甲硝唑注射液的细菌内毒素检测探讨
作者：王如真 薛时齐
单位：福清市医院
关键词：
海峡药学990412 甲硝唑注射液《中国药典》1995年版二部收载为热原检查法。我院自1996年以来进行了细菌内毒素检查法的可行性试验，结果满意。现将其研究应用结果报告如下。
1 试验材料
1.1 甲硝唑注射液(规格100 ml：甲硝唑0.5 g)6批，本院制剂室生产。
1.2 细菌内毒素工作品(1.0 EU/支，批号960305)。
1.3 鲎试剂(灵敏度0.5 EU.ml-1，批号960325)。
, http://www.100md.com
1.4 鲎试剂溶解水(2 ml/支，内毒素含量<0.03 EU.ml-1，批号960420)。以上试剂均为厦门鲎试剂厂出品。
2 方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度复核 按中国药典1995年版[1]规定方法复核灵敏度(入0.5 EU.ml-1)，结果符合规定。
2.2 细菌内毒素限值计算 按中国药典1995年版二部，本品热原试验注射剂量M为10 ml.kg-1，细菌内毒素致热阈值K为10 EU.kg-1，因此本品细菌内毒素限值为L＝K/M＝1 EU.ml-1。样品最大有效稀释倍数(MVD)。MVD＝L/λ＝2。
2.3 抑制或增强试验。将样品按MVD稀释后，用此稀释液将细菌内毒素工作品按等比例稀释成一系列浓度的内毒素溶液，与鲎试剂进行凝胶化反应，结果(见表1)。
, 百拇医药
表1 甲硝唑注射液的抑制增强试验 样品批号
鲎试剂
灵敏度
0.5 EU.ml-1
细菌内毒素工作品浓度(EU.ml-1)
1
0.5
0.25
0.125
阴性对照
950309
++++
, http://www.100md.com
++++------------
960418
++++
++++------------
960519
++++
++++------------
960808
++++
++++------------
960905
++++
, 百拇医药
++++------------
961025
++++
++++------------
2.4 样品溶解鲎试剂，分别添加内毒素使成0.5、0.25和0 EU/ml浓度，使其凝胶化反应，结果(见表2)，说明本法可靠。表2 甲硝唑注射液加内毒素试验 样品批号
样品添加内毒素浓度(EU/ml)
0.5
0.25
0
950309
, http://www.100md.com
++----
960418
++----
960519
++----
960808
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960905
++----
961025
++----
2.5 细菌内毒素检查法与热原检查法结果对比：检测了6批样品，2种检测结果(见表3)，说明2种方法结果完全一致，从而验证细菌内毒素检查法可代替热原检查法检测内毒素。表3 细菌内毒素查法和热原检查法检测甲硝唑注射液试验 样品批号
, http://www.100md.com
鲎试剂细菌内毒素试验
(0.5 EU/ml)
结 论
热原检查法
结 论
注射后体温变化值
950309
-
-
合格
0.2
0.1
-0.1
, http://www.100md.com
合格
960418
-
-
合格
0.3
0.35
0.05
合格
960519
-
-
合格
, http://www.100md.com 0.1
0.15
0
合格
960808
-
-
合格
0.25
0
0.15
合格
960905
, 百拇医药 -
-
合格
0.2
0.1
0
合格
961025
-
-
合格
0.05
0.30
0.06
, http://www.100md.com
合格
3 讨论
从本试验得出，甲硝唑注射液无需稀释对标示灵敏度为0.5 EU.ml-1可用于样品的细菌内毒素检测，经临床应用，均未发现热原反应，为基层医院提供简便、快速、敏感及经济等检测方法，保证药品应用的安全性。
参考文献
1 卫生部药品标准WS1-C2-0002-89
2 药物化学.李正化主编.高等医药院校教材.第二版.北京，人民卫生出版社，1985；301～302, http://www.100md.com
单位：福清市医院
关键词：
海峡药学990412 甲硝唑注射液《中国药典》1995年版二部收载为热原检查法。我院自1996年以来进行了细菌内毒素检查法的可行性试验，结果满意。现将其研究应用结果报告如下。
1 试验材料
1.1 甲硝唑注射液(规格100 ml：甲硝唑0.5 g)6批，本院制剂室生产。
1.2 细菌内毒素工作品(1.0 EU/支，批号960305)。
1.3 鲎试剂(灵敏度0.5 EU.ml-1，批号960325)。
, http://www.100md.com
1.4 鲎试剂溶解水(2 ml/支，内毒素含量<0.03 EU.ml-1，批号960420)。以上试剂均为厦门鲎试剂厂出品。
2 方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度复核 按中国药典1995年版[1]规定方法复核灵敏度(入0.5 EU.ml-1)，结果符合规定。
2.2 细菌内毒素限值计算 按中国药典1995年版二部，本品热原试验注射剂量M为10 ml.kg-1，细菌内毒素致热阈值K为10 EU.kg-1，因此本品细菌内毒素限值为L＝K/M＝1 EU.ml-1。样品最大有效稀释倍数(MVD)。MVD＝L/λ＝2。
2.3 抑制或增强试验。将样品按MVD稀释后，用此稀释液将细菌内毒素工作品按等比例稀释成一系列浓度的内毒素溶液，与鲎试剂进行凝胶化反应，结果(见表1)。
, 百拇医药
表1 甲硝唑注射液的抑制增强试验 样品批号
鲎试剂
灵敏度
0.5 EU.ml-1
细菌内毒素工作品浓度(EU.ml-1)
1
0.5
0.25
0.125
阴性对照
950309
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, http://www.100md.com
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960418
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, 百拇医药
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961025
++++
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2.4 样品溶解鲎试剂，分别添加内毒素使成0.5、0.25和0 EU/ml浓度，使其凝胶化反应，结果(见表2)，说明本法可靠。表2 甲硝唑注射液加内毒素试验 样品批号
样品添加内毒素浓度(EU/ml)
0.5
0.25
0
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, http://www.100md.com
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960418
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960519
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960808
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960905
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961025
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2.5 细菌内毒素检查法与热原检查法结果对比：检测了6批样品，2种检测结果(见表3)，说明2种方法结果完全一致，从而验证细菌内毒素检查法可代替热原检查法检测内毒素。表3 细菌内毒素查法和热原检查法检测甲硝唑注射液试验 样品批号
, http://www.100md.com
鲎试剂细菌内毒素试验
(0.5 EU/ml)
结 论
热原检查法
结 论
注射后体温变化值
950309
-
-
合格
0.2
0.1
-0.1
, http://www.100md.com
合格
960418
-
-
合格
0.3
0.35
0.05
合格
960519
-
-
合格
, http://www.100md.com 0.1
0.15
0
合格
960808
-
-
合格
0.25
0
0.15
合格
960905
, 百拇医药 -
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合格
0.2
0.1
0
合格
961025
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合格
0.05
0.30
0.06
, http://www.100md.com
合格
3 讨论
从本试验得出，甲硝唑注射液无需稀释对标示灵敏度为0.5 EU.ml-1可用于样品的细菌内毒素检测，经临床应用，均未发现热原反应，为基层医院提供简便、快速、敏感及经济等检测方法，保证药品应用的安全性。
参考文献
1 卫生部药品标准WS1-C2-0002-89
2 药物化学.李正化主编.高等医药院校教材.第二版.北京，人民卫生出版社，1985；301～302, http://www.100md.com