过氧化；谷胱甘肽过氧化物酶；过氧化氢酶
中国现代应用药学990606
摘要 目的：观察野菊花水提液的体内外抗氧化作用。方法：分别用TBA法、DTNB法及紫外分光光度法测定脂质过氧化(LPO)产物MDA的含量、全血谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及过氧化氢酶(CAT)活力。结果：野菊花水提液体外可抑制大鼠心、脑、肝、肾组织自动LPO及由H2O2引发的红细胞脂质过氧化及溶血；小鼠 ig给药2g/(kg.d) 7d，可显著升高全血GSH-Px、CAT活力(P<0.05)。结论：野菊花水提液具有很好的抗氧化作用。
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Experimental studies on the anti-oxidation effects of water extract from Chrysanthemum indicum L.
Yan Yici(Yan YC),Lou Xiaoe(Lou XE),Jiang Huidi(Jiang HD)
(Zhejiang Tonglu Institute of Drug Control,Tonglu 311500)
ABSTRACT OBJECTIVE：To observe the anti-oxidation effects of Chrysanthemum indicum L. water extract in vivo and in vitro.METHOD:The content of MDA,the whole blood GSH-Px and CAT activities were measured with TBA,DTNB and UV methods respectively.RESULTS:Chrysanthemum indicum L. water extract could inhibit lipid peroxidation of tissue homogenate of heart,brain,liver,kidney of rat and it could also inhibit lipid peroxidation and hemolysis of red blood cell caused by H2O2.When mice were given(ig) the water extract 2g/(kg.d) for 7 days,the whole blood GSH-Px and CAT activities were significantly higher than those in control group (P<0.05).CONCLUSION:Water extract from Chrysanthemum indicum L. has strong anti-oxidation effects in vivo and in vitro.
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KEY WORDS Chrysanthemum indicum L.,lipid peroxidation,GSH-Px,CAT
自由基医学的研究表明，炎症、肿瘤、组织缺血再灌注损伤均与活性氧引发的脂质过氧化(LPO)密切相关[1]。菊科菊属植物野菊花含挥发油、黄酮等成份，据报道可用于治疗肠炎、前列腺炎、盆腔炎等各种炎症，对狗冠状动脉结扎所形成的实验性心肌梗塞有明显的保护作用，可减少梗塞范围[2]。但是，野菊花抗氧化作用的研究至今未见文献报道。本研究观察野菊花水提液体外对大鼠心、脑、肝、肾组织脂质过氧化及由过氧化氢(H2O2)引发的红细胞(RBC)脂质过氧化及溶血的抑制作用；体内对抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及过氧化氢酶(CAT)活力的影响，以探讨野菊花治疗上述疾病可能的依据，同时也为野菊花治疗由活性氧引起的其它疾病提供参考。
1 材 料
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1.1 实验动物 SD雄性大鼠(200～250g)，NIH小鼠(18～25g)，雌雄各半(浙江医科大学实验动物中心)。
1.2 主要药品及试剂 野菊花(Chrysanthemum indicum L.)(浙江省中医院中药房，经原浙江医科大学药学系生药教研室薛祥骥副教授鉴定)；DTNB(Fluka公司)，GSH(Sigma公司)，其余试剂为国产分析纯或生化试剂。
1.3 仪器 THZ-80型恒温振荡器(上海跃进医疗仪器厂)，80-2型离心沉淀器(上海手术器械厂)，722型分光光度计(上海分析仪器三厂)。
2 方 法
2.1 野菊花提取 野菊花粉碎，加10倍量水回流2次，每次1h，合并2次滤液，减压浓缩至0.5g/ml，临用前用生理盐水或缓冲液稀释。
, 百拇医药 2.2 野菊花对大鼠离体组织脂质过氧化抑制率的测定[3] 大鼠禁食16h，按文献方法取脏器，制成5%匀浆，每试管加匀浆1.5ml，样品管加0.1ml不同浓度野菊花提取液，对照管及未温育管加0.1ml生理盐水，未温育管立即加入1.5ml 20%三氯醋酸，样品管及对照管于(37±0.5)℃恒温振荡反应2h，加入20%三氯醋酸1.5ml终止反应，各管3500r/min离心15min，取上清液2ml，加0.67%硫代巴比妥酸(TBA)1ml，沸水浴加热15min，冷却，测535nm光密度(OD)，计算脂质过氧化产物丙二醛(MDA)生成抑制率，即代表脂质过氧化(LPO)抑制率。
2.3 野菊花对H2O2引发的RBC脂质过氧化及溶血抑制率的测定[4] 小鼠眼眶取血，肝素抗凝，以PBS(10mmol/L生理盐水磷酸盐缓冲液，pH7.4)制成血红蛋白含量为5%的红细胞悬液。各管取300mmol/L H2O2 0.5ml，加入0.1ml上述红细胞悬液，样品管再加入0.1ml不同浓度野菊花提取液，各管以PBS补充至1.5ml，按2.2法温育并测LPO抑制率，另按文献[4]法测定溶血抑制率。
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2.4 野菊花对小鼠GSH-Px、CAT活力的影响 小鼠随机分成对照组及药物组，药物组灌胃野菊花水提液2g/(kg.d)7d，对照组给以同体积生理盐水，至第8天眼眶取血，以DTNB直接法测定GSH-Px活力[5]，以紫外分光光度法测定CAT活力[5]。
3 结果与讨论
3.1 野菊花对大鼠离体组织脂质过氧化的抑制 由表1结果知，野菊花水提液对大鼠心、脑、肝、肾体外脂质过氧化均有不同程度的抑制作用，并呈量效关系，提取液对心脏脂质过氧化的抑制作用更为突出；在实验中我们还测定了公认的抗氧化中药丹参水提液的抗氧化作用，结果表明，在丹参浓度为0.125,0.250及0.500mol/L时对肝匀浆LPO的抑制率分别为78.2±4.5%,90.9±3.8%和93.3±5.6%，即低浓度时丹参水提液对肝匀浆LPO的抑制作用大于野菊花，而在浓度达0.50mol/L 时其抑制率相近。
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表1 野菊花对大鼠离体组织LPO抑制率(%，n=8) 组 织
不同浓度(g/L)对LPO抑制率
0.125
0.250
0.500
心脑肝肾
40.3±3.3
71.4±2.3
96.2±3.5
32.8±3.5
69.5±4.8
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26.4±2.5
62.5±3.8
89.2±4.3
21.5±2.7
53.4±2.9
85.3±2.5
大量研究表明，炎症、缺血组织再灌注时均可产生较多的氧自由基，它可以引发生物膜中脂质过氧化，生成脂质过氧化产物，从而使生物膜遭到破坏[1]，因此清除氧自由基、抑制脂质过氧化反应，可以消除炎症、减轻组织缺血再灌注损伤，实验结果表明野菊花水提液体外具有较强的抗脂质过氧化作用，提示其对抗炎症及心肌梗塞作用可能与其对脂质过氧化抑制作用有一定关系。
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3.2 野菊花对H2O2引发的红细胞膜稳定性的影响 从表2可知，野菊花水提液对H2O2引发的红细胞脂质过氧化、红细胞溶血均有很好的抑制作用，而且LPO抑制率与溶血抑制率大小趋势一致。表2 野菊花对H2O2引发的RBC脂质过氧化及溶血 抑制率(%，n=7) 浓度/g.L-1
LPO抑制率
溶血抑制率
0.05
34.7±5.3
21.0±3.5
0.10
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58.3±4.5
38.4±3.3
0.20
86.5±4.8
67.5±5.0
H2O2属活性氧，在一定条件下可产生活性更强的羟自由基.OH，从而引发红细胞膜脂质过氧化，野菊花水提液对该脂质过氧化有很强的抑制作用，而且其抑制作用的大小与溶血抑制率大小趋势一致，提示其对溶血的抑制可能与其抑制膜脂质过氧化，从而增加膜稳定性有关。
3.3 野菊花对体内抗氧化酶活力的影响 表3结果表明，小鼠灌胃野菊花水提液2g/(kg.d) 7d后，全血GSH-Px、CAT活力均显著高于正常对照组(P<0.05)。表3 野菊花对小鼠GSH-Px及CAT活力的影响(
±s，n=10) 组 别, http://www.100md.com
GSH-Px(单位)
CAT(单位)
对照组
21.1±4.9
27.8±4.1
野菊花组
27.8±3.8*
36.5±8.3*
注：与对照组比较，*P<0.05
生物体发生氧化代谢的同时不断产生活性氧，但生物体内不仅存在着小分子抗氧化物质还存在着由超氧化物歧化酶(SOD)、GSH-Px、CAT三者组成的抗氧化酶性保护系统，正常情况下生物体内活性氧的生成和清除处于平衡状态，当炎症、组织缺血再灌注时可产生大量的活性氧，因此，提高体内抗氧化酶的活力，可以对抗由活性氧以及由其引发的脂质过氧化产生的疾病。野菊花可以提高GSH-Px、CAT活力，提示其抗炎及对心肌梗塞的保护作用可能与此也有一定的关系。
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参考文献
1 孙存普，张建中，段绍瑾.自由基生物医学导论.合肥：中国科技大学出版社，1999∶236.
2 刘国应.野菊花的药理研究及临床应用进展.山东中医杂志，1990，9(6)∶37.
3 王爱民，王玉坤，刘民生，等.托盘根乙酸乙酯萃取物对组织脂质过氧化作用的影响.中草药，1995，26(7)∶358.
4 任彬彬，马永萍，沈泳，等.宁夏枸杞及甜菜碱对H2O2引发的RBC膜脂质过氧化的影响.中国中药杂志，1995，20(5)∶303358.
5 张企兰，郑英，张如松，等.虎丈南星、白附片抗氧化作用的实验研究.中草药，1996，20(9)∶544.
收稿日期：1998-09-21, 百拇医药