快速ELISA定性检测HBsAg的研究
作者：席纪荷 杨斌爱 郭逢恩
单位：太原市中心医院(030009) 席纪荷 杨斌爱 郭逢恩
关键词：
医学检验
我们根据ELISA的检测原理， 用提高温育及呈色温度来缩短检测时间，探索出快速检测法既提高了工作效率，又明显降低了成本。经半年多时间的应用，效果满意，现介绍如下。
1 材料
1.1 试剂盒选择： HBsAg酶标测定试剂盒，上海荣盛生物技术有限公司(批号：971202等)。
1.2 56℃电热恒温小温箱一个，电压220V，功率500W，温度范围37℃～65℃，北京西城区医疗器械厂。
, 百拇医药
1.3 微型振荡器一个。
1.4 酶标仪：伯乐-450型，大批体检或酶标仪故障采用目测法。
1.5 标本：体检者和患者的血清(1997年11月-1998年5月)。
2 方法
操作方法同试剂盒说明书基本相似，只是提高了温度，缩短了时间。
原法：包被板加上血清和酶结合物后37℃温育30min，呈色温育10min。
现法：包被板加上血清和酶结合物后53℃温育10min，呈色温育5min。
经实验，现法选择的最佳呈色温育时间5min，与原法对照基本一致，效果满意。如果批量体检，HBsAg检出阳性率较低，可采用分组筛检法，即10个标本为一组， 依次编成若干组。
, http://www.100md.com
同时准备若干个小试管标明组号，分别将每个标本各取100μl放入上述相应的标有组号的试管中混匀备检。检测时按一个标本作。以上述快速ELISA法筛出阴性、阳性组。 阴性组即可发出报告。阳性组，将阳性组的10个标本用快速ELISA法再行检测， 检出具体阳性者报告之。
结果判断：ELISA检测HBsAg目前还没有统一的方法〔1〕。参阅教科书等大量资料：如阴性对照颜色极浅，阳性反应呈色深于阴性反应，在定性测定中可用目视比方法〔2〕。受检者标本呈色深于阴性对照的判为阳性〔3〕。
3 讨论
3.1 温度对ELISA有着重要影响。在一定范围内反应速度随温度的增加而增加。温度增加酶的变性和灭活也增加，大多数酶在60℃～70℃很快灭活，抗体很快被破坏。根据ELISA的检测原理和酶与抗体的特性， 用提高温育及呈色温度的方法缩短检测时间，并且就地取材用做“ASO” 的血清灭活56℃恒温水箱温育， 比37℃恒温箱提高了温度又能保湿，缩短了时间，既快速又不必另备水箱。温育时必须及时盖盖。
, 百拇医药
3.2 筛选是否会有漏检。据我们临床体验，在平时的检测中约有95%的HBsAg阳性标本为阳性或强阳性；首先这类标本不会漏检。 因为这样标本稀释10倍以上甚至100倍仍可作出阳性结果。
为避免少数弱阳性或极弱阳性标本的漏检， 我们在分组筛检时加大标本量， 由取50μl增到100μl，这样也可防止因标本轻度稀释而漏检。同时判结果时从严， 呈浅蓝色者也列入分别检测之列。HBsAg检测方法多种，ELISA方法最为理想。与过去常用的RPHA法比较，具有特异性强更有灵敏度高的特点。因此混合标本5倍稀释后筛检， 漏检具有临床意义的阳性标本的可能性不大。
3.3 取标本必须一个标本一个吸头，否则会造成因强阳性污染， 而引起后面一系列的假阳性结果。为避免污染，既便是取混合组标本时，也要一个标本换一个吸头，以避免阳性分检时阳性标本后出现几个弱阳性结果不利判断是标本结果还是污染结果。
3.4 如发现和阳性标本接近的孔显弱阳性，怀疑是因酶未洗净造成的假阳性， 可将此孔立即清洗后再加底物。如仍为阳性即真阳性，否则可能是污染造成假阳性。一般不用再从头复查。
, 百拇医药
3.5 注意水箱温度，偶然水箱出故障，水温超出60℃，气温相应升高，如不及时发现，会造成试验失败全部假阴性结果。
3.6 阴性板再用：阴性板洗后拍干装一有干燥剂的密封袋中放置冰箱备用，两周内再用结果不受明显影响。
3.7 根据测定原理，在实验中不慎未温育就加入底物或顺序颠倒时，只要不是先错加了终止液，均可立即以清洗2次～3次拍干再用，以节约包被板，结果不受影响。
3.8 分组过筛包被板及试剂用量很少，即使因某个环节出现故障造成试验失败其损失也不大。经过半年上千人体检及门诊数千例患者检测，集以上各种优点证明该方法是一种省时，具有提高工作效率和明显降低成本的效果。可节约成本约70%～90%。尤其适合批量体检中应用。
参考方献
1 叶应妩，王毓三主编全国临床检验操作规程第2版南京：东南大学出版社，1997341
2 朱忠勇主编实用医学检验学北京：人民军医出版社，1996920
3 李影林主编中华医学检验全书北京：人民卫生出版社，19972146
(收稿日期：1998-10-29)
作者简介：席纪荷，女，1949年7月生，主管检验师，太原市中心医院，030009, 百拇医药
单位：太原市中心医院(030009) 席纪荷 杨斌爱 郭逢恩
关键词：
医学检验
我们根据ELISA的检测原理， 用提高温育及呈色温度来缩短检测时间，探索出快速检测法既提高了工作效率，又明显降低了成本。经半年多时间的应用，效果满意，现介绍如下。
1 材料
1.1 试剂盒选择： HBsAg酶标测定试剂盒，上海荣盛生物技术有限公司(批号：971202等)。
1.2 56℃电热恒温小温箱一个，电压220V，功率500W，温度范围37℃～65℃，北京西城区医疗器械厂。
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1.3 微型振荡器一个。
1.4 酶标仪：伯乐-450型，大批体检或酶标仪故障采用目测法。
1.5 标本：体检者和患者的血清(1997年11月-1998年5月)。
2 方法
操作方法同试剂盒说明书基本相似，只是提高了温度，缩短了时间。
原法：包被板加上血清和酶结合物后37℃温育30min，呈色温育10min。
现法：包被板加上血清和酶结合物后53℃温育10min，呈色温育5min。
经实验，现法选择的最佳呈色温育时间5min，与原法对照基本一致，效果满意。如果批量体检，HBsAg检出阳性率较低，可采用分组筛检法，即10个标本为一组， 依次编成若干组。
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同时准备若干个小试管标明组号，分别将每个标本各取100μl放入上述相应的标有组号的试管中混匀备检。检测时按一个标本作。以上述快速ELISA法筛出阴性、阳性组。 阴性组即可发出报告。阳性组，将阳性组的10个标本用快速ELISA法再行检测， 检出具体阳性者报告之。
结果判断：ELISA检测HBsAg目前还没有统一的方法〔1〕。参阅教科书等大量资料：如阴性对照颜色极浅，阳性反应呈色深于阴性反应，在定性测定中可用目视比方法〔2〕。受检者标本呈色深于阴性对照的判为阳性〔3〕。
3 讨论
3.1 温度对ELISA有着重要影响。在一定范围内反应速度随温度的增加而增加。温度增加酶的变性和灭活也增加，大多数酶在60℃～70℃很快灭活，抗体很快被破坏。根据ELISA的检测原理和酶与抗体的特性， 用提高温育及呈色温度的方法缩短检测时间，并且就地取材用做“ASO” 的血清灭活56℃恒温水箱温育， 比37℃恒温箱提高了温度又能保湿，缩短了时间，既快速又不必另备水箱。温育时必须及时盖盖。
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3.2 筛选是否会有漏检。据我们临床体验，在平时的检测中约有95%的HBsAg阳性标本为阳性或强阳性；首先这类标本不会漏检。 因为这样标本稀释10倍以上甚至100倍仍可作出阳性结果。
为避免少数弱阳性或极弱阳性标本的漏检， 我们在分组筛检时加大标本量， 由取50μl增到100μl，这样也可防止因标本轻度稀释而漏检。同时判结果时从严， 呈浅蓝色者也列入分别检测之列。HBsAg检测方法多种，ELISA方法最为理想。与过去常用的RPHA法比较，具有特异性强更有灵敏度高的特点。因此混合标本5倍稀释后筛检， 漏检具有临床意义的阳性标本的可能性不大。
3.3 取标本必须一个标本一个吸头，否则会造成因强阳性污染， 而引起后面一系列的假阳性结果。为避免污染，既便是取混合组标本时，也要一个标本换一个吸头，以避免阳性分检时阳性标本后出现几个弱阳性结果不利判断是标本结果还是污染结果。
3.4 如发现和阳性标本接近的孔显弱阳性，怀疑是因酶未洗净造成的假阳性， 可将此孔立即清洗后再加底物。如仍为阳性即真阳性，否则可能是污染造成假阳性。一般不用再从头复查。
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3.5 注意水箱温度，偶然水箱出故障，水温超出60℃，气温相应升高，如不及时发现，会造成试验失败全部假阴性结果。
3.6 阴性板再用：阴性板洗后拍干装一有干燥剂的密封袋中放置冰箱备用，两周内再用结果不受明显影响。
3.7 根据测定原理，在实验中不慎未温育就加入底物或顺序颠倒时，只要不是先错加了终止液，均可立即以清洗2次～3次拍干再用，以节约包被板，结果不受影响。
3.8 分组过筛包被板及试剂用量很少，即使因某个环节出现故障造成试验失败其损失也不大。经过半年上千人体检及门诊数千例患者检测，集以上各种优点证明该方法是一种省时，具有提高工作效率和明显降低成本的效果。可节约成本约70%～90%。尤其适合批量体检中应用。
参考方献
1 叶应妩，王毓三主编全国临床检验操作规程第2版南京：东南大学出版社，1997341
2 朱忠勇主编实用医学检验学北京：人民军医出版社，1996920
3 李影林主编中华医学检验全书北京：人民卫生出版社，19972146
(收稿日期：1998-10-29)
作者简介：席纪荷，女，1949年7月生，主管检验师，太原市中心医院，030009, 百拇医药