化瘤颗粒的薄层色谱鉴别
作者：高向军 伍丕娥 刘挺松
单位：四川省药品检验所 成都 610036
关键词：化瘤颗粒；大青叶；何首乌；山豆根；陈皮；人参；三七；薄层色谱法
华西药学杂志990541 提要 用薄层色谱法对处方中部分药物进行鉴别。采用二次展开，并控制展开时的相对湿度(40～60%)和温度(10℃以下)，使三七中的三七皂苷R1与人参皂苷Re在普通硅胶G板上达到分离。该法操作简单，专属性强，重现性好。
化瘤颗粒是由人参、三七、何首乌等十多味中药制成的复方制剂，具有益气养阴，解毒散结等作用，用于癌症的辅助治疗。为了控制产品质量，对处方中主要生药的薄层进行了鉴别研究。
1 实验部分
, 百拇医药 1.1 材料及试剂试药
化瘤颗粒(成都中医药大学)。硅胶G(青岛海洋化工厂)。试剂、试药均为AR；靛玉红、苦参碱、橙皮苷、人参皂苷Rb1、Rg1、Re、三七皂苷R1对照品，何首乌对照药材(中国药品生物制品检定所)。
1.2 方法和结果
1.2.1 薄层板的制备 取硅胶G或硅胶H适量，加0.5%羧甲基纤维素钠溶液调浆制板，室温晾干，105℃活化1 h，置干燥器中贮存。
1.2.2 供试品溶液的制备 取样品5 g，研细，加氯仿30 ml，置水浴上加热回流30 min，滤过，滤液通过已处理好的中性氧化铝柱(100～200目，5 g，内径1 cm)，收集流出液，蒸干，残渣加氯仿1 ml使溶解，供大青叶鉴别用(供试液I)。取样品5 g，研细，加甲醇20 ml，浸渍1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 ml使溶解，加盐酸1 ml，加热水解30 min，取出，立即冷却，用乙醚提取(20 ml×2)，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，供何首乌鉴别用(供试液Ⅱ)。取样品5 g，研细，加1%盐酸溶液30 ml，超声处理10 min，离心，取上清液，加氨试液调pH值至9～11，加氯仿提取(20 ml×2)，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加氯仿1 ml使溶解，供山豆根鉴别用(供试液Ⅲ)。取样品5 g，研细，加甲醇20 ml，超声处理15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml，水浴上加热使溶解，趁热倾出水溶液，放冷，加盐酸调pH值至2～3，用醋酸乙酯提取(20 ml×2)，合并醋酸乙酯，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，供陈皮鉴别用(供试液Ⅳ)。取样品5 g，研细，加甲醇25 ml，超声处理15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水15 ml使溶解，滤过，滤液用水饱和的正丁醇提取(15 ml×2)，合并正丁醇，加氨试液3倍量，振摇，放置分层，分取正丁醇液，浓缩至约1 ml，加中性氧化铝(100～200目)2 g，搅匀，蒸干，加40%甲醇10 ml，搅拌，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，供人参、三七鉴别用(供试液V)。
, 百拇医药
1.2.3 对照品溶液的制备 取靛玉红对照品，加氯仿制成每1 ml含1 mg的溶液，得对照液Ⅰ；取何首乌对照药材0.5 g，加甲醇10 ml，照供试液Ⅱ制备，得对照药材液Ⅱ；取苦参碱对照品，加氯仿制成每1 ml含0.5 mg的溶液，得供试液Ⅲ；取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，得对照液Ⅳ；取人参皂苷Rb1、Re、Rg1和三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1 ml各含1 mg的混合溶液，得对照液V。
1.2.4 阴性对照溶液的制备 模拟处方分别制成不含上述被检药材的阴性对照溶液。
1.2.5 大青叶的鉴别 分别吸取供试液Ⅰ、对照液Ⅰ、大青叶阴性对照液各5 μl，点于同一硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-丙酮(5∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，供试液Ⅰ在与对照品溶液Ⅰ相应的位置上，显相同的浅紫红色斑点，阴性对照在此位置无色斑(图1)。
, 百拇医药
1.2.6 何首乌的鉴别 点样同“1.2.5”，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视，供试液Ⅱ与对照药材液Ⅱ在相应的位置，显相同橙黄色荧光斑点，而阴性对照无相应的荧光斑点(图2)。
1.2.7 山豆根的鉴别 点样同“1.2.5”，以苯-丙酮-醋酸乙酯-浓氨溶液(2∶3∶4∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷稀碘化铋钾试液，供试液Ⅲ与对照品液Ⅲ在相应位置，显相同的橙红色斑点，阴性对照无此色斑(图3)。
1.2.8 陈皮的鉴别 点样同“1.2.5”，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷三氯化铝试液，置紫外光灯(365 nm)下检视，供试液Ⅳ与对照品液Ⅳ在相应的位置，显相同的黄色荧光斑点，阴性对照无荧光斑点(图4)。
1.2.9 人参、三七的鉴别 点样同“1.2.5”，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置12 h的下层液为展开剂，10℃以下展开，相对湿度40～60%，两次展开(10 cm，18 cm)，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，105℃烘5 min，供试液Ⅴ与对照液Ⅴ在相应位置，显四个相同的紫红色斑点，紫外光灯(365 nm)下，显相同荧光斑点(图5)。
, 百拇医药
图1 大青叶的薄层鉴别 图2 何首乌的薄层鉴别
图3 山豆根的薄层鉴别 图4 陈皮的薄层鉴别
图5 人参、三七的薄层鉴别
1 化瘤颗粒溶液 2 空白液 3 三七空白液
S1 Control solution of Indirubin S2 Control solution of radix potygoni S3 Control solution of Sophocarpidine
S4 Control solution of Cirmtin S5 Control solution of Ginsenoside Rb1、Re、Rg1 and notoginsenoside R1
, http://www.100md.com
2 讨论
2.1 处方中同时含有人参、三七，鉴别比较困难。三七中的特征成分三七皂苷R1与人参皂苷Re结构非常近似，在一般薄层色谱条件下不易分开，文中采用二次展开，控制展开时的温度、湿度，可使二成分完全分离。
2.2 由于方中含有何首乌，故在大青叶的鉴别中，将提取液通过氧化铝小柱，以除去蒽醌类成分的干扰。
2.3 文中所建立的方法操作简便、专属性强、重现性好，且阴性无干扰，可用于控制该制剂的质量。
参考文献
1 中国药典.一部.1995.4，8，15，19，149，159
2 王宝 .中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994.345，494
3 中华人民共和国卫生部药典委员会.中药薄层色谱彩色图集.北京：人民卫生出版社，1993.14.18, http://www.100md.com
单位：四川省药品检验所 成都 610036
关键词：化瘤颗粒；大青叶；何首乌；山豆根；陈皮；人参；三七；薄层色谱法
华西药学杂志990541 提要 用薄层色谱法对处方中部分药物进行鉴别。采用二次展开，并控制展开时的相对湿度(40～60%)和温度(10℃以下)，使三七中的三七皂苷R1与人参皂苷Re在普通硅胶G板上达到分离。该法操作简单，专属性强，重现性好。
化瘤颗粒是由人参、三七、何首乌等十多味中药制成的复方制剂，具有益气养阴，解毒散结等作用，用于癌症的辅助治疗。为了控制产品质量，对处方中主要生药的薄层进行了鉴别研究。
1 实验部分
, 百拇医药 1.1 材料及试剂试药
化瘤颗粒(成都中医药大学)。硅胶G(青岛海洋化工厂)。试剂、试药均为AR；靛玉红、苦参碱、橙皮苷、人参皂苷Rb1、Rg1、Re、三七皂苷R1对照品，何首乌对照药材(中国药品生物制品检定所)。
1.2 方法和结果
1.2.1 薄层板的制备 取硅胶G或硅胶H适量，加0.5%羧甲基纤维素钠溶液调浆制板，室温晾干，105℃活化1 h，置干燥器中贮存。
1.2.2 供试品溶液的制备 取样品5 g，研细，加氯仿30 ml，置水浴上加热回流30 min，滤过，滤液通过已处理好的中性氧化铝柱(100～200目，5 g，内径1 cm)，收集流出液，蒸干，残渣加氯仿1 ml使溶解，供大青叶鉴别用(供试液I)。取样品5 g，研细，加甲醇20 ml，浸渍1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 ml使溶解，加盐酸1 ml，加热水解30 min，取出，立即冷却，用乙醚提取(20 ml×2)，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，供何首乌鉴别用(供试液Ⅱ)。取样品5 g，研细，加1%盐酸溶液30 ml，超声处理10 min，离心，取上清液，加氨试液调pH值至9～11，加氯仿提取(20 ml×2)，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加氯仿1 ml使溶解，供山豆根鉴别用(供试液Ⅲ)。取样品5 g，研细，加甲醇20 ml，超声处理15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml，水浴上加热使溶解，趁热倾出水溶液，放冷，加盐酸调pH值至2～3，用醋酸乙酯提取(20 ml×2)，合并醋酸乙酯，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，供陈皮鉴别用(供试液Ⅳ)。取样品5 g，研细，加甲醇25 ml，超声处理15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水15 ml使溶解，滤过，滤液用水饱和的正丁醇提取(15 ml×2)，合并正丁醇，加氨试液3倍量，振摇，放置分层，分取正丁醇液，浓缩至约1 ml，加中性氧化铝(100～200目)2 g，搅匀，蒸干，加40%甲醇10 ml，搅拌，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，供人参、三七鉴别用(供试液V)。
, 百拇医药
1.2.3 对照品溶液的制备 取靛玉红对照品，加氯仿制成每1 ml含1 mg的溶液，得对照液Ⅰ；取何首乌对照药材0.5 g，加甲醇10 ml，照供试液Ⅱ制备，得对照药材液Ⅱ；取苦参碱对照品，加氯仿制成每1 ml含0.5 mg的溶液，得供试液Ⅲ；取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，得对照液Ⅳ；取人参皂苷Rb1、Re、Rg1和三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1 ml各含1 mg的混合溶液，得对照液V。
1.2.4 阴性对照溶液的制备 模拟处方分别制成不含上述被检药材的阴性对照溶液。
1.2.5 大青叶的鉴别 分别吸取供试液Ⅰ、对照液Ⅰ、大青叶阴性对照液各5 μl，点于同一硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-丙酮(5∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，供试液Ⅰ在与对照品溶液Ⅰ相应的位置上，显相同的浅紫红色斑点，阴性对照在此位置无色斑(图1)。
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1.2.6 何首乌的鉴别 点样同“1.2.5”，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视，供试液Ⅱ与对照药材液Ⅱ在相应的位置，显相同橙黄色荧光斑点，而阴性对照无相应的荧光斑点(图2)。
1.2.7 山豆根的鉴别 点样同“1.2.5”，以苯-丙酮-醋酸乙酯-浓氨溶液(2∶3∶4∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷稀碘化铋钾试液，供试液Ⅲ与对照品液Ⅲ在相应位置，显相同的橙红色斑点，阴性对照无此色斑(图3)。
1.2.8 陈皮的鉴别 点样同“1.2.5”，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷三氯化铝试液，置紫外光灯(365 nm)下检视，供试液Ⅳ与对照品液Ⅳ在相应的位置，显相同的黄色荧光斑点，阴性对照无荧光斑点(图4)。
1.2.9 人参、三七的鉴别 点样同“1.2.5”，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置12 h的下层液为展开剂，10℃以下展开，相对湿度40～60%，两次展开(10 cm，18 cm)，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，105℃烘5 min，供试液Ⅴ与对照液Ⅴ在相应位置，显四个相同的紫红色斑点，紫外光灯(365 nm)下，显相同荧光斑点(图5)。
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图1 大青叶的薄层鉴别 图2 何首乌的薄层鉴别
图3 山豆根的薄层鉴别 图4 陈皮的薄层鉴别
图5 人参、三七的薄层鉴别
1 化瘤颗粒溶液 2 空白液 3 三七空白液
S1 Control solution of Indirubin S2 Control solution of radix potygoni S3 Control solution of Sophocarpidine
S4 Control solution of Cirmtin S5 Control solution of Ginsenoside Rb1、Re、Rg1 and notoginsenoside R1
, http://www.100md.com
2 讨论
2.1 处方中同时含有人参、三七，鉴别比较困难。三七中的特征成分三七皂苷R1与人参皂苷Re结构非常近似，在一般薄层色谱条件下不易分开，文中采用二次展开，控制展开时的温度、湿度，可使二成分完全分离。
2.2 由于方中含有何首乌，故在大青叶的鉴别中，将提取液通过氧化铝小柱，以除去蒽醌类成分的干扰。
2.3 文中所建立的方法操作简便、专属性强、重现性好，且阴性无干扰，可用于控制该制剂的质量。
参考文献
1 中国药典.一部.1995.4，8，15，19，149，159
2 王宝 .中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994.345，494
3 中华人民共和国卫生部药典委员会.中药薄层色谱彩色图集.北京：人民卫生出版社，1993.14.18, http://www.100md.com
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