银屑病患者血清TNF-α、HA、LN浓度变化与细胞粘附分子的关系
作者：罗南萍 孙晓明 杨道理 李冠勇
单位：罗南萍(济南军区总医院免疫科， 济南 250031)；孙晓明(济南军区总医院流式细胞室，济南 250031)；杨道理(济南军区总医院免疫科， 济南 250031)；李冠勇(济南军区总医院皮肤科，济南 250031)
关键词：银屑病；细胞因子；细胞间基质成分；细胞粘附分子
中国免疫学杂志000419 摘 要 目的：探讨细胞因子(TNF-α)、细胞间基质成分(HA、LN )与细胞粘附分子(CD44)在银屑病时的关系及致病作用。方法：采用放 射免疫分析法及流式细胞术检测了35例银屑病和30例健康人血清TNF-α、H A、LN含量及外周血单核细胞CD44阳性细胞数。结果：银屑病患者血 清TNF-α、HA及LN浓度均明显高于对照组，差异显著(P<0.01)。CD44 阳性率亦显著增高，与对照组比较差异十分显著(t=17.99；P<0.01 )， 银屑病患者CD44表达上调与HA浓度增高呈正相关，HA与TNF亦呈正相关。结论： CD44作为透明质酸受体与TNF、LN共同参与了银屑病发病的病理过程。
, http://www.100md.com
中国图书分类号 R446.6
Studies on TNF，HA，LN and leukocyte CD44 relativity in the psoriasis vulgaris
LUO Nan-Ping SUN Xiao-Ming YANG Dao-Li
(Department of Immunology,Gener al Hospital of Jinan Military Region,Jinan 250031)
Abstract Objective：To explore the correlation between th e tumor necrosis factor-α(TNF-α),Hydluronic aoid(HA),Laninin(LN) and leukoc y te CD44 each other in the psoriasis. Methods:The measure o f radio-immunity analysis and fluorescence activated cell sorting technique we re used to TNF-α,HA,LN and CD44.Results:TNF-α,HA,L N higher in the psorials than that in the normal(P<0.01),CD44 cell rate increased obvious (P<0.01). The upregulation express ion of CD44 and the increase of HA were significantly correlated. HA was positiv ely correlated to TNF. Conclusion:CD44, the receptor of hy dluronic acid with TNF,LN participatedin pothology to psoriasis.
, 百拇医药
Key words Psoriasis Cellular factor Extracelluar stromati c component Cellular adhesion molecule
角朊细胞过度增生和中性粒细胞局限性浸润是银屑病的重要病理特征。最新 研究显示，T淋巴细胞与细胞因子、细胞间基质成分的内在联系、相互作用是 炎性细胞在皮肤聚集的关键[1]。为此，我们观察了35例银屑病患者血清肿瘤坏 死因 子α(TNF-α)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)的浓度变化和外周血单核细胞粘附分子(CD44)的表达 特征，以探讨银屑病时细胞因子、细胞间基质成分和细胞粘附分子之间的相互作用及致病 机理。
1 材料与方法
1.1 研究对象 银屑病患者35例，男25例，女10例，年龄7～60岁，平均34 .5岁。病程7～20 d。其中寻常型34例，脓疱型1例，泛发型24例，局限型11例，均为进行期 病人。排除系统性疾患。正常对照组30例为健康献血员。男17例，女13例，平均32岁。
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1.2 方法
1.2.1 TNF、HA与LN测定 抽取患者空腹静脉血
3 ml，1 500 r/min离心5 m in后，吸取血清置-20℃冰 箱待测。实验前于室温复溶后使用。TNF试剂盒由解放军总医院东 亚免疫技术研究所提供，HA与LN试剂盒均由上海海军医学研究所技术中心提供。采用放射免 疫(RIA)顺序加样法复管检测。测量仪器为FT-630 G型微机多探头γ计数仪，测量数据经 计算机处理自动拟合曲线，给出浓度。
1.2.2 CD44测量
1.2.2.1 单克隆抗体和对照 异硫氰酸荧光素(FITC) 标记鼠抗人CD44单克隆抗体，由法国国际免疫公司生产。
1.2.2.2 流式细胞仪 FACSCan型，美国Becton Dickinson公司生产。
, 百拇医药
1.2.2.3 PBMC悬液置备 将2 ml EDTA抗凝血重悬于Ficoll-Hypaqut分离 液上，1 500 r/min离心1 5 min，提取单核细胞层，再以PBS 2 ml漂洗1次，离心速度同上，去上清后以70%乙醇固 定，4℃保存备用。
1.2.2.4 免疫荧光染色 反应前以PBS漂洗离心，以除去固定剂。将PBS悬 液分为4管，每管 500 μl，分别加入FITC标记鼠抗人CD44单克隆抗体，FITC标记羊抗鼠IgG1，单克隆抗体20 μl，室 温下反应20 min，以PBS漂洗2次，弃上清液。
1.2.2.5 流式细胞计数 上机后计数2×106个细胞，荧光强度以对数放 大，光散射数据存软盘， 在Macintosh 650 型计算机上用Cell Qutst Plot软件(美国Becton-Dickinson公司产) 分析数据。
1.2.3 统计学处理 检测结果以
±s表示，相关关系 采用直线相关分析，以P<0.05为差异显著。
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2 结果
银屑病患者血清TNF-α、HA、LN浓度均明显增高，与对照组比较差异非常显著(P <0.01)。银屑病组外周血单核细胞CD44阳性率较对照组明显增高(t=5.01；[ WTBX P<0.01)，其中高于正常均数水平者占65%(21/35)，见表1。相关分析显 示，银屑病患者血清TNF-α含量增高与HA呈明显正相关(r=0.625，P<0. 01),与LN亦呈正相关(r=0.45，P<0.05)，CD44阳性率上调与HA增高 呈显正相关(r=0.40，P<0.05)。
表1 银屑病患者血清TNF-α、HA、LN与外周血CD44的测定结果(±s)
Tab.1 Serum TNF-α，HA，LA and CD44
, http://www.100md.com conccrtrations of psoriasis patients(±s) Group
n
TNF-α(ng/L)
HA(ng/L)
LN(ng/L)
CD44(s，%)
Control
30
0.99±0.13
40.55±4.80
, http://www.100md.com
79.11±14.40
4.75±1.02
Psoriasis
35
1.52±0.891)
75.26±17.121)
94.79±17.501)
5.27±1.741)
Note:1)Compared with control,P<0.01
3 讨论
, 百拇医药
TNF-α是机体炎症与免疫反应应答的重要调节因子，本组实验观察到银屑病患者血清TNF- α水平明显增高，提示TNF在银屑病发病机制中起重要作用，它可诱导角朊细胞和血管内 皮细胞表达细胞间粘附分子，从而提供中性粒细胞与淋巴细胞的粘附位点，还可协助炎性细 胞穿透血管壁，活化中性粒细胞与血管内皮细胞引起机体强烈的炎症反应，释放炎性介质， 导致以免疫反应为主的病理过程。
HA与LN均为细胞间基质的主要成分，广泛分布于结缔组织、皮肤、软骨的关节滑液 中，与胶 原结构蛋白，硫酸皮肤素等一起构成蛋白基质的主要成分[2]。本组银屑病患者血 清HA水平显著增高，其中有2例患者HA>1 000 ng/L以上，提示升高的HA与病变皮损处表皮 细胞增生过度及炎症性改变有关，LN是多形核白细胞(PMN)表面CD11/CD18的配体之一[ 3]，银屑病时角朊细胞可表达分泌细胞因子，炎症细胞向表皮游走过程也可刺激角朊细 胞产生LN。
, 百拇医药 近几年分子生物学的进展，证明炎症性损害的发生需要各种细胞因子的相互作用从白细胞游 走到炎症部位，再通过内皮外渗到组织形成血管周围炎性细胞浸润的过程，都与一些细胞因 子-粘附分子有关[4]，CD44是细胞表面的整合膜蛋白，亦是一种多结构 多功能 的表面粘附分子，参与细胞-细胞-基质之间的相互作用，同时，CD44还可作 为透明质酸受体识别透明质酸[5]。本组结果显示银屑病患者外周血单核细胞CD44 表 达异常增高，表明粘附分子在皮肤病的发病中起重要作用，它在银屑病患者体内聚集表明有 选择 性通路促使细胞向皮肤游走，CD44是一种特殊的细胞粘附分子，被激活后有效地与配体透明 质酸结合，参与淋巴细胞浸润，细胞因子异常，血管发生等病理过程。
综上所述，可看出TNF、HA、LN和CD44与银屑病发病密切相关，它们以多种多样活性参与银 屑病炎症反应，并构成功能性细胞因子-细胞粘附分子-细胞间基质成分之间的网络，相互 制约或协作，对机体致炎及免疫功能起重要的作用。
, http://www.100md.com
作者简介：罗南萍，女，49岁，副主任技师，主要从事临床免疫检验学研究
4 参考文献
1，Batker J N W N. The pathophysiology of psoriasis. Lancet,1991；338:22 7
2，马云宝，何启志.透明质酸的临床应用及研究进展.国外医学.放射医学核医学分册，1 995；19(2)：66
3，徐 彤.层粘连蛋白的结构及功能.国外医学.免疫学分册，1996；19(2)：253
4，张 炜.血管内皮和粘附分子在银屑病发病中的作用.国外医学.皮肤性病学分册，199 7；23(1)：11
5，程 琳，程天民.CD44的基因结构和生物学功能.国外医学.分子生物学分册，1998；2 0(5)：201
[收稿1999-03-13], 百拇医药
单位：罗南萍(济南军区总医院免疫科， 济南 250031)；孙晓明(济南军区总医院流式细胞室，济南 250031)；杨道理(济南军区总医院免疫科， 济南 250031)；李冠勇(济南军区总医院皮肤科，济南 250031)
关键词：银屑病；细胞因子；细胞间基质成分；细胞粘附分子
中国免疫学杂志000419 摘 要 目的：探讨细胞因子(TNF-α)、细胞间基质成分(HA、LN )与细胞粘附分子(CD44)在银屑病时的关系及致病作用。方法：采用放 射免疫分析法及流式细胞术检测了35例银屑病和30例健康人血清TNF-α、H A、LN含量及外周血单核细胞CD44阳性细胞数。结果：银屑病患者血 清TNF-α、HA及LN浓度均明显高于对照组，差异显著(P<0.01)。CD44 阳性率亦显著增高，与对照组比较差异十分显著(t=17.99；P<0.01 )， 银屑病患者CD44表达上调与HA浓度增高呈正相关，HA与TNF亦呈正相关。结论： CD44作为透明质酸受体与TNF、LN共同参与了银屑病发病的病理过程。
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中国图书分类号 R446.6
Studies on TNF，HA，LN and leukocyte CD44 relativity in the psoriasis vulgaris
LUO Nan-Ping SUN Xiao-Ming YANG Dao-Li
(Department of Immunology,Gener al Hospital of Jinan Military Region,Jinan 250031)
Abstract Objective：To explore the correlation between th e tumor necrosis factor-α(TNF-α),Hydluronic aoid(HA),Laninin(LN) and leukoc y te CD44 each other in the psoriasis. Methods:The measure o f radio-immunity analysis and fluorescence activated cell sorting technique we re used to TNF-α,HA,LN and CD44.Results:TNF-α,HA,L N higher in the psorials than that in the normal(P<0.01),CD44 cell rate increased obvious (P<0.01). The upregulation express ion of CD44 and the increase of HA were significantly correlated. HA was positiv ely correlated to TNF. Conclusion:CD44, the receptor of hy dluronic acid with TNF,LN participatedin pothology to psoriasis.
, 百拇医药
Key words Psoriasis Cellular factor Extracelluar stromati c component Cellular adhesion molecule
角朊细胞过度增生和中性粒细胞局限性浸润是银屑病的重要病理特征。最新 研究显示，T淋巴细胞与细胞因子、细胞间基质成分的内在联系、相互作用是 炎性细胞在皮肤聚集的关键[1]。为此，我们观察了35例银屑病患者血清肿瘤坏 死因 子α(TNF-α)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)的浓度变化和外周血单核细胞粘附分子(CD44)的表达 特征，以探讨银屑病时细胞因子、细胞间基质成分和细胞粘附分子之间的相互作用及致病 机理。
1 材料与方法
1.1 研究对象 银屑病患者35例，男25例，女10例，年龄7～60岁，平均34 .5岁。病程7～20 d。其中寻常型34例，脓疱型1例，泛发型24例，局限型11例，均为进行期 病人。排除系统性疾患。正常对照组30例为健康献血员。男17例，女13例，平均32岁。
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1.2 方法
1.2.1 TNF、HA与LN测定 抽取患者空腹静脉血
3 ml，1 500 r/min离心5 m in后，吸取血清置-20℃冰 箱待测。实验前于室温复溶后使用。TNF试剂盒由解放军总医院东 亚免疫技术研究所提供，HA与LN试剂盒均由上海海军医学研究所技术中心提供。采用放射免 疫(RIA)顺序加样法复管检测。测量仪器为FT-630 G型微机多探头γ计数仪，测量数据经 计算机处理自动拟合曲线，给出浓度。
1.2.2 CD44测量
1.2.2.1 单克隆抗体和对照 异硫氰酸荧光素(FITC) 标记鼠抗人CD44单克隆抗体，由法国国际免疫公司生产。
1.2.2.2 流式细胞仪 FACSCan型，美国Becton Dickinson公司生产。
, 百拇医药
1.2.2.3 PBMC悬液置备 将2 ml EDTA抗凝血重悬于Ficoll-Hypaqut分离 液上，1 500 r/min离心1 5 min，提取单核细胞层，再以PBS 2 ml漂洗1次，离心速度同上，去上清后以70%乙醇固 定，4℃保存备用。
1.2.2.4 免疫荧光染色 反应前以PBS漂洗离心，以除去固定剂。将PBS悬 液分为4管，每管 500 μl，分别加入FITC标记鼠抗人CD44单克隆抗体，FITC标记羊抗鼠IgG1，单克隆抗体20 μl，室 温下反应20 min，以PBS漂洗2次，弃上清液。
1.2.2.5 流式细胞计数 上机后计数2×106个细胞，荧光强度以对数放 大，光散射数据存软盘， 在Macintosh 650 型计算机上用Cell Qutst Plot软件(美国Becton-Dickinson公司产) 分析数据。
1.2.3 统计学处理 检测结果以
±s表示，相关关系 采用直线相关分析，以P<0.05为差异显著。, http://www.100md.com
2 结果
银屑病患者血清TNF-α、HA、LN浓度均明显增高，与对照组比较差异非常显著(P <0.01)。银屑病组外周血单核细胞CD44阳性率较对照组明显增高(t=5.01；[ WTBX P<0.01)，其中高于正常均数水平者占65%(21/35)，见表1。相关分析显 示，银屑病患者血清TNF-α含量增高与HA呈明显正相关(r=0.625，P<0. 01),与LN亦呈正相关(r=0.45，P<0.05)，CD44阳性率上调与HA增高 呈显正相关(r=0.40，P<0.05)。
表1 银屑病患者血清TNF-α、HA、LN与外周血CD44的测定结果(
±s)Tab.1 Serum TNF-α，HA，LA and CD44
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±s) Groupn
TNF-α(ng/L)
HA(ng/L)
LN(ng/L)
CD44(s，%)
Control
30
0.99±0.13
40.55±4.80
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79.11±14.40
4.75±1.02
Psoriasis
35
1.52±0.891)
75.26±17.121)
94.79±17.501)
5.27±1.741)
Note:1)Compared with control,P<0.01
3 讨论
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TNF-α是机体炎症与免疫反应应答的重要调节因子，本组实验观察到银屑病患者血清TNF- α水平明显增高，提示TNF在银屑病发病机制中起重要作用，它可诱导角朊细胞和血管内 皮细胞表达细胞间粘附分子，从而提供中性粒细胞与淋巴细胞的粘附位点，还可协助炎性细 胞穿透血管壁，活化中性粒细胞与血管内皮细胞引起机体强烈的炎症反应，释放炎性介质， 导致以免疫反应为主的病理过程。
HA与LN均为细胞间基质的主要成分，广泛分布于结缔组织、皮肤、软骨的关节滑液 中，与胶 原结构蛋白，硫酸皮肤素等一起构成蛋白基质的主要成分[2]。本组银屑病患者血 清HA水平显著增高，其中有2例患者HA>1 000 ng/L以上，提示升高的HA与病变皮损处表皮 细胞增生过度及炎症性改变有关，LN是多形核白细胞(PMN)表面CD11/CD18的配体之一[ 3]，银屑病时角朊细胞可表达分泌细胞因子，炎症细胞向表皮游走过程也可刺激角朊细 胞产生LN。
, 百拇医药 近几年分子生物学的进展，证明炎症性损害的发生需要各种细胞因子的相互作用从白细胞游 走到炎症部位，再通过内皮外渗到组织形成血管周围炎性细胞浸润的过程，都与一些细胞因 子-粘附分子有关[4]，CD44是细胞表面的整合膜蛋白，亦是一种多结构 多功能 的表面粘附分子，参与细胞-细胞-基质之间的相互作用，同时，CD44还可作 为透明质酸受体识别透明质酸[5]。本组结果显示银屑病患者外周血单核细胞CD44 表 达异常增高，表明粘附分子在皮肤病的发病中起重要作用，它在银屑病患者体内聚集表明有 选择 性通路促使细胞向皮肤游走，CD44是一种特殊的细胞粘附分子，被激活后有效地与配体透明 质酸结合，参与淋巴细胞浸润，细胞因子异常，血管发生等病理过程。
综上所述，可看出TNF、HA、LN和CD44与银屑病发病密切相关，它们以多种多样活性参与银 屑病炎症反应，并构成功能性细胞因子-细胞粘附分子-细胞间基质成分之间的网络，相互 制约或协作，对机体致炎及免疫功能起重要的作用。
, http://www.100md.com
作者简介：罗南萍，女，49岁，副主任技师，主要从事临床免疫检验学研究
4 参考文献
1，Batker J N W N. The pathophysiology of psoriasis. Lancet,1991；338:22 7
2，马云宝，何启志.透明质酸的临床应用及研究进展.国外医学.放射医学核医学分册，1 995；19(2)：66
3，徐 彤.层粘连蛋白的结构及功能.国外医学.免疫学分册，1996；19(2)：253
4，张 炜.血管内皮和粘附分子在银屑病发病中的作用.国外医学.皮肤性病学分册，199 7；23(1)：11
5，程 琳，程天民.CD44的基因结构和生物学功能.国外医学.分子生物学分册，1998；2 0(5)：201
[收稿1999-03-13], 百拇医药