ELISA检测b型流感嗜血杆菌荚膜多糖抗体方法的建立
作者：何莉 李凤祥 袁曾麟
单位：100050 北京，中国药品生物制品检定所菌种室
关键词：
中华微生物990432 目前用于检测b型流感嗜血杆菌荚膜多糖(PRP)抗体的放免法(RIA)或酶标法(ELISA)都需要先制备PRP的酪胺化衍生物(用PRP-Ty表示)。为此我们研制了PRP-Ty，并用它建立相应的ELISA方法用于PRP抗体的检测。
在研制PRP-Ty过程中采用了CDAP为活化剂，代替了国际上常用的CNBr。我们用CDAP活化PRP后加入盐酸酪胺进行衍化反应，制备了两批PRP-Ty(PRP-Ty1和PRP-Ty2)。透析后用Sephadex G75柱凝胶过滤，去除未反应的Ty。两批PRP-Ty的Sephadex G75 OD275凝胶过滤图谱完全一致，各洗脱曲线上空流体积Vo处 均有一明显的吸收峰。收集Vo洗脱峰产物，测定其紫外吸收光谱，并与Ty、PRP和参比品PRP-Ty SB进行了比较。Ty在275nm有明显的吸收峰，PRP在240至400 nm无吸收峰。PRP-Ty1、2和参比品PRP-Ty SB在275 nm处均出现吸收峰，且峰形基本一致，证明两批产物是PRP-Ty衍化物。然后将PRP-Ty1、2和PRP-Ty SB分别包被ELISA板，检测同样的PRP阳性及阴性抗血清，三者结果基本一致；而用PRP或Ty单独包被时检测抗体结果均为阴性。证明我们确已制备出PRP-Ty衍化物，并能成功地使PRP包被到酶标板上。两批衍化物的各项检定指标十分近似，表明该方法稳定性较好。
将PRP-Ty作为包被抗原用ELISA法检测小鼠血清PRP抗体效价。结果表明PRP免疫组及PRP+TT混合物免疫组的PRP抗体均为阴性，而PRP-TT偶联物组阳性率显著高于各游离PRP免疫组。所得结果与用美国FDA提供试剂的RIA法检测结果一致。进而用ELISA法定量检测52份PRP-TT疫苗现场考核人群的血清标本PRP抗体含量。首先用A492值(吸光度原为光密度OD)与lg〔 CPRP〕绘制曲线，然后用(0.5～15.0)μg/ml的线性范围作标准曲线。每份样品测两次，第一次的抗体几何平均滴度(GMT)为9.268μg/ml，第二次为9.758μg/ml，经t检验证实二者差异无显著性，说明结果重复性较好。
对PRP-Ty的研制成功为我国Hib制品的质控提供了关键试剂，使我国建立ELISA和RIA法检测PRP抗体成为可能。PRP-Ty进一步标化后，可望作为参考试剂用于Hib抗体的检测。
(收稿：1998-11-16 修回：1999-03-08), 百拇医药
单位：100050 北京，中国药品生物制品检定所菌种室
关键词：
中华微生物990432 目前用于检测b型流感嗜血杆菌荚膜多糖(PRP)抗体的放免法(RIA)或酶标法(ELISA)都需要先制备PRP的酪胺化衍生物(用PRP-Ty表示)。为此我们研制了PRP-Ty，并用它建立相应的ELISA方法用于PRP抗体的检测。
在研制PRP-Ty过程中采用了CDAP为活化剂，代替了国际上常用的CNBr。我们用CDAP活化PRP后加入盐酸酪胺进行衍化反应，制备了两批PRP-Ty(PRP-Ty1和PRP-Ty2)。透析后用Sephadex G75柱凝胶过滤，去除未反应的Ty。两批PRP-Ty的Sephadex G75 OD275凝胶过滤图谱完全一致，各洗脱曲线上空流体积Vo处 均有一明显的吸收峰。收集Vo洗脱峰产物，测定其紫外吸收光谱，并与Ty、PRP和参比品PRP-Ty SB进行了比较。Ty在275nm有明显的吸收峰，PRP在240至400 nm无吸收峰。PRP-Ty1、2和参比品PRP-Ty SB在275 nm处均出现吸收峰，且峰形基本一致，证明两批产物是PRP-Ty衍化物。然后将PRP-Ty1、2和PRP-Ty SB分别包被ELISA板，检测同样的PRP阳性及阴性抗血清，三者结果基本一致；而用PRP或Ty单独包被时检测抗体结果均为阴性。证明我们确已制备出PRP-Ty衍化物，并能成功地使PRP包被到酶标板上。两批衍化物的各项检定指标十分近似，表明该方法稳定性较好。
将PRP-Ty作为包被抗原用ELISA法检测小鼠血清PRP抗体效价。结果表明PRP免疫组及PRP+TT混合物免疫组的PRP抗体均为阴性，而PRP-TT偶联物组阳性率显著高于各游离PRP免疫组。所得结果与用美国FDA提供试剂的RIA法检测结果一致。进而用ELISA法定量检测52份PRP-TT疫苗现场考核人群的血清标本PRP抗体含量。首先用A492值(吸光度原为光密度OD)与lg〔 CPRP〕绘制曲线，然后用(0.5～15.0)μg/ml的线性范围作标准曲线。每份样品测两次，第一次的抗体几何平均滴度(GMT)为9.268μg/ml，第二次为9.758μg/ml，经t检验证实二者差异无显著性，说明结果重复性较好。
对PRP-Ty的研制成功为我国Hib制品的质控提供了关键试剂，使我国建立ELISA和RIA法检测PRP抗体成为可能。PRP-Ty进一步标化后，可望作为参考试剂用于Hib抗体的检测。
(收稿：1998-11-16 修回：1999-03-08), 百拇医药