不同溶剂对雷帕霉素含量测定的影响
作者：余 辉
单位：国家医药管理局 福建省微生物研究所
关键词：雷帕霉素；含量测定
海峡药学990322 摘要 雷帕霉素是吸水链霉菌产生的三烯大环内酯免疫抑制剂，在不同溶剂中稳定性不同，根据实验结果，选择以丙酮作溶剂进行含量测定，方法准确，可靠。
The Effect of Rapamycin Content D etermination
in Different Solvent
Yu Hui
(Institute of Microbiology，State Pharm aceutical Administration
, 百拇医药
of China ＆ Fujian Province)
Rapamycin is a triene macro lid e immunossuppressant by Str.Hygroscopicu s.Its stability is different in differen ce solvent.According to determination result，we choice acetone for content dete rmination.The method is accurate，good re peatatbility.
Key words Rapamycin Content deter mination
雷帕霉素是吸水链霉菌产生的新型强效免疫抑制剂，属含氮三烯大环内酯类抗生素，有关资料报道，[1]雷帕霉素的含量测定供试品溶液制备以甲醇作溶剂制成，作者发现雷帕霉素在甲醇中不稳定，难以准确测定其含量，本文报告了分别用文献报道的流动相、甲醇、二氯甲烷，丙酮等不同极性溶剂制备供试品液室温放置不同时间后测定的峰面积积分情况，根据实验结果，选定以丙酮作溶剂进行含量测定，方法较为准确，可靠。
, 百拇医药
1 材料和试剂 雷帕霉素供试品(福建省微生物研究所提供，含量98.3%)甲醇、丙酮，二氯甲烷为分析纯。
2 仪器与色谱条件 高效液相色谱系统：岛津LC-4A液相色谱仪，SPD-2AS紫外检测器，C-R3A积分仪。色谱条件：色谱柱C18分析柱(250mm×4.6mm，10μm)。流动相：甲醇-水(75∶25)；检测波长：277nm流速：0.7ml/min 柱温：40℃。
3 方法与结果
3.1 精密称取雷帕霉素供试品适量，分别用上述流动相、甲醇，二氯甲烷、丙酮作溶剂制成每毫升约含0.5mg的贮备液，在15℃下放置0、2、4、8h及1d分别取样后进样6μl进行HPLC测定，记录色谱图积分面积，结果(见表1)。
表1 不同溶剂不同时间雷帕霉素积分面积 溶剂
, 百拇医药
0h
2h
4h
8h
1d
RSD%
流动相
2479766
2516222
2410923
2296992
2102013
7.08
, 百拇医药
甲 醇
2690195
2579784
2574771
2288528
2231160
8.12
二氧甲烷
2483653
2452854
2497631
2402102
, 百拇医药
2354692
2.43
丙 酮
2328568
2372598
2373257
2397333
2405510
1.26
由表1可知，雷帕霉素在甲醇和流动相中不稳定，其峰面积随溶液放置时间的延长而逐渐减小，杂质峰逐渐增强，影响含量测定(见图1)。
, 百拇医药
图1 不同时间甲醇中雷帕霉素色谱图
a：0h b：2h c：4h d：8h e：1d
在丙酮溶剂中，雷帕霉素峰面积重现性较好，基线也较稳定，根据上述实验结果，选用了丙酮作为溶剂进行定量测定研究。
3.2 线性关系 精密称取雷帕霉素供试品适量，用丙酮制成每1ml中含雷帕霉素440μg的溶液，分别进样4、5、6、7、8μl记录色谱图，以峰面积Y为纵坐标，进样量X(μg)为横坐标，进行线性回归，得回归方程为：Y＝794752.5X-52664，r＝0.9994，结果表明，雷帕霉素进样量在1.76～3.52μg范围内线性关系良好。
3.3 精密度试验 取用丙酮制成的雷帕霉素供试品(440μg/ml)6μl重复进样5次，峰面积积分值的RSD为1.06%(n＝5)。
, 百拇医药
3.4 回收率试验 精密称取雷帕霉素供试品适量用丙酮制成每1ml中含雷帕霉素0.5mg的溶液进样6μl进行测定按回归方程计算含量，雷帕霉素平均回收率为98.9%(n＝3)，RSD为1.1%。
图2 雷帕霉素在丙酮中的色谱图
1、2为丙酮溶剂峰
4 讨论 雷帕霉素在甲醇中不稳定，相对含量在规定时间内从98.3%降至91.5%，杂质峰明显增加，在二氯甲烷和丙酮中，在规定时间内没有出现杂质峰，由于二氯甲烷毒性较大，所以采用丙酮，虽然丙酮在277nm有吸收峰，但它与主峰完全分开，不干扰测定(见图2)。有资料报道[2]，活泼羰基化合物与甲醇作用可形成半缩醛，而雷帕霉素结构中含有多个羰基，所以有可能与甲醇发生化学反应使之不稳定，作者认为用丙酮作溶剂较适宜。
(雷帕霉素课题组提供供试品，特此致谢!)
参考文献
1.Wang CP et al：Journal of Liqui d Chromatography，1995，18(9)∶1801～1808
2.张治锬：抗生素药品检验，人民卫生出版社，北京，1987；337, http://www.100md.com
单位：国家医药管理局 福建省微生物研究所
关键词：雷帕霉素；含量测定
海峡药学990322 摘要 雷帕霉素是吸水链霉菌产生的三烯大环内酯免疫抑制剂，在不同溶剂中稳定性不同，根据实验结果，选择以丙酮作溶剂进行含量测定，方法准确，可靠。
The Effect of Rapamycin Content D etermination
in Different Solvent
Yu Hui
(Institute of Microbiology，State Pharm aceutical Administration
, 百拇医药
of China ＆ Fujian Province)
Rapamycin is a triene macro lid e immunossuppressant by Str.Hygroscopicu s.Its stability is different in differen ce solvent.According to determination result，we choice acetone for content dete rmination.The method is accurate，good re peatatbility.
Key words Rapamycin Content deter mination
雷帕霉素是吸水链霉菌产生的新型强效免疫抑制剂，属含氮三烯大环内酯类抗生素，有关资料报道，[1]雷帕霉素的含量测定供试品溶液制备以甲醇作溶剂制成，作者发现雷帕霉素在甲醇中不稳定，难以准确测定其含量，本文报告了分别用文献报道的流动相、甲醇、二氯甲烷，丙酮等不同极性溶剂制备供试品液室温放置不同时间后测定的峰面积积分情况，根据实验结果，选定以丙酮作溶剂进行含量测定，方法较为准确，可靠。
, 百拇医药
1 材料和试剂 雷帕霉素供试品(福建省微生物研究所提供，含量98.3%)甲醇、丙酮，二氯甲烷为分析纯。
2 仪器与色谱条件 高效液相色谱系统：岛津LC-4A液相色谱仪，SPD-2AS紫外检测器，C-R3A积分仪。色谱条件：色谱柱C18分析柱(250mm×4.6mm，10μm)。流动相：甲醇-水(75∶25)；检测波长：277nm流速：0.7ml/min 柱温：40℃。
3 方法与结果
3.1 精密称取雷帕霉素供试品适量，分别用上述流动相、甲醇，二氯甲烷、丙酮作溶剂制成每毫升约含0.5mg的贮备液，在15℃下放置0、2、4、8h及1d分别取样后进样6μl进行HPLC测定，记录色谱图积分面积，结果(见表1)。
表1 不同溶剂不同时间雷帕霉素积分面积 溶剂
, 百拇医药
0h
2h
4h
8h
1d
RSD%
流动相
2479766
2516222
2410923
2296992
2102013
7.08
, 百拇医药
甲 醇
2690195
2579784
2574771
2288528
2231160
8.12
二氧甲烷
2483653
2452854
2497631
2402102
, 百拇医药
2354692
2.43
丙 酮
2328568
2372598
2373257
2397333
2405510
1.26
由表1可知，雷帕霉素在甲醇和流动相中不稳定，其峰面积随溶液放置时间的延长而逐渐减小，杂质峰逐渐增强，影响含量测定(见图1)。
, 百拇医药
图1 不同时间甲醇中雷帕霉素色谱图
a：0h b：2h c：4h d：8h e：1d
在丙酮溶剂中，雷帕霉素峰面积重现性较好，基线也较稳定，根据上述实验结果，选用了丙酮作为溶剂进行定量测定研究。
3.2 线性关系 精密称取雷帕霉素供试品适量，用丙酮制成每1ml中含雷帕霉素440μg的溶液，分别进样4、5、6、7、8μl记录色谱图，以峰面积Y为纵坐标，进样量X(μg)为横坐标，进行线性回归，得回归方程为：Y＝794752.5X-52664，r＝0.9994，结果表明，雷帕霉素进样量在1.76～3.52μg范围内线性关系良好。
3.3 精密度试验 取用丙酮制成的雷帕霉素供试品(440μg/ml)6μl重复进样5次，峰面积积分值的RSD为1.06%(n＝5)。
, 百拇医药
3.4 回收率试验 精密称取雷帕霉素供试品适量用丙酮制成每1ml中含雷帕霉素0.5mg的溶液进样6μl进行测定按回归方程计算含量，雷帕霉素平均回收率为98.9%(n＝3)，RSD为1.1%。
图2 雷帕霉素在丙酮中的色谱图
1、2为丙酮溶剂峰
4 讨论 雷帕霉素在甲醇中不稳定，相对含量在规定时间内从98.3%降至91.5%，杂质峰明显增加，在二氯甲烷和丙酮中，在规定时间内没有出现杂质峰，由于二氯甲烷毒性较大，所以采用丙酮，虽然丙酮在277nm有吸收峰，但它与主峰完全分开，不干扰测定(见图2)。有资料报道[2]，活泼羰基化合物与甲醇作用可形成半缩醛，而雷帕霉素结构中含有多个羰基，所以有可能与甲醇发生化学反应使之不稳定，作者认为用丙酮作溶剂较适宜。
(雷帕霉素课题组提供供试品，特此致谢!)
参考文献
1.Wang CP et al：Journal of Liqui d Chromatography，1995，18(9)∶1801～1808
2.张治锬：抗生素药品检验，人民卫生出版社，北京，1987；337, http://www.100md.com