海脉冲营养素抗衰老作用的实验研究
作者：王静凤 胡京滨 田树川 李立德
单位：王静凤 胡京滨 田树川 李立德(青岛海洋大学，青岛 266003)
关键词：海脉冲营养素，抗衰老，过氧化脂质，脂褐质，超氧 化物歧化酶，谷胱甘肽过氧化物酶
中国海洋药物000615 摘 要 本文报道了海脉冲营养素对老龄大鼠体内过氧化脂质(LPO)， 脂褐素(LPF)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)，光胱甘肽过氧化物酶(GSH-P x)活性的影响。给老龄大鼠灌服海脉冲营养素60d，结果表明：血液及肝脏中LPO含 量明显降低(P<0.05)；SOD和GSH-Px酶活性显 著提高(P<0.05)；大脑皮层中LPF的生成明显减少( P<0.01)。提示海脉冲营养素具有提高老龄大鼠体内抗氧 化酶活性、清除自由基、抑制脂质过氧化的作用。
EXPERIMENTAL RESEARCH ON THE ANTI-A GING EFFECT OF HAIMAICHONG NUTRIENT
, 百拇医药
Wang Jingfeng，Hu jingbin，Tian Shuchuan，Li lide
(Ocean University of Qingdao，Qingdao 266003)
ABSTRACT The effects of Haimaichong Nutrient on the contents of Lipo peroxide(LPO),Lipofuscin(LPF)and the activities of the old rats were i nvestigated.After Haimaichong(HMC) was given 60 day，the results showed that the contents of LPO in blood and liver were significantly decreased (P <0.05)；the activities of SOD,GSH-Px were marked increased P<0.05);the production of LPF in cerebral cortes was extrem ely reduced(P<0.01).It suggested that HMC had c apacities of improving the activities of anti-oxidase,removing free-radical an d inhibiting the lipid peroxidate.
, 百拇医药
KEY WORDS Haimaichong Nutrient,Anti-aging,Lip o peroxide(LPO),Superoxide dismutase(SOD),Glutathione peroxidase(GSH-Px)
海脉冲营养素(HMC)系栉孔扇贝[Chalamys fa rreri(Jones et preston)]边提取、纯化而成的纯天然海洋保健品(中华 人 民共和国食卫健字(97)第195号)，富含氨基酸、微量元素、牛磺酸、糖原 、维生素B12和叶酸等生理活性物质[1]。扇贝边即为扇贝去掉闭壳肌的 部分，包括全部的裙边和内脏团，在我国北方沿海资源极为丰富，由于其感观较差，利用率 很低。近年来，对扇贝边的开发利用已引起关注，已研究报道扇贝边提取物具有抗凝、保肝 、降血脂 促进和调节免疫功能、促进造血、抗肿瘤等方面的作用[2～7]，但对 其 抗衰老抗氧化方面的研究很少。本实验通过测定灌服海脉冲营养素的老龄大鼠体内LPO、 LPF的含量以及SOD、GSH-Px酶活性，以观察海脉冲营养素对老龄大鼠的抗衰老 作用。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料
海脉冲营养素：由海南省海脉冲公司青岛分公司提供，批号为 9701052其成分为栉孔扇贝边提取物，其灌胃用浓度 为300mg*L-1， 由蒸馏水配制而成；实验用大鼠：Wistar种，由山东省海洋药物研究所动物房提供，老龄 大鼠为12～14个月，体重为450～600g，少龄大鼠为3个月，体重为250～3 00g，雌雄各半；实验用饲料由中国人民解放军401医院动物房提供；实验用化学试剂 均为分析纯；主要仪器为7520型分光光度计，日立850荧光分光光度计。
1.2 实验方法
1.2.1 扇贝边提取物制备的大体工艺流程
洗净的扇贝边→10倍量50%的乙醇搅拌提取物提取→抽滤→离子交换脱色→淡黄色溶液 →薄膜蒸发→烘干→淡黄色固体。
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1.2.2 实验方法
以少龄大鼠10只，做为对照组。老龄大鼠20只，随机分为2组：老龄对照组和海脉冲实 验组。海脉冲实验组动物每日灌服海脉冲营养素300mg*kg-1体重(0.5mL) ，连续给药 60d，对照组动物灌服等体积的生理盐水，于末次给药后24h取血液、肝脏、脑测定LP O、LPF含量以及SOD、GSH-PX活性。
1.3 主要检测指标
血浆和肝脏中LPO含量测定，采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法[8 ]；红血细胞和肝脏中SOD活性测定，采用核黄素-NBT法[9]；全血和肝 脏中GSH-PX活性测定，采用Hafeman法[10]测定；肝脏和大脑皮层中LP F含量测定，采用荧光分光光度法[11]，以新配制的硫酸奎宁标准溶液(0.1 mg*L-1硫酸奎宁，0.05mol*L-1 H2SO4)的荧光强度为 10单位，计 算每克湿组织的荧光计数单位；酶液的蛋白质含量测定，采用Folin-酚试剂法[12 ]，以小牛血清白蛋白为标准蛋白。
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2 结果
2.1 海脉冲营养素对老龄大鼠血液中LPO含量及SOD、GSH-PX酶活性的影响 (结果见表1)
表1 海脉冲营养素对老龄大鼠血液中LPO含量及S OD、GSH-Px酶活性的影响(
±s) 分组
剂量
(mg*kg-1*d -1)
血清MDA
(nmol*L-1)
红细胞SOD
, 百拇医药
(μ*L -1)
全血GSH-Px
(μ*L-1)
少龄对照组
老龄对照组
海脉冲实验 组
300×60
3.73±1.96
8.32±2.50
5.49±2.18
333.77±110.45
, 百拇医药
285.29±27.00
327.18±13.33
53.69±6.22
44.36±3.79
51.20±8.69
注：P<0.05，P<0.01 vs 老龄对照组
由表1可见，海脉冲营养素能够显著降低老龄大鼠血清中过氧化脂质 的含量，显著提高血液中SOD和GSH-Px酶活性，海脉冲实验组大鼠与少龄对 照组大鼠相比，各测定指无显著性差异(P<0.05)。
2.2 海脉冲营养素对老龄大鼠肝脏中LPO含量，SOD、GSH-Px酶 海性和肝、脑组织中LPF含量的影响(结果见表2)表2 海脉冲营养素对老龄大鼠肝脏中LPO含量，S OD、GSH-Px酶活性和肝、脑组织中LPF含量的影响( ±s) 分组
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剂量
(mg*kg-1*d-1)
肝脏 MDA
(nmol*L-1)
肝脏LPF
(U*L-1)
大脑LPF
(U*L -1)
肝脏SOD
(U*mg Protein)
肝脏GSH-PX
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(U*mg.pro tein)
少龄对照组
老龄对照组
海脉冲实验组
300×60
9.38±3.0 2
16.27±2.27
11.21±3.17
92.97 ±32.95
180.15±42.83
154.16±54.15
, 百拇医药
1 08.60±56.80
205.12±64.70
123.26±50. 60
1.80±0.54
0.67±0.24
1.47±0.45
31.71±5.00
22.30±2.88
28.02±3.11
注：P<0.01 vs 老龄对照组 由表2可见，海脉冲营养素能够显著降低老龄大鼠肝脏中过氧化脂质 的含量，降低大脑皮层中脂褐素含量，显著提高肝脏中SOD和GSH-Px酶活性，海脉 冲实验组老龄大鼠与少龄对照组大鼠相比较，各测定指标除LPF外无显著性差异(P>0.05)，但海脉冲营养素对老龄大鼠肝脏中LPF的生成无 明显 作用。
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3 讨论
衰老具有多方面的原因，由氧自由基引起的膜脂类的过氧化过程及中间产物对细胞结构及功 能的破坏是衰老发生发展的重要原因[13]。脂质过氧化物的生成与体内SOD和 GSH-Px可使脂质过氧化物分解成相应的醇类，从而减弱其对细胞膜的损害程度。实验 证明，海脉冲营养素能够明显降低老龄大鼠体内LPO和LPF含量，显著提高SOD和G SH-Px酶活性，具有明显的抗氧化能力，提示了海脉冲营养素通过提高机体内源性性， 具有明显的抗氧化能力，提示了海脉冲营养素通过提高机体内源性SOD，GSH-Px等 抗氧化酶活性，加快体内自由基的清除，可能是海脉冲营养素延缓衰老的重要生化机制之一 。
海脉冲营养素的抗衰老作用需要多方面的实验来验证，本文仅是海脉冲营养素抗衰老研究的 部分内容，其它部分的研究尚在进行中。
参考文献
, 百拇医药
1，王静凤，田树川，等.海脉冲营养素营养成分的分析.海洋湖沼通报，998，3：3 5
2，王长云，管华诗.扇贝糖胺聚糖的琼脂糖凝胶电泳分析.中国海洋药物，1996，1 5(2)：12
3，孙谧，向葆卿，等，扇贝内脏团提取物对药物性肝损伤的保护作用.海洋水产研究，1 996，19(1)：20
4，汪之顼.扇贝裙边对大鼠血脂水平的影响.营养学报，1994，16(4)：436
5，王静凤，仲军，等.海脉冲营养素对小鼠免疫功能的影响.青岛海洋大学学报，199 6，27(4)：521
6，王静凤，胡京滨，等.海脉冲营养素对小鼠造血功能的影响.中国海洋药物，1997 ，16：41
7，顾谦群，王长云，等.扇贝糖蛋白的制备及其抗肿瘤活性初步研究.全国首届海洋生命 活性物质与天然药物学术讨论会论文集，1996：502
, 百拇医药
8，向荣，王鼎年.过氧化脂质硫代巴比妥酸分光光度法的改进.生物化学与生物物理学进 展，1990，17(3)：241
9，陈奇.中药药是研究方法学.北京：人民卫生出版社，1996：953
10，Hafeman DG.Eeffect of dietary selenium on e rythrocyte and liver glutathione peroxidase in the rat.J Nature，1974,104(5):58 0
11，范盘生.三七总皂甙，人参果总皂甙对老年大鼠心脑组织脂褐素及血清过氧化脂质的影 响.中国药理学和毒理学杂志，1988，2：257
12，张龙翔，张庭芳.生化实验方法和技术.北京：高等教育出版社，1981：165
13，Adelman RC，Roth GS.Festing the theories of agine.Boca Raton ,Florid,CRC press.Inc,1982:137
(收稿日期：2000-06-22), 百拇医药
单位：王静凤 胡京滨 田树川 李立德(青岛海洋大学，青岛 266003)
关键词：海脉冲营养素，抗衰老，过氧化脂质，脂褐质，超氧 化物歧化酶，谷胱甘肽过氧化物酶
中国海洋药物000615 摘 要 本文报道了海脉冲营养素对老龄大鼠体内过氧化脂质(LPO)， 脂褐素(LPF)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)，光胱甘肽过氧化物酶(GSH-P x)活性的影响。给老龄大鼠灌服海脉冲营养素60d，结果表明：血液及肝脏中LPO含 量明显降低(P<0.05)；SOD和GSH-Px酶活性显 著提高(P<0.05)；大脑皮层中LPF的生成明显减少( P<0.01)。提示海脉冲营养素具有提高老龄大鼠体内抗氧 化酶活性、清除自由基、抑制脂质过氧化的作用。
EXPERIMENTAL RESEARCH ON THE ANTI-A GING EFFECT OF HAIMAICHONG NUTRIENT
, 百拇医药
Wang Jingfeng，Hu jingbin，Tian Shuchuan，Li lide
(Ocean University of Qingdao，Qingdao 266003)
ABSTRACT The effects of Haimaichong Nutrient on the contents of Lipo peroxide(LPO),Lipofuscin(LPF)and the activities of the old rats were i nvestigated.After Haimaichong(HMC) was given 60 day，the results showed that the contents of LPO in blood and liver were significantly decreased (P <0.05)；the activities of SOD,GSH-Px were marked increased P<0.05);the production of LPF in cerebral cortes was extrem ely reduced(P<0.01).It suggested that HMC had c apacities of improving the activities of anti-oxidase,removing free-radical an d inhibiting the lipid peroxidate.
, 百拇医药
KEY WORDS Haimaichong Nutrient,Anti-aging,Lip o peroxide(LPO),Superoxide dismutase(SOD),Glutathione peroxidase(GSH-Px)
海脉冲营养素(HMC)系栉孔扇贝[Chalamys fa rreri(Jones et preston)]边提取、纯化而成的纯天然海洋保健品(中华 人 民共和国食卫健字(97)第195号)，富含氨基酸、微量元素、牛磺酸、糖原 、维生素B12和叶酸等生理活性物质[1]。扇贝边即为扇贝去掉闭壳肌的 部分，包括全部的裙边和内脏团，在我国北方沿海资源极为丰富，由于其感观较差，利用率 很低。近年来，对扇贝边的开发利用已引起关注，已研究报道扇贝边提取物具有抗凝、保肝 、降血脂 促进和调节免疫功能、促进造血、抗肿瘤等方面的作用[2～7]，但对 其 抗衰老抗氧化方面的研究很少。本实验通过测定灌服海脉冲营养素的老龄大鼠体内LPO、 LPF的含量以及SOD、GSH-Px酶活性，以观察海脉冲营养素对老龄大鼠的抗衰老 作用。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料
海脉冲营养素：由海南省海脉冲公司青岛分公司提供，批号为 9701052其成分为栉孔扇贝边提取物，其灌胃用浓度 为300mg*L-1， 由蒸馏水配制而成；实验用大鼠：Wistar种，由山东省海洋药物研究所动物房提供，老龄 大鼠为12～14个月，体重为450～600g，少龄大鼠为3个月，体重为250～3 00g，雌雄各半；实验用饲料由中国人民解放军401医院动物房提供；实验用化学试剂 均为分析纯；主要仪器为7520型分光光度计，日立850荧光分光光度计。
1.2 实验方法
1.2.1 扇贝边提取物制备的大体工艺流程
洗净的扇贝边→10倍量50%的乙醇搅拌提取物提取→抽滤→离子交换脱色→淡黄色溶液 →薄膜蒸发→烘干→淡黄色固体。
, http://www.100md.com
1.2.2 实验方法
以少龄大鼠10只，做为对照组。老龄大鼠20只，随机分为2组：老龄对照组和海脉冲实 验组。海脉冲实验组动物每日灌服海脉冲营养素300mg*kg-1体重(0.5mL) ，连续给药 60d，对照组动物灌服等体积的生理盐水，于末次给药后24h取血液、肝脏、脑测定LP O、LPF含量以及SOD、GSH-PX活性。
1.3 主要检测指标
血浆和肝脏中LPO含量测定，采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法[8 ]；红血细胞和肝脏中SOD活性测定，采用核黄素-NBT法[9]；全血和肝 脏中GSH-PX活性测定，采用Hafeman法[10]测定；肝脏和大脑皮层中LP F含量测定，采用荧光分光光度法[11]，以新配制的硫酸奎宁标准溶液(0.1 mg*L-1硫酸奎宁，0.05mol*L-1 H2SO4)的荧光强度为 10单位，计 算每克湿组织的荧光计数单位；酶液的蛋白质含量测定，采用Folin-酚试剂法[12 ]，以小牛血清白蛋白为标准蛋白。
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2 结果
2.1 海脉冲营养素对老龄大鼠血液中LPO含量及SOD、GSH-PX酶活性的影响 (结果见表1)
表1 海脉冲营养素对老龄大鼠血液中LPO含量及S OD、GSH-Px酶活性的影响(
±s) 分组剂量
(mg*kg-1*d -1)
血清MDA
(nmol*L-1)
红细胞SOD
, 百拇医药
(μ*L -1)
全血GSH-Px
(μ*L-1)
少龄对照组
老龄对照组
海脉冲实验 组
300×60
3.73±1.96
8.32±2.50
5.49±2.18
333.77±110.45
, 百拇医药
285.29±27.00
327.18±13.33
53.69±6.22
44.36±3.79
51.20±8.69
注：P<0.05，P<0.01 vs 老龄对照组
由表1可见，海脉冲营养素能够显著降低老龄大鼠血清中过氧化脂质 的含量，显著提高血液中SOD和GSH-Px酶活性，海脉冲实验组大鼠与少龄对 照组大鼠相比，各测定指无显著性差异(P<0.05)。
2.2 海脉冲营养素对老龄大鼠肝脏中LPO含量，SOD、GSH-Px酶 海性和肝、脑组织中LPF含量的影响(结果见表2)表2 海脉冲营养素对老龄大鼠肝脏中LPO含量，S OD、GSH-Px酶活性和肝、脑组织中LPF含量的影响(
±s) 分组, http://www.100md.com
剂量
(mg*kg-1*d-1)
肝脏 MDA
(nmol*L-1)
肝脏LPF
(U*L-1)
大脑LPF
(U*L -1)
肝脏SOD
(U*mg Protein)
肝脏GSH-PX
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(U*mg.pro tein)
少龄对照组
老龄对照组
海脉冲实验组
300×60
9.38±3.0 2
16.27±2.27
11.21±3.17
92.97 ±32.95
180.15±42.83
154.16±54.15
, 百拇医药
1 08.60±56.80
205.12±64.70
123.26±50. 60
1.80±0.54
0.67±0.24
1.47±0.45
31.71±5.00
22.30±2.88
28.02±3.11
注：P<0.01 vs 老龄对照组 由表2可见，海脉冲营养素能够显著降低老龄大鼠肝脏中过氧化脂质 的含量，降低大脑皮层中脂褐素含量，显著提高肝脏中SOD和GSH-Px酶活性，海脉 冲实验组老龄大鼠与少龄对照组大鼠相比较，各测定指标除LPF外无显著性差异(P>0.05)，但海脉冲营养素对老龄大鼠肝脏中LPF的生成无 明显 作用。
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3 讨论
衰老具有多方面的原因，由氧自由基引起的膜脂类的过氧化过程及中间产物对细胞结构及功 能的破坏是衰老发生发展的重要原因[13]。脂质过氧化物的生成与体内SOD和 GSH-Px可使脂质过氧化物分解成相应的醇类，从而减弱其对细胞膜的损害程度。实验 证明，海脉冲营养素能够明显降低老龄大鼠体内LPO和LPF含量，显著提高SOD和G SH-Px酶活性，具有明显的抗氧化能力，提示了海脉冲营养素通过提高机体内源性性， 具有明显的抗氧化能力，提示了海脉冲营养素通过提高机体内源性SOD，GSH-Px等 抗氧化酶活性，加快体内自由基的清除，可能是海脉冲营养素延缓衰老的重要生化机制之一 。
海脉冲营养素的抗衰老作用需要多方面的实验来验证，本文仅是海脉冲营养素抗衰老研究的 部分内容，其它部分的研究尚在进行中。
参考文献
, 百拇医药
1，王静凤，田树川，等.海脉冲营养素营养成分的分析.海洋湖沼通报，998，3：3 5
2，王长云，管华诗.扇贝糖胺聚糖的琼脂糖凝胶电泳分析.中国海洋药物，1996，1 5(2)：12
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4，汪之顼.扇贝裙边对大鼠血脂水平的影响.营养学报，1994，16(4)：436
5，王静凤，仲军，等.海脉冲营养素对小鼠免疫功能的影响.青岛海洋大学学报，199 6，27(4)：521
6，王静凤，胡京滨，等.海脉冲营养素对小鼠造血功能的影响.中国海洋药物，1997 ，16：41
7，顾谦群，王长云，等.扇贝糖蛋白的制备及其抗肿瘤活性初步研究.全国首届海洋生命 活性物质与天然药物学术讨论会论文集，1996：502
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8，向荣，王鼎年.过氧化脂质硫代巴比妥酸分光光度法的改进.生物化学与生物物理学进 展，1990，17(3)：241
9，陈奇.中药药是研究方法学.北京：人民卫生出版社，1996：953
10，Hafeman DG.Eeffect of dietary selenium on e rythrocyte and liver glutathione peroxidase in the rat.J Nature，1974,104(5):58 0
11，范盘生.三七总皂甙，人参果总皂甙对老年大鼠心脑组织脂褐素及血清过氧化脂质的影 响.中国药理学和毒理学杂志，1988，2：257
12，张龙翔，张庭芳.生化实验方法和技术.北京：高等教育出版社，1981：165
13，Adelman RC，Roth GS.Festing the theories of agine.Boca Raton ,Florid,CRC press.Inc,1982:137
(收稿日期：2000-06-22), 百拇医药