IL-12对狼疮肾炎PBMC中信号传递分子STAT3、STAT4的作用
作者：李清刚 李幼姬 李志坚 叶任高 许韩师
单位：李清刚(中山医科大学附属第一医 院肾脏病研究所，广州 510080)；李幼姬(中山医科大学附属第一医 院肾脏病研究所，广州 510080)；李志坚(中山医科大学附属第一医 院肾脏病研究所，广州 510080)
关键词：信号传递；狼疮肾炎；白细胞介素-12；外周血单个核细胞
中国免疫学杂志000417 摘 要 目的：为了探讨IL-12对狼疮肾炎PBMC发挥生物学作用的细 胞 内信号传递机制。方法：采用MTT、免疫沉淀、免疫印迹等方法，检测I L-12对PBMC增殖及STAT3、STAT4的作用 ，并比较在狼疮肾炎活动期、静止期的差别。结果：发现与正常人对照 及静止期相比，IL-12对活动期PBMC不需要IL-2的预诱导，可促进PBMC增殖并在短时间内 激活 STAT3、STAT4，而IL-2对STAT4无作用。结论：表明IL-12对PB M C的作用可通过STAT3、STAT4途径发挥，活动期PBMC存在异常活化，这可能是IL-12促 进狼疮肾炎PBMC参与发病的细胞内机制之一。
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中国图书分类号 R392.12
Effects of IL-12 on signal transduction molecules STAT3 and STAT4 in PBMC i n lupus nephritis
LI Qing-Gang LI You-Ji LI Zhi-Jian
(Department of Nephrology and Ins titute of Nephrology, The First Affiliated Hospital, San Yat-Sen University of Medica l Sciences, Guangzhou 510080)
Abstract Objective：To investigate the mechanism of signa l transduction of IL-12 on periph eral blood mononuclear cell (PBMC) in lupus nephritis (LN).Methods：The authors measured proliferation of PBMC by MTT. STAT3 and STAT4 were detected by immunoprecipa tion and Western Blot Technique. Results:In contrast to norma l group and the static stage of LN, IL-12 alone stimulated DNA synthesis and activated STAT3 and ST AT4 in absence of IL-2 in short time in PBMC in the active stage of LN, wherease I L-2 had no effect on STAT4 but STAT3.Conclusion：The e ffe ct of IL-12 in PBMC may be mediated through the activation of STAT3 and STAT4, PBMC may have been abbe rant ly activated in the active stage of LN, which may be a mechanism of IL-12 to ta ke part in the pathogenesis of LN.
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Key words Signal transduction Lupus nephritis Interl eukin-12 PBMC
狼疮肾炎外周血单个核淋巴细胞(PBMC)的异常增生、分化，产生多种活性物质、分泌过多自 身抗体是其致病的重要环节。最近国外报道，IL-12可对正常人B、T淋巴细胞在IL-2、SA 等诱导作用下发挥重要作用[1，2]。然而，对狼疮肾炎PBMC异常生物学行为的细胞 内信号传递 机制至今未见报道。信号的转录子和活化子(signal transducers and activators of tran scription, STAT)中STAT3、STAT4是IL-12的信号传递途径[3]，故在 本研究中，我们对IL-2 诱导或未诱导的正常人、LN活动期、静止期是否发生异常活化进行测定，试图对IL-12在狼 疮肾炎PBMC中作用的细胞内信号传递机制进行探讨，以期深化对LN发病过程中IL-12作用机 制的认识。
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1 材料与方法
1.1 试剂 IL-12购自Pepro Tech公司，IL-2、PHA购自北京中山生物 技术公司。STAT3、STAT4及其他蛋白测定试剂均购自Santa Cruz公司。MTT、蛋白酶抑制剂均购自Sigma公司，电泳分子量标准 品购自New England公司，化学发光试剂购自北京医科大学引航医学生物技术研究所。
1.2 方法
1.2.1 PBMC分离培养 选取LN活动期、静止期患者各10例、正常人对照5 例 ，按常规方法抽取10 ml静脉血，肝素抗凝分离PBMC作培养，0.2%台盼蓝计数存活>95%。
1.2.2 细胞因子对PBMC的刺激 在STAT3、STAT4测定实验中，对LN 活动期、静止期、正常对照组PBMC分别给予0，100 U/ml IL-2预诱导24 h。然后分组 给 予10 ng/ml IL-12于37℃刺激30 min。另一组给未用IL-2预诱导的LN活动期PBMC以2，5 ，10 ng /ml IL-2刺激5，15，30，60，120 min。
, 百拇医药
1.2.3 STAT3、STAT4的测定 将培养的细胞，用含蛋白酶抑制剂的 RIPA细胞裂解液(1×PBS，10%NP40，0.5%脱氧胆酸钠，1 μg/ml PMSF，30 μl/ml抑 肽酶，0.1 mmol/L钒酸钠)裂解2 h，离心，将上清液测定蛋白含量。然后用抗STAT3、抗S TAT4(抗C-末端)免疫沉淀，过夜，最后离心提取蛋白沉淀经100℃ 2 min变性，贮存于-2 0℃冰箱备用。经SDS-PAGE电泳、转膜，用化学发光方法检测磷酸化信号 传递蛋白，可在92,94 kD处各出现一条带。然后将膜置于洗膜中60℃，洗膜30 min，再 利用抗STAT3、STAT4(N-末端)对膜进行孵育。每组实验重复3次。
1.2.4 PBMC增殖测定 采用MTT法检测PBMC增殖，按上述分LN活动期、 静止期及正常对照分组分别加入IL-2(100 U/ml)，IL-12(10 ng/ml)，IL-2(100 U/ml)+I L-12(10 ng/ml)刺激4 d，同时设阴性空白对照，加入MTT培养4 h后，用20%SDS，50%二甲 基酰胺 ，pH5.0溶解液终止反应，在2400酶标仪测570～630 nm吸光光度值，以空白对照为标准， 评价各组的PBMC增殖。
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1.2.5 统计学方法 结果以
±s表示，各组比 较用t检验，以P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 PBMC增殖 正常人对照，狼疮肾炎PBMC对IL-2都有反应，而IL- 12 只对LN活动期增殖反应显著，IL-2+IL-12对三者皆有明显促增殖作用，尤以活动期显著( 图1)。
图1 IL-12、IL-2、IL-12+IL-2对LN、正常对照PBMC增殖
Fig.1 IL-12,IL-2 and IL-12+IL-2 stimulated PBMC
, http://www.100md.com proliferation in LN and normal group
2.2 PBMC的STAT3，STAT4酪氨酸磷酸化 于0～120 min单独用IL - 12(5～10 ng/ml)刺激活动期PBMC的结果见图2。单独用IL-12可使LN活动期STAT3、STAT4 在30 min时合成最强，并且以10 ng/ml浓度刺激的带型最强，120 min后带型消失，从图3 看出单独IL-12对静止期相对作用较弱，正常人无作用。联合应用IL-2+IL-12，正常对 照、LN活动期、静止期在30 min仍最强。
图2 不同浓度的IL-12刺激LN活动期PBMC中STAT4 、STAT3的酪氨酸磷酸化
, 百拇医药
Fig.2 Different concentration of IL-12 induces tyrosine
phosphorylatio n of STAT4 and STAT3 in PBMC in the active stage of LN
图3 IL-2、IL-12、IL-2+IL-12对LN、正常对照PBMC刺激30min
诱导STAT4和STAT3酪氨酸磷酸化
Fig.3 IL-2, IL-12 and IL-2+IL-12 induce tyrosine phosphorylation
, 百拇医药
of S TAT4 and STAT3 in PBMC in LN and normal control for 30 min
3 讨论
IL-12主要是由T、B淋巴细胞和单核-巨噬细胞产生的，具有多种炎症作用，包括促进IFN -γ的产生，抑制IL-10、IL-11等的合成[4，5]，其对Th前体细胞向Th1分化不 可缺少 ，通过调节Th1/Th2平衡，发挥免疫调节作用[6]，此外，有报道IL-12 对SA、IL-2诱导的正常T、B淋巴细胞有促增殖、分化作用[1，2]。然而，尽管IL -12在体外对正常T、B等淋巴细胞的免疫炎症过程的重要作用已有些研究，但在狼疮患者IL -12作用的内在机制尚未有报道。
我们在实验中发现，单独IL-12对正常人PBMC无增殖作用，而与IL-2可共同刺激增殖，这 提示其生物学作用需IL-2诱导才能发挥。Gately等认为：在低浓度IL-2诱 导下，介导促进IL-2受体表达，导致IL-12诱导PBMC等亚群的增殖，另外，IL-12还可通 过诱导细胞因子如INF-γ、IL-2等的释放，促进静止PBMC对IL-2反应[6]。而L N患者PBMC，尤其是活动期，可能由 于PBMC已经在体内被多种炎症因子预刺激促进了IL-12R受体表达，或其本身存在异常，故 可直接对IL-12发生增殖反应。
, 百拇医药
许多的研究证实，在正常细胞，IL-12发挥生物学作用可通过STAT3，STAT4途径实现 ，并且STAT4只有IL-12才能激活[3]。IL-12与受体结合，后者二聚体化， 促使JAK激酶活化酪氨酸激 酶，导致受体发生酪氨酸磷酸化；再通过JAK活化STAT3、STAT4，使后者与受体解离， 转位到核内，结合于特异基因的启动子序列上[7，8]，促进基因表达，发挥生 物学作用。
在本研究中，单独应用IL-12只对LN活动期STAT3、STAT4磷酸化最显著，并在30min时，带型最强，静止期很弱，这表明，LN活动期PBMC上的IL-12受体可能已被多种炎症因子刺激表达，或处于异常状态，IL-12可直接促使STAT3、STAT4活化静止期PBMC处于稳 定 状态，对IL-12反应弱。而正常对照需在IL-2协同刺激下，才能活化STAT3、 STAT4 ，提 示IL-2可能诱导了IL-12R的表达后，IL-12才能激活信号传递分子STAT3, STAT4。 单独I L-2刺激有STAT3带，而无STAT4带，单独IL-12刺激STAT3，带型较弱，协同刺激ST AT3带型明显增强，这一方面说 明IL-2亦能促进STAT3活化，另一方面说明IL-12除STAT3外主要是通过STAT4发挥 作用，这与Cheng-Rong Yu[9]等的报道相一致。
, 百拇医药
我们发现STAT3，STAT4在活动期PBMC受IL-12刺激5 min时，即可出现磷酸化，30 min 时 最强，在120 min后消失，这说明STAT3、STAT4的磷酸化是一个短暂过程，但磷酸化的STAT转位到某些基因启动子序列上就促其特异基因转录，国外最近有报道，STAT4的一结合 位点(T/A)TTCC(C/G)GGAA(T/A)，与INF-γ的GAS位点极相似，IL-12能直接促进PBMC产生I FN-γ，就是通过STAT4结合到IFN-γ的位点上发挥的[10]。
最近，亦有报道，JAK-STAT途径与ras-MAPK(细胞分裂原活化蛋白酶)有联系。Stancat o等证明MAPK能使STAT3的Ser727磷酸化而激活，JAK还能激活其它的分子(Grb 2、Raf-1、PI-(3)K的P85亚基)[11]；Livio Azzoni等学者发现IL-12 可促进C-myc的基因表达，而C-myc是MAPK作用的下游分子[12]，可见，IL-12除通过JAK-STAT发 挥作用外，尚有可能通过其他的途径。因此，对其信号传递途径的研究有待进一步深入，IL -12可通过异常的信号传递途径参与LN的发生。
, http://www.100md.com
本课题为卫生部科研基金资助项目(编号15)
作者简介：李清刚，男，29岁，博士，主要研究狼疮肾炎的发病机制；
李幼姬，女，64岁，博士导师，教授，主要从事狼疮肾炎的发病机制及细胞因子研究
叶任高(中山医科大学附属第一医 院肾脏病研究所，广州 510080)
许韩师(中山医科大学附属第一医 院肾脏病研究所，广州 510080)
4 参考文献
1，Daiane F, Julie K. Role of IL-12 in human B lymphocyte proliferati on and differentiation. J Immunol, 1995；154:1606
, 百拇医药
2，Hsich C S, Macatonia C S, Tripp S F et al. Development of TH1 CD4+ T cells through IL-12 produced by Listeica-induced macrophages. Scienc e, 1993；260:547
3，Jacobson N G, Szabo S J, Weber Wordt R M et al. Interlukin 12 signaling i n T hel per type1 (Th1) cells involves tyrosine phosphorylation of signal transducer and activator of transcription STAT3 and STAT4. J Exp Med,1995；181:1755
4，Aste Aniezaga M, Max, Sartorl A et al. Molecular mechanisms of the induct ion of IL-12 and its inhibition by IL-10. J Immunol, 1998；160(12):5936
, 百拇医药
5，Marshallo J D, Rebertson S E, Trinchieri G et al. Priming with IL-4 and IL-13 d uring HIV-1 infection restores in vitro IL-12 production by mononulear cells of HIV-infected patients. J Immunol, 1997；159(11):5705
6，Nakajima A, Hirose S, Yagita H et al. Roles of IL-4 and IL-12 in the d evelopment of lupus in NZB/W F mice. J Immunol, 1997；158(3):1466
7，James E, Darnell Jr. STATs and gene regulation. Science, 1997；277:1630
, 百拇医药
8，Xiang Xu, Ya Lin Sun, Timothy Hoey. Cooperatine DNA binding and sequence set ec tine recognition conferind by the STAT amino-termal domain. Science, 1996； 273:794
9，Yu C R,Lin J X, Donald W et al. Differential utilization o f Janus Kinase-signal transducer and activator of transcription signaling pathways in t he stimulation of human natural killer cells by IL-2, IL-12, and IFN-γ. J I mmunol, 1996；157:126
10，Koh Yamamoto, Osamw Miura, Shinsaka Hirosawa et al. Binding sequ ence of STAT 4: STAT4 complex recognizes the IFN-γ activation site (GAS)-like sequence (T/A) TTCC(C/G) GGAA(T/A). Biochem Hioph Res Com，1997;233:126
, 百拇医药
11，Stancato I F, Yu C R, Petvico in E F et al. Activation of Rat-1 by int eferon gamma and oncostatin M requires expression of the STAT transcription factor. J Bio l Chem， 1998； 273(30):18701
12，Livio Azzoni, Palanisamy Kanakaraj, Olga Zatsepina et al. IL-12 induce d acti vation of NK and T cells occurs in the absence of immediate early activation gen e expression. J Immunol, 1996;157:3235
[收稿1999-01-20，二次修回1999-10-26], 百拇医药
单位：李清刚(中山医科大学附属第一医 院肾脏病研究所，广州 510080)；李幼姬(中山医科大学附属第一医 院肾脏病研究所，广州 510080)；李志坚(中山医科大学附属第一医 院肾脏病研究所，广州 510080)
关键词：信号传递；狼疮肾炎；白细胞介素-12；外周血单个核细胞
中国免疫学杂志000417 摘 要 目的：为了探讨IL-12对狼疮肾炎PBMC发挥生物学作用的细 胞 内信号传递机制。方法：采用MTT、免疫沉淀、免疫印迹等方法，检测I L-12对PBMC增殖及STAT3、STAT4的作用 ，并比较在狼疮肾炎活动期、静止期的差别。结果：发现与正常人对照 及静止期相比，IL-12对活动期PBMC不需要IL-2的预诱导，可促进PBMC增殖并在短时间内 激活 STAT3、STAT4，而IL-2对STAT4无作用。结论：表明IL-12对PB M C的作用可通过STAT3、STAT4途径发挥，活动期PBMC存在异常活化，这可能是IL-12促 进狼疮肾炎PBMC参与发病的细胞内机制之一。
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中国图书分类号 R392.12
Effects of IL-12 on signal transduction molecules STAT3 and STAT4 in PBMC i n lupus nephritis
LI Qing-Gang LI You-Ji LI Zhi-Jian
(Department of Nephrology and Ins titute of Nephrology, The First Affiliated Hospital, San Yat-Sen University of Medica l Sciences, Guangzhou 510080)
Abstract Objective：To investigate the mechanism of signa l transduction of IL-12 on periph eral blood mononuclear cell (PBMC) in lupus nephritis (LN).Methods：The authors measured proliferation of PBMC by MTT. STAT3 and STAT4 were detected by immunoprecipa tion and Western Blot Technique. Results:In contrast to norma l group and the static stage of LN, IL-12 alone stimulated DNA synthesis and activated STAT3 and ST AT4 in absence of IL-2 in short time in PBMC in the active stage of LN, wherease I L-2 had no effect on STAT4 but STAT3.Conclusion：The e ffe ct of IL-12 in PBMC may be mediated through the activation of STAT3 and STAT4, PBMC may have been abbe rant ly activated in the active stage of LN, which may be a mechanism of IL-12 to ta ke part in the pathogenesis of LN.
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Key words Signal transduction Lupus nephritis Interl eukin-12 PBMC
狼疮肾炎外周血单个核淋巴细胞(PBMC)的异常增生、分化，产生多种活性物质、分泌过多自 身抗体是其致病的重要环节。最近国外报道，IL-12可对正常人B、T淋巴细胞在IL-2、SA 等诱导作用下发挥重要作用[1，2]。然而，对狼疮肾炎PBMC异常生物学行为的细胞 内信号传递 机制至今未见报道。信号的转录子和活化子(signal transducers and activators of tran scription, STAT)中STAT3、STAT4是IL-12的信号传递途径[3]，故在 本研究中，我们对IL-2 诱导或未诱导的正常人、LN活动期、静止期是否发生异常活化进行测定，试图对IL-12在狼 疮肾炎PBMC中作用的细胞内信号传递机制进行探讨，以期深化对LN发病过程中IL-12作用机 制的认识。
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1 材料与方法
1.1 试剂 IL-12购自Pepro Tech公司，IL-2、PHA购自北京中山生物 技术公司。STAT3、STAT4及其他蛋白测定试剂均购自Santa Cruz公司。MTT、蛋白酶抑制剂均购自Sigma公司，电泳分子量标准 品购自New England公司，化学发光试剂购自北京医科大学引航医学生物技术研究所。
1.2 方法
1.2.1 PBMC分离培养 选取LN活动期、静止期患者各10例、正常人对照5 例 ，按常规方法抽取10 ml静脉血，肝素抗凝分离PBMC作培养，0.2%台盼蓝计数存活>95%。
1.2.2 细胞因子对PBMC的刺激 在STAT3、STAT4测定实验中，对LN 活动期、静止期、正常对照组PBMC分别给予0，100 U/ml IL-2预诱导24 h。然后分组 给 予10 ng/ml IL-12于37℃刺激30 min。另一组给未用IL-2预诱导的LN活动期PBMC以2，5 ，10 ng /ml IL-2刺激5，15，30，60，120 min。
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1.2.3 STAT3、STAT4的测定 将培养的细胞，用含蛋白酶抑制剂的 RIPA细胞裂解液(1×PBS，10%NP40，0.5%脱氧胆酸钠，1 μg/ml PMSF，30 μl/ml抑 肽酶，0.1 mmol/L钒酸钠)裂解2 h，离心，将上清液测定蛋白含量。然后用抗STAT3、抗S TAT4(抗C-末端)免疫沉淀，过夜，最后离心提取蛋白沉淀经100℃ 2 min变性，贮存于-2 0℃冰箱备用。经SDS-PAGE电泳、转膜，用化学发光方法检测磷酸化信号 传递蛋白，可在92,94 kD处各出现一条带。然后将膜置于洗膜中60℃，洗膜30 min，再 利用抗STAT3、STAT4(N-末端)对膜进行孵育。每组实验重复3次。
1.2.4 PBMC增殖测定 采用MTT法检测PBMC增殖，按上述分LN活动期、 静止期及正常对照分组分别加入IL-2(100 U/ml)，IL-12(10 ng/ml)，IL-2(100 U/ml)+I L-12(10 ng/ml)刺激4 d，同时设阴性空白对照，加入MTT培养4 h后，用20%SDS，50%二甲 基酰胺 ，pH5.0溶解液终止反应，在2400酶标仪测570～630 nm吸光光度值，以空白对照为标准， 评价各组的PBMC增殖。
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1.2.5 统计学方法 结果以
±s表示，各组比 较用t检验，以P<0.05为差异有显著性。2 结果
2.1 PBMC增殖 正常人对照，狼疮肾炎PBMC对IL-2都有反应，而IL- 12 只对LN活动期增殖反应显著，IL-2+IL-12对三者皆有明显促增殖作用，尤以活动期显著( 图1)。
图1 IL-12、IL-2、IL-12+IL-2对LN、正常对照PBMC增殖
Fig.1 IL-12,IL-2 and IL-12+IL-2 stimulated PBMC
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2.2 PBMC的STAT3，STAT4酪氨酸磷酸化 于0～120 min单独用IL - 12(5～10 ng/ml)刺激活动期PBMC的结果见图2。单独用IL-12可使LN活动期STAT3、STAT4 在30 min时合成最强，并且以10 ng/ml浓度刺激的带型最强，120 min后带型消失，从图3 看出单独IL-12对静止期相对作用较弱，正常人无作用。联合应用IL-2+IL-12，正常对 照、LN活动期、静止期在30 min仍最强。
图2 不同浓度的IL-12刺激LN活动期PBMC中STAT4 、STAT3的酪氨酸磷酸化
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Fig.2 Different concentration of IL-12 induces tyrosine
phosphorylatio n of STAT4 and STAT3 in PBMC in the active stage of LN
图3 IL-2、IL-12、IL-2+IL-12对LN、正常对照PBMC刺激30min
诱导STAT4和STAT3酪氨酸磷酸化
Fig.3 IL-2, IL-12 and IL-2+IL-12 induce tyrosine phosphorylation
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of S TAT4 and STAT3 in PBMC in LN and normal control for 30 min
3 讨论
IL-12主要是由T、B淋巴细胞和单核-巨噬细胞产生的，具有多种炎症作用，包括促进IFN -γ的产生，抑制IL-10、IL-11等的合成[4，5]，其对Th前体细胞向Th1分化不 可缺少 ，通过调节Th1/Th2平衡，发挥免疫调节作用[6]，此外，有报道IL-12 对SA、IL-2诱导的正常T、B淋巴细胞有促增殖、分化作用[1，2]。然而，尽管IL -12在体外对正常T、B等淋巴细胞的免疫炎症过程的重要作用已有些研究，但在狼疮患者IL -12作用的内在机制尚未有报道。
我们在实验中发现，单独IL-12对正常人PBMC无增殖作用，而与IL-2可共同刺激增殖，这 提示其生物学作用需IL-2诱导才能发挥。Gately等认为：在低浓度IL-2诱 导下，介导促进IL-2受体表达，导致IL-12诱导PBMC等亚群的增殖，另外，IL-12还可通 过诱导细胞因子如INF-γ、IL-2等的释放，促进静止PBMC对IL-2反应[6]。而L N患者PBMC，尤其是活动期，可能由 于PBMC已经在体内被多种炎症因子预刺激促进了IL-12R受体表达，或其本身存在异常，故 可直接对IL-12发生增殖反应。
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许多的研究证实，在正常细胞，IL-12发挥生物学作用可通过STAT3，STAT4途径实现 ，并且STAT4只有IL-12才能激活[3]。IL-12与受体结合，后者二聚体化， 促使JAK激酶活化酪氨酸激 酶，导致受体发生酪氨酸磷酸化；再通过JAK活化STAT3、STAT4，使后者与受体解离， 转位到核内，结合于特异基因的启动子序列上[7，8]，促进基因表达，发挥生 物学作用。
在本研究中，单独应用IL-12只对LN活动期STAT3、STAT4磷酸化最显著，并在30min时，带型最强，静止期很弱，这表明，LN活动期PBMC上的IL-12受体可能已被多种炎症因子刺激表达，或处于异常状态，IL-12可直接促使STAT3、STAT4活化静止期PBMC处于稳 定 状态，对IL-12反应弱。而正常对照需在IL-2协同刺激下，才能活化STAT3、 STAT4 ，提 示IL-2可能诱导了IL-12R的表达后，IL-12才能激活信号传递分子STAT3, STAT4。 单独I L-2刺激有STAT3带，而无STAT4带，单独IL-12刺激STAT3，带型较弱，协同刺激ST AT3带型明显增强，这一方面说 明IL-2亦能促进STAT3活化，另一方面说明IL-12除STAT3外主要是通过STAT4发挥 作用，这与Cheng-Rong Yu[9]等的报道相一致。
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我们发现STAT3，STAT4在活动期PBMC受IL-12刺激5 min时，即可出现磷酸化，30 min 时 最强，在120 min后消失，这说明STAT3、STAT4的磷酸化是一个短暂过程，但磷酸化的STAT转位到某些基因启动子序列上就促其特异基因转录，国外最近有报道，STAT4的一结合 位点(T/A)TTCC(C/G)GGAA(T/A)，与INF-γ的GAS位点极相似，IL-12能直接促进PBMC产生I FN-γ，就是通过STAT4结合到IFN-γ的位点上发挥的[10]。
最近，亦有报道，JAK-STAT途径与ras-MAPK(细胞分裂原活化蛋白酶)有联系。Stancat o等证明MAPK能使STAT3的Ser727磷酸化而激活，JAK还能激活其它的分子(Grb 2、Raf-1、PI-(3)K的P85亚基)[11]；Livio Azzoni等学者发现IL-12 可促进C-myc的基因表达，而C-myc是MAPK作用的下游分子[12]，可见，IL-12除通过JAK-STAT发 挥作用外，尚有可能通过其他的途径。因此，对其信号传递途径的研究有待进一步深入，IL -12可通过异常的信号传递途径参与LN的发生。
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本课题为卫生部科研基金资助项目(编号15)
作者简介：李清刚，男，29岁，博士，主要研究狼疮肾炎的发病机制；
李幼姬，女，64岁，博士导师，教授，主要从事狼疮肾炎的发病机制及细胞因子研究
叶任高(中山医科大学附属第一医 院肾脏病研究所，广州 510080)
许韩师(中山医科大学附属第一医 院肾脏病研究所，广州 510080)
4 参考文献
1，Daiane F, Julie K. Role of IL-12 in human B lymphocyte proliferati on and differentiation. J Immunol, 1995；154:1606
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2，Hsich C S, Macatonia C S, Tripp S F et al. Development of TH1 CD4+ T cells through IL-12 produced by Listeica-induced macrophages. Scienc e, 1993；260:547
3，Jacobson N G, Szabo S J, Weber Wordt R M et al. Interlukin 12 signaling i n T hel per type1 (Th1) cells involves tyrosine phosphorylation of signal transducer and activator of transcription STAT3 and STAT4. J Exp Med,1995；181:1755
4，Aste Aniezaga M, Max, Sartorl A et al. Molecular mechanisms of the induct ion of IL-12 and its inhibition by IL-10. J Immunol, 1998；160(12):5936
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5，Marshallo J D, Rebertson S E, Trinchieri G et al. Priming with IL-4 and IL-13 d uring HIV-1 infection restores in vitro IL-12 production by mononulear cells of HIV-infected patients. J Immunol, 1997；159(11):5705
6，Nakajima A, Hirose S, Yagita H et al. Roles of IL-4 and IL-12 in the d evelopment of lupus in NZB/W F mice. J Immunol, 1997；158(3):1466
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[收稿1999-01-20，二次修回1999-10-26], 百拇医药