人类疱疹病毒6、7型体外感染淋巴细胞对CD抗原表达的影响
作者：姚堃彭光勇 任强 季晓辉 周峰
单位：姚堃(南京医科大学微生物与 免疫学教研室，南京 210029)；彭光勇(南京医科大学微生物与 免疫学教研室，南京 210029)；任强(南京医科大学微生物与 免疫学教研室，南京 210029)；季晓辉(南京医科大学微生物与 免疫学教研室，南京 210029)；周峰(南京医科大学微生物与 免疫学教研室，南京 210029)
关键词：
中国免疫学杂志000508 中国图书分类号 R373 R392.11
人类疱疹病毒6 、7型(HHV-6、HHV-7)是近年发现的人类疱疹病毒家族 的 新成员，它们对淋巴细胞具有高度的亲嗜性，同属于人类β-疱疹病毒。HHV-6根据体 外生长特点，对单抗的反应性及限制性酶切图谱等方面特征又分为2种类型：A型和B型[1]。本文 研究了HHV-6A型株GS及我室分离的HHV-6 B型株 CN5、HHV-7YY5 3株病毒感染淋巴细胞 对CD抗原表达的影响[2，3]，并对其免疫机理作了初步探讨。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 病毒株 HHV-6 GS标准株:香港大学微生物系Prof.M.H.Ng惠赠, 在 HSB2细胞株上传代培养。HHV-6 CN5株：我室从ES患儿外周血单个核细胞中分离的中国南京 株，在人脐血单个核细胞上传代培养。HHV-7 YY5株:我室从一肾病患儿唾液中分离的HHV- 7中国南京株,在SUPT1细胞上传代培养。
1.2 细胞 SUPT1、HSB2细胞系:来自香港大学微生物系 , 用含10%新 生牛血清的RPMI1640传代培养。人脐血单个核细胞(CBMCs):南京妇幼保健院提供肝素抗凝 脐血,Ficoll分离,在淋巴细胞生长液中培养。培养条件：20%新生牛血清的RPMI1640,含PH A 40 μg/ml,IL-2 10 U/ml,谷氨酰胺2 mmol/L,青、链霉素各100 U/ml。
1.3 试剂 CD2、CD3、CD4、CD8、CD45RA单克隆抗体, 碱性磷酸 酶桥联酶标试剂盒(APAAP Kit)：北京邦定公司产品。
, 百拇医药
1.4 APAAP法检测CD抗原 将PHA 预刺激的 CBMCs 调浓度为1×106 细胞/ml,分别接种100 TCID50/ml GS、CN5、YY5病毒,感染48 h后离心涂片, 用 同一批未感染 的CBMCs同样处理作对照,按APAAP试剂盒说明书步骤操作。待检CD抗原有CD2、CD3、CD4、CD 8、CD45RA ,表面有红色标记物的细胞为阳性细胞,数200个细胞,计算阳性细胞百分率。
1.5 统计学分析 采用sigmastat统计软件,配对资料用配对t检验 ，两样本均数比较用t检验，P<0.05 有统计学意义。
2 结果
HHV-6 GS、CN5株、HHV-7 YY5株感染CBMCs 48 h后对CD抗原表达的影响，见表1。
从表1可见，和对照组相比，HHV-6GS、CN5株感染对CD2无影响，而两者都使CD4表达明 显升高，CD3表达明显降低，其中GS株使CD3降低比CN5株更为明显；但GS株感染使CD8 、CD45RA表达显著降低，而CN5对CD8 、CD45RA无明显影响。HHV-7YY5株感染使CD2表达明显升高 ，CD4、CD45RA表达显著降低，对CD3、CD8无明显影响。
, http://www.100md.com
表1 GS、CN5、YY5体外感染CBMCs 48 h对CD抗原表达的影响
Tab.1 Effects of CD-Ag expression on CBMCs at 48h post infection
with GS,CN5 and YY5 strains CD-Ag
Percentages of CD-Ag positive cells(%,
)
GS strain
CN5 strain
YY5 strain
, 百拇医药 Infected
Control
Infected
Control
Infected
Control
CD2
58.2±7.73)
61.2±5.1
65.8±5.6 3)
62.8±4.4
72.6±5.01)
, 百拇医药
61.2±5.1
CD3
39.0±7.01)3)
73.4±3.8
53.0±9.51)2 )3)
68.6±3.2
73.6±3.4
73.4±3.8
CD4
52.4±3.21)3)
46.3±2.3
, http://www.100md.com
50.5±8.91)3)
43.1±6.5
32.3±2.01)
46.3±2.3
CD8
12.6±2.11)
22.5±4.2
23.5±3.32)
22.5±2.7
22.0±4.22)
, 百拇医药 22.5±4.2
CD45RA
28.5±5.31)
72.9±4.4
70.9±1.82)3)
71.1±2.4
27.6±10.61)
72.9±4.4
Note:1)Compared with corresponding control group, P<0.05 ( paired t-test);2) compared with corresponding GS infected group , P<0.05;3) compared with corresponding YY5 infected group, P <0.053 讨论
, 百拇医药
CD分子不但是淋巴细胞分化的主要标志，而且在免疫细胞对抗原的识别、信号传导及增 殖活化过程中起着关键性作用。HHV-6、HHV-7感染淋巴细胞后，可影响CD抗原的表达， 直接 影响淋巴细胞乃至机体的免疫功能。Lusso等发现，HHV-6感染可在转录水平上引起CD3下调 及CD4分子的从头表达[4，5]。本实验研究结果证实HHV-6A型，B型株感染都 能使CD3表达明显 下降，对CD4表达明显升高。近来研究证明CD4分子是HHV-7的重要受体，且体外实验发现 ，HHV-7和HIV可竞争相同受体而相互干扰[6]。Secchiero等研究发现，HHV-7感 染使细胞表面及 细胞内CD4蛋白都降低，且CD4 mRNA及CD4增强子转录活性也显著降低，从而全面阻止CD4蛋 白的从头合成[7]。本实验证实，HHV-7感染使CD4合成显著降低，对CD3表达无 明显影响。另 外，HHV-7感染还能使CD2表达增加，而HHV-6A型、B型对CD2均无明显影响，确切机理不甚清楚。
, http://www.100md.com
本实验还发现GS株感染能显著降低CD8的表达，而CN5、YY5对CD8无明显影响。CD8是MH C-I类抗原受体，是CTL和靶细胞间重要的粘附分子，GS感染无疑削弱了CTL对病毒感染细 胞的识别和杀伤，抑制了由细胞介导的免疫防御功能。GS、CN5感染都引起CD4/CD8明显升高 ， 且GS感染组又明显高于CN5感染组；而HHV-7感染明显降低了CD4/CD8，揭示HHV-6、HHV- 7感 染都干扰了免疫调节功能。CD45RA是白细胞共同抗原，参与特异性抗原活化T 细胞过程，在信号传导中发挥重要的调节功能。本实验结果揭示，GS株、YY5株感染CBMCs使 CD45RA表达明显降低，而CN5感染对CD45RA无影响，对此确切机理，有待于进一步研究。
从本文的实验结果不难发现，尽管HHV-6、HHV-7同属于人类β-疱疹病毒，在许多方面 存在着一定的相近性，但对CD抗原表达的影响有着不同特点，HHV-6A型和B型株之间也存 在着差异。
本课题由国家及省自然科学基金资助(No.39270034,BK97051)
, 百拇医药
作者简介： 姚堃，女，62岁，教授，博士生导师，主要从事病毒免疫研究
4 参考文献
1，范 萍，姚 堃，周瑶玺.人类疱疹病毒6型的分群及其意义.国外医 学*微生物学分册，1996；19(2)：8
2，陈 斌，姚 堃，周瑶玺 et al. 从病人外周血单个核细胞中检测HHV- 6：分离培养和基因扩增.中国病毒学，1996；11(2)：125
3，姚 堃，任 强，彭光勇 et al.人类疱疹病毒7型南京株的分离及初 步鉴定.南京医科大学学报，1998；18(3)：170
4，Lusso P, Malnati M, Maria A D et al. Productive infection o f CD4+ and CD8+ mature human T cell populations and clones by human herpesvi rus 6:transcriptional down-regulation of CD3.J Immunol,1991;142(2):685
, http://www.100md.com
5，Lusso P, Garzino-Demo A, Rowley R W et al. Infection of γ/ δ T lymphocytes by human herpesvirus 6:transcriptional induction of CD4 and susceptibility to HIV infection. J Exp Med, 1995; 181(4): 1303
6，Crowley R W, Secchiero P, Zella D et al. Interference betwee n human herpesvirus 7 and HIV-1 in mononuclear phagocytes. J Immunol,1996;156(5 ):2004
7，Secchiero P, Gibellini D, Flamand L et al. Human herpesvirus 7 induc es the down-regulation of CD4 antigen in lymphoid T cells without affecting p5 6lck levels. J Immunol, 1997; 159(7): 3412
[收稿 1999-06-02 修回 1999-12-28], 百拇医药
单位：姚堃(南京医科大学微生物与 免疫学教研室，南京 210029)；彭光勇(南京医科大学微生物与 免疫学教研室，南京 210029)；任强(南京医科大学微生物与 免疫学教研室，南京 210029)；季晓辉(南京医科大学微生物与 免疫学教研室，南京 210029)；周峰(南京医科大学微生物与 免疫学教研室，南京 210029)
关键词：
中国免疫学杂志000508 中国图书分类号 R373 R392.11
人类疱疹病毒6 、7型(HHV-6、HHV-7)是近年发现的人类疱疹病毒家族 的 新成员，它们对淋巴细胞具有高度的亲嗜性，同属于人类β-疱疹病毒。HHV-6根据体 外生长特点，对单抗的反应性及限制性酶切图谱等方面特征又分为2种类型：A型和B型[1]。本文 研究了HHV-6A型株GS及我室分离的HHV-6 B型株 CN5、HHV-7YY5 3株病毒感染淋巴细胞 对CD抗原表达的影响[2，3]，并对其免疫机理作了初步探讨。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 病毒株 HHV-6 GS标准株:香港大学微生物系Prof.M.H.Ng惠赠, 在 HSB2细胞株上传代培养。HHV-6 CN5株：我室从ES患儿外周血单个核细胞中分离的中国南京 株，在人脐血单个核细胞上传代培养。HHV-7 YY5株:我室从一肾病患儿唾液中分离的HHV- 7中国南京株,在SUPT1细胞上传代培养。
1.2 细胞 SUPT1、HSB2细胞系:来自香港大学微生物系 , 用含10%新 生牛血清的RPMI1640传代培养。人脐血单个核细胞(CBMCs):南京妇幼保健院提供肝素抗凝 脐血,Ficoll分离,在淋巴细胞生长液中培养。培养条件：20%新生牛血清的RPMI1640,含PH A 40 μg/ml,IL-2 10 U/ml,谷氨酰胺2 mmol/L,青、链霉素各100 U/ml。
1.3 试剂 CD2、CD3、CD4、CD8、CD45RA单克隆抗体, 碱性磷酸 酶桥联酶标试剂盒(APAAP Kit)：北京邦定公司产品。
, 百拇医药
1.4 APAAP法检测CD抗原 将PHA 预刺激的 CBMCs 调浓度为1×106 细胞/ml,分别接种100 TCID50/ml GS、CN5、YY5病毒,感染48 h后离心涂片, 用 同一批未感染 的CBMCs同样处理作对照,按APAAP试剂盒说明书步骤操作。待检CD抗原有CD2、CD3、CD4、CD 8、CD45RA ,表面有红色标记物的细胞为阳性细胞,数200个细胞,计算阳性细胞百分率。
1.5 统计学分析 采用sigmastat统计软件,配对资料用配对t检验 ，两样本均数比较用t检验，P<0.05 有统计学意义。
2 结果
HHV-6 GS、CN5株、HHV-7 YY5株感染CBMCs 48 h后对CD抗原表达的影响，见表1。
从表1可见，和对照组相比，HHV-6GS、CN5株感染对CD2无影响，而两者都使CD4表达明 显升高，CD3表达明显降低，其中GS株使CD3降低比CN5株更为明显；但GS株感染使CD8 、CD45RA表达显著降低，而CN5对CD8 、CD45RA无明显影响。HHV-7YY5株感染使CD2表达明显升高 ，CD4、CD45RA表达显著降低，对CD3、CD8无明显影响。
, http://www.100md.com
表1 GS、CN5、YY5体外感染CBMCs 48 h对CD抗原表达的影响
Tab.1 Effects of CD-Ag expression on CBMCs at 48h post infection
with GS,CN5 and YY5 strains CD-Ag
Percentages of CD-Ag positive cells(%,
)GS strain
CN5 strain
YY5 strain
, 百拇医药 Infected
Control
Infected
Control
Infected
Control
CD2
58.2±7.73)
61.2±5.1
65.8±5.6 3)
62.8±4.4
72.6±5.01)
, 百拇医药
61.2±5.1
CD3
39.0±7.01)3)
73.4±3.8
53.0±9.51)2 )3)
68.6±3.2
73.6±3.4
73.4±3.8
CD4
52.4±3.21)3)
46.3±2.3
, http://www.100md.com
50.5±8.91)3)
43.1±6.5
32.3±2.01)
46.3±2.3
CD8
12.6±2.11)
22.5±4.2
23.5±3.32)
22.5±2.7
22.0±4.22)
, 百拇医药 22.5±4.2
CD45RA
28.5±5.31)
72.9±4.4
70.9±1.82)3)
71.1±2.4
27.6±10.61)
72.9±4.4
Note:1)Compared with corresponding control group, P<0.05 ( paired t-test);2) compared with corresponding GS infected group , P<0.05;3) compared with corresponding YY5 infected group, P <0.053 讨论
, 百拇医药
CD分子不但是淋巴细胞分化的主要标志，而且在免疫细胞对抗原的识别、信号传导及增 殖活化过程中起着关键性作用。HHV-6、HHV-7感染淋巴细胞后，可影响CD抗原的表达， 直接 影响淋巴细胞乃至机体的免疫功能。Lusso等发现，HHV-6感染可在转录水平上引起CD3下调 及CD4分子的从头表达[4，5]。本实验研究结果证实HHV-6A型，B型株感染都 能使CD3表达明显 下降，对CD4表达明显升高。近来研究证明CD4分子是HHV-7的重要受体，且体外实验发现 ，HHV-7和HIV可竞争相同受体而相互干扰[6]。Secchiero等研究发现，HHV-7感 染使细胞表面及 细胞内CD4蛋白都降低，且CD4 mRNA及CD4增强子转录活性也显著降低，从而全面阻止CD4蛋 白的从头合成[7]。本实验证实，HHV-7感染使CD4合成显著降低，对CD3表达无 明显影响。另 外，HHV-7感染还能使CD2表达增加，而HHV-6A型、B型对CD2均无明显影响，确切机理不甚清楚。
, http://www.100md.com
本实验还发现GS株感染能显著降低CD8的表达，而CN5、YY5对CD8无明显影响。CD8是MH C-I类抗原受体，是CTL和靶细胞间重要的粘附分子，GS感染无疑削弱了CTL对病毒感染细 胞的识别和杀伤，抑制了由细胞介导的免疫防御功能。GS、CN5感染都引起CD4/CD8明显升高 ， 且GS感染组又明显高于CN5感染组；而HHV-7感染明显降低了CD4/CD8，揭示HHV-6、HHV- 7感 染都干扰了免疫调节功能。CD45RA是白细胞共同抗原，参与特异性抗原活化T 细胞过程，在信号传导中发挥重要的调节功能。本实验结果揭示，GS株、YY5株感染CBMCs使 CD45RA表达明显降低，而CN5感染对CD45RA无影响，对此确切机理，有待于进一步研究。
从本文的实验结果不难发现，尽管HHV-6、HHV-7同属于人类β-疱疹病毒，在许多方面 存在着一定的相近性，但对CD抗原表达的影响有着不同特点，HHV-6A型和B型株之间也存 在着差异。
本课题由国家及省自然科学基金资助(No.39270034,BK97051)
, 百拇医药
作者简介： 姚堃，女，62岁，教授，博士生导师，主要从事病毒免疫研究
4 参考文献
1，范 萍，姚 堃，周瑶玺.人类疱疹病毒6型的分群及其意义.国外医 学*微生物学分册，1996；19(2)：8
2，陈 斌，姚 堃，周瑶玺 et al. 从病人外周血单个核细胞中检测HHV- 6：分离培养和基因扩增.中国病毒学，1996；11(2)：125
3，姚 堃，任 强，彭光勇 et al.人类疱疹病毒7型南京株的分离及初 步鉴定.南京医科大学学报，1998；18(3)：170
4，Lusso P, Malnati M, Maria A D et al. Productive infection o f CD4+ and CD8+ mature human T cell populations and clones by human herpesvi rus 6:transcriptional down-regulation of CD3.J Immunol,1991;142(2):685
, http://www.100md.com
5，Lusso P, Garzino-Demo A, Rowley R W et al. Infection of γ/ δ T lymphocytes by human herpesvirus 6:transcriptional induction of CD4 and susceptibility to HIV infection. J Exp Med, 1995; 181(4): 1303
6，Crowley R W, Secchiero P, Zella D et al. Interference betwee n human herpesvirus 7 and HIV-1 in mononuclear phagocytes. J Immunol,1996;156(5 ):2004
7，Secchiero P, Gibellini D, Flamand L et al. Human herpesvirus 7 induc es the down-regulation of CD4 antigen in lymphoid T cells without affecting p5 6lck levels. J Immunol, 1997; 159(7): 3412
[收稿 1999-06-02 修回 1999-12-28], 百拇医药