利用正交试验法制订甲硝唑注射液配制工艺
作者：詹顺江 闫保梅 孙红梅 张玲 温素萍
单位：詹顺江(河南焦作矿务局中央医院 焦作 454150)；闫保梅(河南焦作矿务局中央医院 焦作 454150)；孙红梅(河南焦作矿务局中央医院 焦作 454150)；张玲(河南焦作矿务局中央医院 焦作 454150) 温素萍(河南焦作矿务局中央医院 焦作 454150)
关键词：正交试验法，甲硝唑注射液，配制工艺
摘 要摘 要：利用正交试验法对影响因素浓配浓度、吸附时间、活性炭用量及与氯化钠配伍方式各选择3个水平进行试验，考察指标是甲硝唑被吸附量及细菌内毒素量。结果活性炭用量对指标影响较大，活性炭用量越大，吸附时间越长，浓配浓度越高吸附率越大，细菌内毒素阳性率越低；混合配伍吸附率较大 。
甲硝唑注射液生产工艺尽管在有关书籍[1，2，3，4]中有所规定，但比较笼统且都不尽相同，特别是配制过程。例如：对含量、细菌内毒素影响较大的四因素——浓配浓度、吸附时间、活性炭用量以及与氯化钠配伍脱炭方式。笔者为了完善其生产工艺，结合实际工作对上述4因素各拟订3水平采用正交试验法考察其分别对含量、细菌内毒素影响程度的大小，并根据试验结果制订出了详细的生产工艺。
, 百拇医药
1 仪器、试剂与药品
1.1 仪器 TU-1901型紫外可见分光光度计(北京通用仪器设备公司)；TG328A型全机械加砝分析天平(感量0.1 mg，上海第二天平仪器厂)。
1.2 试剂 0.5 EU/ml，0.25 EU/ml鲎试剂(960401、970107厦门鲎试剂厂)；767型针用炭(96-55588上海炭化总厂)。
1.3 药品 甲硝唑(960615沙市第三制药厂)(96114天津河北制药厂)(961185武汉制药集团有限公司)；氯化钠(天津海化制药有限公司960115)。
2 实验方法
2.1 试验设计 采用正交试验表L9(34)(见表1)，因素A、B、C、D分别为浓配浓度、吸附时间、活性炭用量、甲硝唑与氯化钠配伍脱炭方式。每个因素选择3个水平：1.5%、1.0%、0.5%；45 min、30 min、15 min；0.010%、0.050%、0.075%(g.ml-1按配制总量)；混合脱炭、分别溶解吸附(炭量比为1∶4)先过滤氯化钠再过滤甲硝唑、先过滤甲硝唑再过滤氯化钠，试验按1万ml总量模拟配制，用3个不同厂家的甲硝唑各做1次，取平均值；瓶子、胶塞、薄膜、滤材、滤器等材料及处理方法与输液生产相同；甲硝唑的量(Wo)用分析天平称取；在无菌间操作。
, 百拇医药
表1 正交试验表L9(34)
试验号
列号
结果
A
B
C
D
吸附率
(%)
内毒素
1
1
, 百拇医药
1
1
1
7.8
+++
2
1
2
2
2
8.4---
3
1
3
, 百拇医药
3
3
8.6---
4
2
1
2
3
8.0---
5
2
2
3
1
, 百拇医药
10.6---
6
2
3
1
2
7.0
++-
7
3
1
3
2
10.1---
, 百拇医药
8
3
2
1
3
5.9
++-
9
3
3
2
1
7.2
+--
, 百拇医药
Ⅰj
24.8
25.9
20.7
25.6
因素Beta值：
Ⅱj
25.6
24.9
23.6
25.5
A＝0.239
Ⅲj
, 百拇医药
23.2
22.8
29.3
22.5
B＝0.309
Ⅰj
8.2667
8.6333
6.9000
8.5333
C＝0.854
Ⅱj
8.5333
, 百拇医药
8.3000
7.8667
8.5000
D＝0.344
Ⅲj
7.7333
7.6000
9.7667
7.5000
Rj
0.8000
1.0333
2.8667
, http://www.100md.com
1.0000
2.2 操作方法 将称量好的原料按每组实验要求(甲硝唑、氯化钠有先后过滤顺序的要分开溶解、加热、脱炭，用炭量比为1∶4)溶解加热至沸加入1/2量的炭，搅拌均匀，停止加热，静置吸附规定吸附时间的1/2，再加入1/2量的炭，摇拌均匀，静置吸附至规定时间，而后脱炭滤过，并用约400 ml注射用水冲洗容器，并通过滤盘滤过，滤液加水至1万ml混匀，灌封，115℃、0.07 MPa，灭菌30 min。
2.3 考察指标 甲硝唑被吸附量(用百分吸附率表示)及细菌内毒素含量，前者的测定方法是：精取检品适量用0.1 mol.L-1盐酸液稀释至每毫升含甲硝唑约12.5 μg，在277 nm处测其吸附度A值，百分吸附率＝(1-A×100×稀释倍数/377×WO)×100%；后者采用凝胶限度法[5]：>0.5 EU/ml为阳性，<0.5 EU/ml为阴性。
, 百拇医药
3 试验结果及结果分析
3.1 结果(见表1)。
3.2 结果分析 百分吸附率可从Rj值看出：4因素对其的影响由大到小依次为C-D-B-A。对细菌内毒素量的影响较大的是因素C，其次是A和B。活性炭用量越大、吸附时间越长、浓配浓度越高，吸附率越大，细菌内毒素阳性率越低；混合配伍吸附率较大；吸附率与细菌内毒素相互对立。
4 处方及生产工艺
4.1 处方 甲硝唑21.2 g(按理论量的106.0%)；氯化钠90 g；活性炭5.0 g；注射用水加至1万ml。
4.2 生产工艺 取注射用水约400 ml，加氯化钠搅拌使溶，加热至沸后加入2 g活性炭，搅拌均匀，停止加热，静置15 min，再加入2 g活性炭搅拌均匀，置15 min；另用容器加入热注射用水(约70℃)约1500 ml，加入甲硝唑，搅拌使溶，加入1 g活性炭，搅拌均匀，静置吸附30 min；而后过滤甲硝唑，再过滤氯化钠，用约400 ml注射用水冲洗容器并过滤，滤液加水至1万ml，搅拌均匀，灌封，115℃、0.07 Mpa灭菌30 min。
, 百拇医药
我们使用该法已生产74批产品，测定成品含量，含量(占标示量)在96.0%～100.0%之间的72批(占97.3%)，95.8%及94.2%各1批(占2.7%)；检查细菌内毒素每毫升含量均小于0.5 EU。74批中经市药检所先后抽取5批，均与自检结果相符。
参考文献：
[1]孙旭光主编：药物新制剂大全.黑龙江，科技出版社，1995：9
[2]中国医院制剂规范.西药制剂，第二版，北京，中国医药科技出版社，1995；205
[3]中国人民解放军总后勤部卫生部编：医疗单位制剂规范，北京，人民军医出版社，1993：410
[4]南京卫生局编：医院制剂规范，南京，南京大学出版社，1989：7
[5]中国药典.二部.1995；附录76, 百拇医药
单位：詹顺江(河南焦作矿务局中央医院 焦作 454150)；闫保梅(河南焦作矿务局中央医院 焦作 454150)；孙红梅(河南焦作矿务局中央医院 焦作 454150)；张玲(河南焦作矿务局中央医院 焦作 454150) 温素萍(河南焦作矿务局中央医院 焦作 454150)
关键词：正交试验法，甲硝唑注射液，配制工艺
摘 要摘 要：利用正交试验法对影响因素浓配浓度、吸附时间、活性炭用量及与氯化钠配伍方式各选择3个水平进行试验，考察指标是甲硝唑被吸附量及细菌内毒素量。结果活性炭用量对指标影响较大，活性炭用量越大，吸附时间越长，浓配浓度越高吸附率越大，细菌内毒素阳性率越低；混合配伍吸附率较大 。
甲硝唑注射液生产工艺尽管在有关书籍[1，2，3，4]中有所规定，但比较笼统且都不尽相同，特别是配制过程。例如：对含量、细菌内毒素影响较大的四因素——浓配浓度、吸附时间、活性炭用量以及与氯化钠配伍脱炭方式。笔者为了完善其生产工艺，结合实际工作对上述4因素各拟订3水平采用正交试验法考察其分别对含量、细菌内毒素影响程度的大小，并根据试验结果制订出了详细的生产工艺。
, 百拇医药
1 仪器、试剂与药品
1.1 仪器 TU-1901型紫外可见分光光度计(北京通用仪器设备公司)；TG328A型全机械加砝分析天平(感量0.1 mg，上海第二天平仪器厂)。
1.2 试剂 0.5 EU/ml，0.25 EU/ml鲎试剂(960401、970107厦门鲎试剂厂)；767型针用炭(96-55588上海炭化总厂)。
1.3 药品 甲硝唑(960615沙市第三制药厂)(96114天津河北制药厂)(961185武汉制药集团有限公司)；氯化钠(天津海化制药有限公司960115)。
2 实验方法
2.1 试验设计 采用正交试验表L9(34)(见表1)，因素A、B、C、D分别为浓配浓度、吸附时间、活性炭用量、甲硝唑与氯化钠配伍脱炭方式。每个因素选择3个水平：1.5%、1.0%、0.5%；45 min、30 min、15 min；0.010%、0.050%、0.075%(g.ml-1按配制总量)；混合脱炭、分别溶解吸附(炭量比为1∶4)先过滤氯化钠再过滤甲硝唑、先过滤甲硝唑再过滤氯化钠，试验按1万ml总量模拟配制，用3个不同厂家的甲硝唑各做1次，取平均值；瓶子、胶塞、薄膜、滤材、滤器等材料及处理方法与输液生产相同；甲硝唑的量(Wo)用分析天平称取；在无菌间操作。
, 百拇医药
表1 正交试验表L9(34)
试验号
列号
结果
A
B
C
D
吸附率
(%)
内毒素
1
1
, 百拇医药
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7.8
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Ⅰj
24.8
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因素Beta值：
Ⅱj
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24.9
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A＝0.239
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B＝0.309
Ⅰj
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C＝0.854
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D＝0.344
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0.8000
1.0333
2.8667
, http://www.100md.com
1.0000
2.2 操作方法 将称量好的原料按每组实验要求(甲硝唑、氯化钠有先后过滤顺序的要分开溶解、加热、脱炭，用炭量比为1∶4)溶解加热至沸加入1/2量的炭，搅拌均匀，停止加热，静置吸附规定吸附时间的1/2，再加入1/2量的炭，摇拌均匀，静置吸附至规定时间，而后脱炭滤过，并用约400 ml注射用水冲洗容器，并通过滤盘滤过，滤液加水至1万ml混匀，灌封，115℃、0.07 MPa，灭菌30 min。
2.3 考察指标 甲硝唑被吸附量(用百分吸附率表示)及细菌内毒素含量，前者的测定方法是：精取检品适量用0.1 mol.L-1盐酸液稀释至每毫升含甲硝唑约12.5 μg，在277 nm处测其吸附度A值，百分吸附率＝(1-A×100×稀释倍数/377×WO)×100%；后者采用凝胶限度法[5]：>0.5 EU/ml为阳性，<0.5 EU/ml为阴性。
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3 试验结果及结果分析
3.1 结果(见表1)。
3.2 结果分析 百分吸附率可从Rj值看出：4因素对其的影响由大到小依次为C-D-B-A。对细菌内毒素量的影响较大的是因素C，其次是A和B。活性炭用量越大、吸附时间越长、浓配浓度越高，吸附率越大，细菌内毒素阳性率越低；混合配伍吸附率较大；吸附率与细菌内毒素相互对立。
4 处方及生产工艺
4.1 处方 甲硝唑21.2 g(按理论量的106.0%)；氯化钠90 g；活性炭5.0 g；注射用水加至1万ml。
4.2 生产工艺 取注射用水约400 ml，加氯化钠搅拌使溶，加热至沸后加入2 g活性炭，搅拌均匀，停止加热，静置15 min，再加入2 g活性炭搅拌均匀，置15 min；另用容器加入热注射用水(约70℃)约1500 ml，加入甲硝唑，搅拌使溶，加入1 g活性炭，搅拌均匀，静置吸附30 min；而后过滤甲硝唑，再过滤氯化钠，用约400 ml注射用水冲洗容器并过滤，滤液加水至1万ml，搅拌均匀，灌封，115℃、0.07 Mpa灭菌30 min。
, 百拇医药
我们使用该法已生产74批产品，测定成品含量，含量(占标示量)在96.0%～100.0%之间的72批(占97.3%)，95.8%及94.2%各1批(占2.7%)；检查细菌内毒素每毫升含量均小于0.5 EU。74批中经市药检所先后抽取5批，均与自检结果相符。
参考文献：
[1]孙旭光主编：药物新制剂大全.黑龙江，科技出版社，1995：9
[2]中国医院制剂规范.西药制剂，第二版，北京，中国医药科技出版社，1995；205
[3]中国人民解放军总后勤部卫生部编：医疗单位制剂规范，北京，人民军医出版社，1993：410
[4]南京卫生局编：医院制剂规范，南京，南京大学出版社，1989：7
[5]中国药典.二部.1995；附录76, 百拇医药