薄层扫描法测定马蝎蚕胶囊中士的宁和马钱子碱的含量
作者：韩丽萍 庾学超 徐腾 刘铁燕
单位：中国人民解放军广州军区联勤部药品检验所 广州 510500
关键词：薄层扫描法；士的宁；马钱子
薄层扫描法测定马蝎蚕胶囊中士的宁和马钱子碱的含量 摘 要 目的：建立薄层扫描法测定马蝎蚕胶囊中士的宁和马钱子含量的方法。方法：固定相:硅胶GF254,流动相:丙酮-氯仿-浓氨水(30∶15∶1),参比波长325nm,测定波长254nm。结果：两成分分离良好,士的宁在1～5μg、马钱子碱在0.5～2.5μg 范围内呈良好的线性关系。平均回收率士的宁为101.0%(n=5),RSD为3.20%,马钱子碱为101.6%(n=5),RSD为2.72%。结论：本方法可用于同时测定马蝎蚕胶囊中士的宁和马钱子含量。
中图分类号 R914.1
, http://www.100md.com
DETERMINITION OF STRYCHNINE AND BRUCINE IN MAXIECAN CAPSULE BY THIN LAYERCHROMATOGRAPHIC SCANNING
Han Liping，Yu Xuechao，Xu Teng，Liu Tieyan
(Institute of Drug Determination of Guangzhou Military Region,GuangZhou 510500)
Abstract AIM To develop a method of thin layer chromatographic scanning to determine the content of strychnine and brucine in Maxiecan Capsule.METHODS Silica GF254 thin layer was used,and the mobile phase consisted of acetone-chloroform -ammonia water(30∶15∶1)with the control wave length of 325nm and detection wave length of 254nm.RESULTS Strychnine and brucine were separated sufficiently and the linear ranges were 1～5μg and 0.5～2.5μg respectively.The mean recovery of strychnine and brucine was 101.0% and 101.6%,with RSD of 3.20% and 2.72% respectively.CONCLUSION This method can be used for the simultaneous determination of strychnine and brucine in Maxiecan capsule.
, http://www.100md.com
Key words Thin layerchromatography scanning;Strychnine;Brucine
马蝎蚕胶囊是我军区某医疗单位研制的中药制剂，临床上用于治疗腰椎间盘突出及其它腰腿痛疾病，具有较好的疗效。处方中含有马钱子、乳香、川牛膝等十多味药材，其中马钱子为主药，在处方中用量较高。马钱子中的主要有效成分为士的宁(strychnine)和马钱子碱(brucine)，它们是典型的竞争性甘氨酸突触后膜抑制作用的拮抗剂，有剧毒，入药必须严格控制用量，国内已有多起因过量摄入马钱子生物碱而致死的报道。我们对这两种成分进行含量测定，以保证临床用药安全有效。
士的宁和马钱子碱均为极性较低的生物碱，易溶于氯仿。碱化后使生物碱游离，用氯仿提取。在硅胶GF254薄层上，以碱性流动相为展开剂，可获得满意的分离效果。并可用薄层扫描仪进行含量测定。
1 材 料
, http://www.100md.com
1.1 试药 士的宁与马钱子碱对照品(中国药品生物制品检定所)，马钱子(购于医药公司)。硅胶GF254、硅胶G(青岛海洋化工厂)，马蝎蚕胶囊(广州军区第二门诊部提供，批号 970421，970506，970823)，其余试剂均为分析纯。
1.2 仪器 CS-9000 型薄层扫描仪(日本岛津公司)，微量定量毛细管(Drummond化学公司，USA)。
2 方法与结果
2.1 薄层条件 固定相：胶GF254板，厚度300μm；展开剂：丙酮-氯仿-浓氨水(30∶15∶1)上行展开，展距15cm，晾干后于紫外灯下检视，士的宁与马钱子碱均呈荧光淬灭暗色斑点，测定波长λs=254nm，参比波长λr=325nm，锯齿法扫描。
2.2 标准溶液的制备 取马钱子碱与士的宁对照品适量，加甲醇配成0.5g.ml-1马钱子碱及1mg.ml-1士的宁的混合溶液，即为标准品溶液。
, 百拇医药
2.3 供试品溶液制备 取本品10丸(相当生药材0.5g)，倾出内容物，混合均匀，精密称取1g，置具塞量瓶中，精密加入浓氨试液1ml，润湿5min，再精密加入氯仿10ml，密塞，精密称定重量，轻轻不时振摇，室温放置24h，再称重，用氯仿补足损失的重量，充分振摇，滤过，取续滤液，即为供试品溶液。
2.4 线性考察 精密吸取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 μl，分别点于薄层板上，测定积分面积，以对照品量与峰面积作图。士的宁的线性回归方程为：
Y=9037X+3421，r=0.9999
在1～5mg范围内呈良好的线性关系。
马钱子碱线性回归方程为：
Y=9877X+4688,r=0.9999
, 百拇医药
在0.5～2.5mg范围内呈良好的线性关系。
2.5 阴性样品干扰试验 按处方组成量，取除去马钱子外的其余药材，称取0.6g，按供试品溶液项下方法提取操作，制得阴性对照品溶液，按上述薄层条件展开后，置紫外光灯下检视，在与对照品士的宁和马钱子色谱相应的位置上无斑点显示，表明本品组方中其它成分对该方法无干扰，薄层色谱见图1。
图1 马蝎蚕胶囊薄层色谱图
1 马钱子 2 马蝎蚕胶囊 3 阴性对照液
4 马钱子碱/士的宁混合样品 5 马钱子碱 6 士的宁
, 百拇医药 检测波长254nm，斑点检出阈值 0.005Abx
2.6 平行与重现性考察 同一样品溶液，取5份，各吸取5μl点于薄层板上，按上述方法展开后扫描测定，士的宁的峰面积分别为20408、20590、21488、21116、20223，RSD＝2.5%；马钱子碱的峰面积分别为15908、15652、16244、15768、16108，RSD＝1.5%。斑点扫描结果见图2。
图2 马蝎蚕胶囊薄层扫描图
1 马钱子碱 2 士的宁
2.7 回收率试验 精密称取不含马钱子的阴性对照样品0.6g，精密加入士的宁和马钱子碱对照品5.0mg和2.5mg，混匀，按上述方法测定。平均回收率士的宁为101.0%(n=5),RSD＝3.2%；马钱子碱为101.6%(n=5),RSD=2.72%。
, 百拇医药
2.8 稳定性考察 对同一斑点在不同时间扫描测定，结果显示，在2h内，斑点保持稳定，5次扫描积分值RSD为2.67%。
2.9 检出限量考察 将上述对照品溶液按顺序稀释2倍，制成不同浓度的系列溶液，分别吸取2μl点于薄层板上，紫外灯(254nm)下检视，马钱子碱0.125μg,士的宁为0.25μg时斑点仍清晰可见。
2.10 样品的含量测定 精密吸取供试品溶液5μl,对照品溶液2μl与6μl,分别交叉点于同一薄层板上,用上述方法试验,测定供试品溶液吸收度积分值与对照品吸收度积分值,按外标二点法计算含量,结果见表1。
表1 马钱子生药及马蝎蚕胶囊中士的宁和马钱子碱的含量
样 品
士的宁(%)
, 百拇医药
马钱子碱(%)
马钱子
1.025
0.672
马钱子
4.320
0.786
马钱子
1.504
0.987
马钱子
2.105
1.023
, 百拇医药
灸马钱子
1.008
0.876
灸马钱子
0.896
0.654
马蝎蚕胶囊
0.615
0.267
马蝎蚕胶囊
0.627
0.244
马蝎蚕胶囊
, 百拇医药
0.529
0.275
3 讨 论
3.1 用薄层法测定马钱子中生物碱的测定已有报道，中国药典95版采用薄层法鉴别马钱子碱和士的宁，碘化铋钾试液显色，需较低的相对湿度(20%左右)，才可达到较好的薄层效果，并且此方法不适合定量测定。本文采用的方法较简便，灵敏度高，斑点稳定，适用定性鉴别和含量测定。
3.2 本品因成分复杂，在提取时易产生乳化现象，故不应剧烈振摇，以免乳化影响提取效果,其提取效率的关键是碱化要完全，故氨水的浓度及用量要严格掌握。氯仿易挥发，滤过时应尽量在低温避风的实验室操作，展开剂的碱性对展开效果影响较大，需严格掌握。
3.3 药材市场采购的马钱子士的宁和马钱子碱的含量有较大差别，且含量比例不尽相同，个别品种士的宁含量较高，可能由于产地和品种不同。炮制马钱子含量较低，成品由于控制了入药马钱子的用量，士的宁及马钱子碱含量较稳定。因士的宁及马钱子碱毒性均较大，且临床用药周期较长，故必须同时控制两种成分含量，以保证临床安全用药。为保证成药的质量，在投药前对生药进行含量测定，很有必要。
作者简介：韩丽萍，女，理学硕士，副主任药师。
(本文编辑 梁爱君)
收稿日期：1999-01-19
修改日期：1999-07-12, 百拇医药
单位：中国人民解放军广州军区联勤部药品检验所 广州 510500
关键词：薄层扫描法；士的宁；马钱子
薄层扫描法测定马蝎蚕胶囊中士的宁和马钱子碱的含量 摘 要 目的：建立薄层扫描法测定马蝎蚕胶囊中士的宁和马钱子含量的方法。方法：固定相:硅胶GF254,流动相:丙酮-氯仿-浓氨水(30∶15∶1),参比波长325nm,测定波长254nm。结果：两成分分离良好,士的宁在1～5μg、马钱子碱在0.5～2.5μg 范围内呈良好的线性关系。平均回收率士的宁为101.0%(n=5),RSD为3.20%,马钱子碱为101.6%(n=5),RSD为2.72%。结论：本方法可用于同时测定马蝎蚕胶囊中士的宁和马钱子含量。
中图分类号 R914.1
, http://www.100md.com
DETERMINITION OF STRYCHNINE AND BRUCINE IN MAXIECAN CAPSULE BY THIN LAYERCHROMATOGRAPHIC SCANNING
Han Liping，Yu Xuechao，Xu Teng，Liu Tieyan
(Institute of Drug Determination of Guangzhou Military Region,GuangZhou 510500)
Abstract AIM To develop a method of thin layer chromatographic scanning to determine the content of strychnine and brucine in Maxiecan Capsule.METHODS Silica GF254 thin layer was used,and the mobile phase consisted of acetone-chloroform -ammonia water(30∶15∶1)with the control wave length of 325nm and detection wave length of 254nm.RESULTS Strychnine and brucine were separated sufficiently and the linear ranges were 1～5μg and 0.5～2.5μg respectively.The mean recovery of strychnine and brucine was 101.0% and 101.6%,with RSD of 3.20% and 2.72% respectively.CONCLUSION This method can be used for the simultaneous determination of strychnine and brucine in Maxiecan capsule.
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Key words Thin layerchromatography scanning;Strychnine;Brucine
马蝎蚕胶囊是我军区某医疗单位研制的中药制剂，临床上用于治疗腰椎间盘突出及其它腰腿痛疾病，具有较好的疗效。处方中含有马钱子、乳香、川牛膝等十多味药材，其中马钱子为主药，在处方中用量较高。马钱子中的主要有效成分为士的宁(strychnine)和马钱子碱(brucine)，它们是典型的竞争性甘氨酸突触后膜抑制作用的拮抗剂，有剧毒，入药必须严格控制用量，国内已有多起因过量摄入马钱子生物碱而致死的报道。我们对这两种成分进行含量测定，以保证临床用药安全有效。
士的宁和马钱子碱均为极性较低的生物碱，易溶于氯仿。碱化后使生物碱游离，用氯仿提取。在硅胶GF254薄层上，以碱性流动相为展开剂，可获得满意的分离效果。并可用薄层扫描仪进行含量测定。
1 材 料
, http://www.100md.com
1.1 试药 士的宁与马钱子碱对照品(中国药品生物制品检定所)，马钱子(购于医药公司)。硅胶GF254、硅胶G(青岛海洋化工厂)，马蝎蚕胶囊(广州军区第二门诊部提供，批号 970421，970506，970823)，其余试剂均为分析纯。
1.2 仪器 CS-9000 型薄层扫描仪(日本岛津公司)，微量定量毛细管(Drummond化学公司，USA)。
2 方法与结果
2.1 薄层条件 固定相：胶GF254板，厚度300μm；展开剂：丙酮-氯仿-浓氨水(30∶15∶1)上行展开，展距15cm，晾干后于紫外灯下检视，士的宁与马钱子碱均呈荧光淬灭暗色斑点，测定波长λs=254nm，参比波长λr=325nm，锯齿法扫描。
2.2 标准溶液的制备 取马钱子碱与士的宁对照品适量，加甲醇配成0.5g.ml-1马钱子碱及1mg.ml-1士的宁的混合溶液，即为标准品溶液。
, 百拇医药
2.3 供试品溶液制备 取本品10丸(相当生药材0.5g)，倾出内容物，混合均匀，精密称取1g，置具塞量瓶中，精密加入浓氨试液1ml，润湿5min，再精密加入氯仿10ml，密塞，精密称定重量，轻轻不时振摇，室温放置24h，再称重，用氯仿补足损失的重量，充分振摇，滤过，取续滤液，即为供试品溶液。
2.4 线性考察 精密吸取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 μl，分别点于薄层板上，测定积分面积，以对照品量与峰面积作图。士的宁的线性回归方程为：
Y=9037X+3421，r=0.9999
在1～5mg范围内呈良好的线性关系。
马钱子碱线性回归方程为：
Y=9877X+4688,r=0.9999
, 百拇医药
在0.5～2.5mg范围内呈良好的线性关系。
2.5 阴性样品干扰试验 按处方组成量，取除去马钱子外的其余药材，称取0.6g，按供试品溶液项下方法提取操作，制得阴性对照品溶液，按上述薄层条件展开后，置紫外光灯下检视，在与对照品士的宁和马钱子色谱相应的位置上无斑点显示，表明本品组方中其它成分对该方法无干扰，薄层色谱见图1。
图1 马蝎蚕胶囊薄层色谱图
1 马钱子 2 马蝎蚕胶囊 3 阴性对照液
4 马钱子碱/士的宁混合样品 5 马钱子碱 6 士的宁
, 百拇医药 检测波长254nm，斑点检出阈值 0.005Abx
2.6 平行与重现性考察 同一样品溶液，取5份，各吸取5μl点于薄层板上，按上述方法展开后扫描测定，士的宁的峰面积分别为20408、20590、21488、21116、20223，RSD＝2.5%；马钱子碱的峰面积分别为15908、15652、16244、15768、16108，RSD＝1.5%。斑点扫描结果见图2。
图2 马蝎蚕胶囊薄层扫描图
1 马钱子碱 2 士的宁
2.7 回收率试验 精密称取不含马钱子的阴性对照样品0.6g，精密加入士的宁和马钱子碱对照品5.0mg和2.5mg，混匀，按上述方法测定。平均回收率士的宁为101.0%(n=5),RSD＝3.2%；马钱子碱为101.6%(n=5),RSD=2.72%。
, 百拇医药
2.8 稳定性考察 对同一斑点在不同时间扫描测定，结果显示，在2h内，斑点保持稳定，5次扫描积分值RSD为2.67%。
2.9 检出限量考察 将上述对照品溶液按顺序稀释2倍，制成不同浓度的系列溶液，分别吸取2μl点于薄层板上，紫外灯(254nm)下检视，马钱子碱0.125μg,士的宁为0.25μg时斑点仍清晰可见。
2.10 样品的含量测定 精密吸取供试品溶液5μl,对照品溶液2μl与6μl,分别交叉点于同一薄层板上,用上述方法试验,测定供试品溶液吸收度积分值与对照品吸收度积分值,按外标二点法计算含量,结果见表1。
表1 马钱子生药及马蝎蚕胶囊中士的宁和马钱子碱的含量
样 品
士的宁(%)
, 百拇医药
马钱子碱(%)
马钱子
1.025
0.672
马钱子
4.320
0.786
马钱子
1.504
0.987
马钱子
2.105
1.023
, 百拇医药
灸马钱子
1.008
0.876
灸马钱子
0.896
0.654
马蝎蚕胶囊
0.615
0.267
马蝎蚕胶囊
0.627
0.244
马蝎蚕胶囊
, 百拇医药
0.529
0.275
3 讨 论
3.1 用薄层法测定马钱子中生物碱的测定已有报道，中国药典95版采用薄层法鉴别马钱子碱和士的宁，碘化铋钾试液显色，需较低的相对湿度(20%左右)，才可达到较好的薄层效果，并且此方法不适合定量测定。本文采用的方法较简便，灵敏度高，斑点稳定，适用定性鉴别和含量测定。
3.2 本品因成分复杂，在提取时易产生乳化现象，故不应剧烈振摇，以免乳化影响提取效果,其提取效率的关键是碱化要完全，故氨水的浓度及用量要严格掌握。氯仿易挥发，滤过时应尽量在低温避风的实验室操作，展开剂的碱性对展开效果影响较大，需严格掌握。
3.3 药材市场采购的马钱子士的宁和马钱子碱的含量有较大差别，且含量比例不尽相同，个别品种士的宁含量较高，可能由于产地和品种不同。炮制马钱子含量较低，成品由于控制了入药马钱子的用量，士的宁及马钱子碱含量较稳定。因士的宁及马钱子碱毒性均较大，且临床用药周期较长，故必须同时控制两种成分含量，以保证临床安全用药。为保证成药的质量，在投药前对生药进行含量测定，很有必要。
作者简介：韩丽萍，女，理学硕士，副主任药师。
(本文编辑 梁爱君)
收稿日期：1999-01-19
修改日期：1999-07-12, 百拇医药