哮喘患者外周血单个核细胞IL-5、IL-3 mRNA表达的研究①
作者：王春霞 王长征 金远林 钱桂生
单位：王春霞 (北京军区第二五一医院呼吸内科，张家口075000)；王长征 金远林 钱桂生 第三军医大学新桥医院呼吸病研究所，重庆630037
关键词：
中国免疫学杂志990919
中国图书分类号 R562.2
嗜酸细胞(EOS)是哮喘慢性炎症中的关键效应细胞。IL-5、IL-3能促进EOS在骨髓的分化、成熟，使机体的EOS产生增多，并促使EOS在支气管肺组织的聚集及活化。哮喘患者外周血、支气管粘膜、支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-5明显升高[1]。IL-3对EOS的作用较IL-5弱，它在哮喘发病机理中的作用仍有争议。本文通过对哮喘患者PBMC IL-5 mRNA、IL-3 mRNA表达水平的研究，探讨其在哮喘发病中的作用。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 研究对象 哮喘组：哮喘患者13例，男8例，女5例，平均年龄31.8±8.5岁，符合1993年支气管哮喘诊断标准，发作期8例，缓解期5例，1月内均未使用过激素。COPD组(慢支组)：慢性支气管炎患者9例，男7例，女2例，平均年龄64.8±4.7岁，均为急性发作期病人。健康对照组：健康献血员9例，男5例，女4例，平均年龄32.8±5.2岁，均无过敏性疾病及寄生虫感染。
1.2 PBMC的分离 无菌取静脉血5 ml，肝素抗凝，Ficoll密度梯度离心法分离PBMC，-70℃保存。
1.3 PBMC总RNA提取及鉴定 采用异硫氰酸胍一步热酚法提取细胞总RNA，甲醛变性琼脂糖凝胶电泳鉴定。
1.4 鼠IL-5 cDNA及人IL-3 cDNA探针制备 将含mIL-5 cDNA的质粒(日本A-Tominaga教授赠)、含人IL-3 cDNA的质粒(黎伯铨博士赠)转化大肠杆菌HB101扩增，碱变性法提取质粒，分别用限制性内切酶BamHI、XHOL(英国Promega)酶切，电洗脱回收目的片段，其长度为1 553 、670 bp。随机引物法32P标记探针。
, 百拇医药
1.5 斑点印迹杂交及检测 斑点杂交及定量分析基本按文献[2]介绍的方法进行。主要步骤：点膜、2 结 果
2.1 人PBMC IL-5 mRNA表达相对含量(pg/106PBMC) 哮喘组(101.69±14.76)显著高于慢支组(45.35±16.13)和对照组(41.44±14.76)， P<0.01，慢支组与对照组相比无显著差异，P>0.05。
2.2 人PBMC IL-3 mRNA表达相对含量(pg/106PBMC) 哮喘组(128.00±58.61)显著高于慢支组(42.89±20.13)和对照组(39.78±12.62)，P<0.01，慢支组与对照组相比无显著差异，P>0.05。
3 讨 论
3.1 哮喘病人PBMC IL-5 mRNA表达及意义 IL-5可由多种炎性细胞产生，激活的T细胞是其重要来源。IL-5是重要的EOS活化因子[3]。IL-5因选择性地作用于EOS，不作用于中性粒细胞，而在EOS增多的疾病中倍受重视。哮喘病人外周血、支气管粘膜及支气管肺泡灌洗液(BALF)中均有IL-5水平升高，可促使EOS生成增多，活化、释放各种炎性介质及颗粒蛋白，损伤气道上皮，引起气道炎症，导致气道高反应性。临床研究表明：哮喘患者IL-5增高与组织EOS增多及气道高反应性密切相关[1]。猴哮喘模型中，激发前静脉给TRFK-5抗体(抗IL-5)，BALF中EOS数目及气道高反应被抑制，由此表明IL-5在哮喘发病中有非常重要的作用。
, http://www.100md.com
许多资料表明哮喘病人PBMC能产生IL-5。本研究中哮喘病人PBMC IL-5 mRNA表达明显高于正常对照组及慢支组，提示IL-5参与了哮喘的慢性炎症过程，也表明哮喘与慢性支气管炎发病机理不同。
3.2 哮喘病人PBMC IL-3 mRNA表达及意义 IL-3同IL-5一样体外对EOS有明显的活化致敏作用，因而也被认为是一种EOS活化因子[3]。另外，IL-3亦可促进肥大细胞的生长、成熟。用rhIL-3处理鼠后，气道内肥大细胞及EOS明显增多，提示IL-3通过作用于肥大细胞及EOS在哮喘发病机理中起一定作用，哮喘支气管粘膜及BALF中IL-3表达增高[1]。Nbutkeuter等研究了儿童特应性哮喘血浆IL-3水平，发现45%(9/20)的患者IL-3升高，而正常人检测不到，以上表明IL-3可能在哮喘发病中起作用。本文哮喘PBMC IL-3 mRNA表达增高，也提示IL-3可能参与了EOS的激活及哮喘的炎症过程。在IL-3与哮喘发病机理的研究中也有与此相反的报道。Laviolete对哮喘患者外周血EOS释放LTC4进行了研究，发现IL-5、GM-CSF增强了所有哮喘患者A23187诱导的LTC4的分泌，而IL-3仅能增强严重哮喘的EOS释放LTC4，因此IL-3在哮喘慢性炎症中的作用仍待进一步探讨。
, 百拇医药
①国家自然科学基金资助(No.39470326)
作者简介：王春霞，女，30岁，呼吸内科硕士；
王长征，男，42岁，副教授，硕士生导师，从事支气管哮喘研究
烤膜、预杂交、杂交、放射自显影。薄层扫描仪扫描，以同源的cDNA为标准品参照，计算IL-5 mRNA、IL-3 mRNA相对含量。
4 参考文献
1 Victoria A,Maurizo M,Enxa V et al.Detection of cytokines and their cell sources in bronchial biopsy specimens from asthmatic patients.Chest， 1994;105:687
, 百拇医药
2 汪泽厚,何 斌,莫华根et al.人IL-2Rα cDNA探针制备及在肾移植中的应用初探.免疫学杂志,1993;9(1):44
3 Rothenberg M E, Peterson J, Stevens R Let al.IL-5 dependent conversion of normal dense human eosinophils to the hypodense phenotype uses 3T3 fibroblasts for enhanced viability,accelerated hypodensity and sustained antibody-dependent cytotoxicity.J Immunol， 1989;143:2311
〔收稿日期：1997-10-12 修稿日期：1998-05-19〕, http://www.100md.com
单位：王春霞 (北京军区第二五一医院呼吸内科，张家口075000)；王长征 金远林 钱桂生 第三军医大学新桥医院呼吸病研究所，重庆630037
关键词：
中国免疫学杂志990919
中国图书分类号 R562.2
嗜酸细胞(EOS)是哮喘慢性炎症中的关键效应细胞。IL-5、IL-3能促进EOS在骨髓的分化、成熟，使机体的EOS产生增多，并促使EOS在支气管肺组织的聚集及活化。哮喘患者外周血、支气管粘膜、支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-5明显升高[1]。IL-3对EOS的作用较IL-5弱，它在哮喘发病机理中的作用仍有争议。本文通过对哮喘患者PBMC IL-5 mRNA、IL-3 mRNA表达水平的研究，探讨其在哮喘发病中的作用。
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1 材料与方法
1.1 研究对象 哮喘组：哮喘患者13例，男8例，女5例，平均年龄31.8±8.5岁，符合1993年支气管哮喘诊断标准，发作期8例，缓解期5例，1月内均未使用过激素。COPD组(慢支组)：慢性支气管炎患者9例，男7例，女2例，平均年龄64.8±4.7岁，均为急性发作期病人。健康对照组：健康献血员9例，男5例，女4例，平均年龄32.8±5.2岁，均无过敏性疾病及寄生虫感染。
1.2 PBMC的分离 无菌取静脉血5 ml，肝素抗凝，Ficoll密度梯度离心法分离PBMC，-70℃保存。
1.3 PBMC总RNA提取及鉴定 采用异硫氰酸胍一步热酚法提取细胞总RNA，甲醛变性琼脂糖凝胶电泳鉴定。
1.4 鼠IL-5 cDNA及人IL-3 cDNA探针制备 将含mIL-5 cDNA的质粒(日本A-Tominaga教授赠)、含人IL-3 cDNA的质粒(黎伯铨博士赠)转化大肠杆菌HB101扩增，碱变性法提取质粒，分别用限制性内切酶BamHI、XHOL(英国Promega)酶切，电洗脱回收目的片段，其长度为1 553 、670 bp。随机引物法32P标记探针。
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1.5 斑点印迹杂交及检测 斑点杂交及定量分析基本按文献[2]介绍的方法进行。主要步骤：点膜、2 结 果
2.1 人PBMC IL-5 mRNA表达相对含量(pg/106PBMC) 哮喘组(101.69±14.76)显著高于慢支组(45.35±16.13)和对照组(41.44±14.76)， P<0.01，慢支组与对照组相比无显著差异，P>0.05。
2.2 人PBMC IL-3 mRNA表达相对含量(pg/106PBMC) 哮喘组(128.00±58.61)显著高于慢支组(42.89±20.13)和对照组(39.78±12.62)，P<0.01，慢支组与对照组相比无显著差异，P>0.05。
3 讨 论
3.1 哮喘病人PBMC IL-5 mRNA表达及意义 IL-5可由多种炎性细胞产生，激活的T细胞是其重要来源。IL-5是重要的EOS活化因子[3]。IL-5因选择性地作用于EOS，不作用于中性粒细胞，而在EOS增多的疾病中倍受重视。哮喘病人外周血、支气管粘膜及支气管肺泡灌洗液(BALF)中均有IL-5水平升高，可促使EOS生成增多，活化、释放各种炎性介质及颗粒蛋白，损伤气道上皮，引起气道炎症，导致气道高反应性。临床研究表明：哮喘患者IL-5增高与组织EOS增多及气道高反应性密切相关[1]。猴哮喘模型中，激发前静脉给TRFK-5抗体(抗IL-5)，BALF中EOS数目及气道高反应被抑制，由此表明IL-5在哮喘发病中有非常重要的作用。
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许多资料表明哮喘病人PBMC能产生IL-5。本研究中哮喘病人PBMC IL-5 mRNA表达明显高于正常对照组及慢支组，提示IL-5参与了哮喘的慢性炎症过程，也表明哮喘与慢性支气管炎发病机理不同。
3.2 哮喘病人PBMC IL-3 mRNA表达及意义 IL-3同IL-5一样体外对EOS有明显的活化致敏作用，因而也被认为是一种EOS活化因子[3]。另外，IL-3亦可促进肥大细胞的生长、成熟。用rhIL-3处理鼠后，气道内肥大细胞及EOS明显增多，提示IL-3通过作用于肥大细胞及EOS在哮喘发病机理中起一定作用，哮喘支气管粘膜及BALF中IL-3表达增高[1]。Nbutkeuter等研究了儿童特应性哮喘血浆IL-3水平，发现45%(9/20)的患者IL-3升高，而正常人检测不到，以上表明IL-3可能在哮喘发病中起作用。本文哮喘PBMC IL-3 mRNA表达增高，也提示IL-3可能参与了EOS的激活及哮喘的炎症过程。在IL-3与哮喘发病机理的研究中也有与此相反的报道。Laviolete对哮喘患者外周血EOS释放LTC4进行了研究，发现IL-5、GM-CSF增强了所有哮喘患者A23187诱导的LTC4的分泌，而IL-3仅能增强严重哮喘的EOS释放LTC4，因此IL-3在哮喘慢性炎症中的作用仍待进一步探讨。
, 百拇医药
①国家自然科学基金资助(No.39470326)
作者简介：王春霞，女，30岁，呼吸内科硕士；
王长征，男，42岁，副教授，硕士生导师，从事支气管哮喘研究
烤膜、预杂交、杂交、放射自显影。薄层扫描仪扫描，以同源的cDNA为标准品参照，计算IL-5 mRNA、IL-3 mRNA相对含量。
4 参考文献
1 Victoria A,Maurizo M,Enxa V et al.Detection of cytokines and their cell sources in bronchial biopsy specimens from asthmatic patients.Chest， 1994;105:687
, 百拇医药
2 汪泽厚,何 斌,莫华根et al.人IL-2Rα cDNA探针制备及在肾移植中的应用初探.免疫学杂志,1993;9(1):44
3 Rothenberg M E, Peterson J, Stevens R Let al.IL-5 dependent conversion of normal dense human eosinophils to the hypodense phenotype uses 3T3 fibroblasts for enhanced viability,accelerated hypodensity and sustained antibody-dependent cytotoxicity.J Immunol， 1989;143:2311
〔收稿日期：1997-10-12 修稿日期：1998-05-19〕, http://www.100md.com