速效枣仁安神胶囊中酸枣仁皂苷A、B的TLC鉴别和含量测定
作者：罗 东 代 青 管明银*
单位：第三军医大学西南医院药剂科 重庆 400038
关键词：酸枣仁皂苷A、B；薄层层析；含量测定
速效枣仁安神胶囊中酸枣仁皂苷A 提要 用薄层色谱法对速效枣仁安神胶囊中的酸枣仁皂苷A、B进行TLC鉴别，用单波长薄层扫描法在同一薄板上测定皂苷A、B的含量。方法简便、灵敏，结果准确可靠，适用于含酸枣仁制剂中酸枣仁皂苷A、B的含量测定。
速效枣仁安神胶囊由酸枣仁、左旋延胡索乙素等组成，临床用于治疗失眠、多梦、心悸等。制剂中的酸枣仁具镇静、催眠作用[1]，酸枣仁皂苷A、B为其镇静、催眠的主要成份[1，2]。该药的质量标准中无酸枣仁皂苷A、B的含量测定，现用薄层色谱法对酸枣仁皂苷A、B进行定性鉴别并用薄层扫描法在同一薄层板上测定二者含量。
, 百拇医药
1 实验部分
1.1 仪器、试药及材料
CS-9000型双波长薄层扫描仪(日本岛津)；微量定量毛细管(Brummond Sci Co美国)；微量注射器(宁波市镇海玻璃仪器厂)；高速离心机(美国雅培公司)；索氏提取器(重庆玻璃仪器厂)。速效枣仁安神胶囊(重庆中药厂)；酸枣仁皂苷A、B对照品(中国生物制品鉴定所)；酸枣仁药材(重庆市药材公司)；高效硅胶G板(青岛海洋化工厂分厂)；其它试剂均为分析纯。
1.2 TLC鉴别
1.2.1 供试品及对照溶液的制备 取速效枣仁安神胶囊内容物2 g，置索氏提取器中，用氯仿适量加热回流提取至无色，弃氯仿，药渣挥尽氯仿后，再加甲醇回流提取至无色，甲醇提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇适量溶解，离心(13 000 r/min，5 min)，上清液用甲醇定容，制成供试品溶液。将酸枣仁药材粉碎，过40目筛，称取酸枣仁粉2 g，置索氏提取器中，按上述方法提取，制成酸枣仁阳性对照液。另取不含酸枣仁皂苷A、B的阴性样品，依法提取，制成阴性样品液。分别取酸枣仁皂苷A、B对照品适量，用甲醇溶解，制成每ml含酸枣仁皂苷A和B 2 mg的对照液。
, 百拇医药
1.2.2 TLC鉴别 吸取酸枣仁皂苷A、B对照液2.0 μl，供试液、酸枣仁阳性对照液及阴性样品液10.0 μl分别点于同一薄层板上，正丁醇-冰醋酸-水(20∶6∶25)上层，饱和20 min，上行展开10 cm，取出薄层板挥干溶剂，喷以2%的香草醛硫酸乙醇溶液，在100℃烘2～3 min，可观察到供试品及酸枣仁药材色谱中在与两种对照品色谱相应位置处有相同的深蓝色斑点，而阴性对照液色谱中无此斑点。
1.3 含量测定
1.3.1 供试品液和对照液的制备 取速效枣仁安神胶囊10粒，倾出内容物，混匀。精密称取样品2 g置索氏提取器中，按“1.2.1”操作，甲醇定容为1 ml，作为供试品溶液。精密称取酸枣仁皂苷A和B对照品适量，用甲醇溶解定容，制成含酸枣仁皂苷A 1.15 mg/ml及酸枣仁皂苷B 0.95 mg/ml的对照品混合液。
1.3.2 扫描条件 单波长反射法锯齿扫描，测定波长λS=620 nm,SX=3。
, 百拇医药
1.3.3 线性关系 准确吸取酸枣仁皂苷A、B对照品液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 μl，在同一块薄层板上点样，按上述层析条件及扫描条件操作，测定各斑点的面积积分值。以点样量X为横座标，斑点面积积分值Y为纵座标，求得酸枣仁皂苷A、B的回归方程为：
YA=0.973X+9.122×10-5 r=0.9997；
YB=0.678X+7.524×10-5 r=0.9999。皂苷A点样量在2.3～6.9 μg，皂苷B点样量在1.9～5.7 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
1.3.4 空白试验 制备缺酸枣仁皂苷A、B的阴性样品液。精密吸取对照品液、供试品液和阴性对照液各3 μl，分别点于同一薄层板上，依法展开、显色、扫描，结果供试品溶液与对照品溶液在相应位置有吸收峰，而阴性对照液无对照品溶液相应的吸收峰，对皂苷A、B测定无干扰，供试品可得到分离良好的色谱图。
, 百拇医药
1.3.5 精密度和稳定性试验 精密吸取酸枣仁皂苷A、B对照品液2.0 μl，点于同一薄层板上，共6个点，展开，显色，扫描测定。结果RSD分别为2.97%、1.49%。另准确吸取酸枣仁皂苷A、B对照品液2.0 μl点于硅胶G薄层板上，按上述层析条件展开，显色，每隔30 min扫描测定1次。结果表明，薄层板显色后2.5 h内测定结果稳定，其皂苷A、B的RSD分别为1.97%、1.71%。
1.3.6 加样回收率测定 准确称取已知含量的样品3份，精密加入一定量的酸枣仁皂苷A和B对照液；另取该胶囊10粒，倾出内容物，混匀，按“1.2.1”项下制备样品供试液，点样，展开，显色，扫描测定，计算回收率(表1)。
表1 酸枣仁皂苷A、B的回收率实验(n=4)
皂苷
编号
, http://www.100md.com
含量
(mg/ml)
加入量
(mg/ml)
(mg/ml)
回收率
(%)
平均率
(%)
RSD
(%)
, 百拇医药
A
1
0.471
2.32
2.670
95.66
2
0.479
2.30
2.839
102.16
98.28
3.49
, 百拇医药
3
0.460
2.35
2.726
97.01
B
1
0.189
1.93
2.074
97.88
2
0.192
, 百拇医药
1.90
2.070
98.95
100.07
2.91
3
0.185
1.88
2.141
103.37
1.3.7 样品测定 精密吸取对照液2.0 μl、3.0 μl，供试品溶液4.0 μl分别交叉点于同一薄层板上，依法操作，用外标二点法测定供试品中酸枣仁皂苷A、B的含量。 表2 酸枣仁皂苷A、B的测定结果(n=4)
, http://www.100md.com
批号
皂苷
A
RSD
(%)
皂苷
B
RSD
(%)
960409
0.0957
2.60
0.0387
, 百拇医药
2.29
960601
0.0942
2.55
0.0386
1.71
961015
0.0920
2.77
0.0387
1.23
2 讨论
2.1 考察了药典和文中两种展开剂，结果文中所选展开剂分离效果好，显色后斑点清晰、圆整、无拖尾。
, 百拇医药
2.2 对样品进行索氏提取时，分别考察了用乙醚和氯仿加热回流去除样品中的左旋延胡索乙素及脂溶性杂质，结果证明，用氯仿能更完全地除去左旋延胡索乙素和脂溶性杂质，使样品液在展开时，酸枣仁皂苷A、B分离彻底，斑点层析后通道干扰小。显色后，仅待测成分显深蓝色，因而背景干扰小，使皂苷A、B的含量测定更准确。
* 贵阳中医学院 药学系实习生
参考文献
1 王健生.炒酸枣仁中镇静、催眠成分初探.中成药，1989，11(1)∶18
2 吴树勋，张建新，徐涛等.酸枣(仁、叶、肉)与酸枣皂苷A对中枢神经系统作用的实验研究.中国中药杂志，1993，18(11)∶685, 百拇医药(罗 东 代 青 管明银*)
单位：第三军医大学西南医院药剂科 重庆 400038
关键词：酸枣仁皂苷A、B；薄层层析；含量测定
速效枣仁安神胶囊中酸枣仁皂苷A 提要 用薄层色谱法对速效枣仁安神胶囊中的酸枣仁皂苷A、B进行TLC鉴别，用单波长薄层扫描法在同一薄板上测定皂苷A、B的含量。方法简便、灵敏，结果准确可靠，适用于含酸枣仁制剂中酸枣仁皂苷A、B的含量测定。
速效枣仁安神胶囊由酸枣仁、左旋延胡索乙素等组成，临床用于治疗失眠、多梦、心悸等。制剂中的酸枣仁具镇静、催眠作用[1]，酸枣仁皂苷A、B为其镇静、催眠的主要成份[1，2]。该药的质量标准中无酸枣仁皂苷A、B的含量测定，现用薄层色谱法对酸枣仁皂苷A、B进行定性鉴别并用薄层扫描法在同一薄层板上测定二者含量。
, 百拇医药
1 实验部分
1.1 仪器、试药及材料
CS-9000型双波长薄层扫描仪(日本岛津)；微量定量毛细管(Brummond Sci Co美国)；微量注射器(宁波市镇海玻璃仪器厂)；高速离心机(美国雅培公司)；索氏提取器(重庆玻璃仪器厂)。速效枣仁安神胶囊(重庆中药厂)；酸枣仁皂苷A、B对照品(中国生物制品鉴定所)；酸枣仁药材(重庆市药材公司)；高效硅胶G板(青岛海洋化工厂分厂)；其它试剂均为分析纯。
1.2 TLC鉴别
1.2.1 供试品及对照溶液的制备 取速效枣仁安神胶囊内容物2 g，置索氏提取器中，用氯仿适量加热回流提取至无色，弃氯仿，药渣挥尽氯仿后，再加甲醇回流提取至无色，甲醇提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇适量溶解，离心(13 000 r/min，5 min)，上清液用甲醇定容，制成供试品溶液。将酸枣仁药材粉碎，过40目筛，称取酸枣仁粉2 g，置索氏提取器中，按上述方法提取，制成酸枣仁阳性对照液。另取不含酸枣仁皂苷A、B的阴性样品，依法提取，制成阴性样品液。分别取酸枣仁皂苷A、B对照品适量，用甲醇溶解，制成每ml含酸枣仁皂苷A和B 2 mg的对照液。
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1.2.2 TLC鉴别 吸取酸枣仁皂苷A、B对照液2.0 μl，供试液、酸枣仁阳性对照液及阴性样品液10.0 μl分别点于同一薄层板上，正丁醇-冰醋酸-水(20∶6∶25)上层，饱和20 min，上行展开10 cm，取出薄层板挥干溶剂，喷以2%的香草醛硫酸乙醇溶液，在100℃烘2～3 min，可观察到供试品及酸枣仁药材色谱中在与两种对照品色谱相应位置处有相同的深蓝色斑点，而阴性对照液色谱中无此斑点。
1.3 含量测定
1.3.1 供试品液和对照液的制备 取速效枣仁安神胶囊10粒，倾出内容物，混匀。精密称取样品2 g置索氏提取器中，按“1.2.1”操作，甲醇定容为1 ml，作为供试品溶液。精密称取酸枣仁皂苷A和B对照品适量，用甲醇溶解定容，制成含酸枣仁皂苷A 1.15 mg/ml及酸枣仁皂苷B 0.95 mg/ml的对照品混合液。
1.3.2 扫描条件 单波长反射法锯齿扫描，测定波长λS=620 nm,SX=3。
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1.3.3 线性关系 准确吸取酸枣仁皂苷A、B对照品液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 μl，在同一块薄层板上点样，按上述层析条件及扫描条件操作，测定各斑点的面积积分值。以点样量X为横座标，斑点面积积分值Y为纵座标，求得酸枣仁皂苷A、B的回归方程为：
YA=0.973X+9.122×10-5 r=0.9997；
YB=0.678X+7.524×10-5 r=0.9999。皂苷A点样量在2.3～6.9 μg，皂苷B点样量在1.9～5.7 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
1.3.4 空白试验 制备缺酸枣仁皂苷A、B的阴性样品液。精密吸取对照品液、供试品液和阴性对照液各3 μl，分别点于同一薄层板上，依法展开、显色、扫描，结果供试品溶液与对照品溶液在相应位置有吸收峰，而阴性对照液无对照品溶液相应的吸收峰，对皂苷A、B测定无干扰，供试品可得到分离良好的色谱图。
, 百拇医药
1.3.5 精密度和稳定性试验 精密吸取酸枣仁皂苷A、B对照品液2.0 μl，点于同一薄层板上，共6个点，展开，显色，扫描测定。结果RSD分别为2.97%、1.49%。另准确吸取酸枣仁皂苷A、B对照品液2.0 μl点于硅胶G薄层板上，按上述层析条件展开，显色，每隔30 min扫描测定1次。结果表明，薄层板显色后2.5 h内测定结果稳定，其皂苷A、B的RSD分别为1.97%、1.71%。
1.3.6 加样回收率测定 准确称取已知含量的样品3份，精密加入一定量的酸枣仁皂苷A和B对照液；另取该胶囊10粒，倾出内容物，混匀，按“1.2.1”项下制备样品供试液，点样，展开，显色，扫描测定，计算回收率(表1)。
表1 酸枣仁皂苷A、B的回收率实验(n=4)
皂苷
编号
, http://www.100md.com
含量
(mg/ml)
加入量
(mg/ml)
(mg/ml)
回收率
(%)
平均率
(%)
RSD
(%)
, 百拇医药
A
1
0.471
2.32
2.670
95.66
2
0.479
2.30
2.839
102.16
98.28
3.49
, 百拇医药
3
0.460
2.35
2.726
97.01
B
1
0.189
1.93
2.074
97.88
2
0.192
, 百拇医药
1.90
2.070
98.95
100.07
2.91
3
0.185
1.88
2.141
103.37
1.3.7 样品测定 精密吸取对照液2.0 μl、3.0 μl，供试品溶液4.0 μl分别交叉点于同一薄层板上，依法操作，用外标二点法测定供试品中酸枣仁皂苷A、B的含量。 表2 酸枣仁皂苷A、B的测定结果(n=4)
, http://www.100md.com
批号
皂苷
A
RSD
(%)
皂苷
B
RSD
(%)
960409
0.0957
2.60
0.0387
, 百拇医药
2.29
960601
0.0942
2.55
0.0386
1.71
961015
0.0920
2.77
0.0387
1.23
2 讨论
2.1 考察了药典和文中两种展开剂，结果文中所选展开剂分离效果好，显色后斑点清晰、圆整、无拖尾。
, 百拇医药
2.2 对样品进行索氏提取时，分别考察了用乙醚和氯仿加热回流去除样品中的左旋延胡索乙素及脂溶性杂质，结果证明，用氯仿能更完全地除去左旋延胡索乙素和脂溶性杂质，使样品液在展开时，酸枣仁皂苷A、B分离彻底，斑点层析后通道干扰小。显色后，仅待测成分显深蓝色，因而背景干扰小，使皂苷A、B的含量测定更准确。
* 贵阳中医学院 药学系实习生
参考文献
1 王健生.炒酸枣仁中镇静、催眠成分初探.中成药，1989，11(1)∶18
2 吴树勋，张建新，徐涛等.酸枣(仁、叶、肉)与酸枣皂苷A对中枢神经系统作用的实验研究.中国中药杂志，1993，18(11)∶685, 百拇医药(罗 东 代 青 管明银*)