火箭电泳法检测人血浆a1-抗糜蛋白酶
作者：尹晓娟 李为明 奚敏 邱荆安!]|#?5, 百拇医药
单位：尹晓娟(第三军医大学西南医院儿科，重庆 400038)；李为明(第三军医大学新桥医院儿科，重庆 400037)；奚敏(第三军医大学新桥医院儿科，重庆 400037)；邱荆安(第三军医大学新桥医院儿科，重庆 400037)!]|#?5, 百拇医药
关键词：火箭电泳；a1-抗糜蛋白酶!]|#?5, 百拇医药
免疫学杂志000524 [中图分类号] Q556.9 [文献标识码] B!]|#?5, 百拇医药
[文章编号]1000-8861(2000)05-0394-01!]|#?5, 百拇医药
Determining of plasma a1-ACT level with rochet electroimmunoassay!]|#?5, 百拇医药
a1-抗糜蛋白酶(a1-ACT)是一种主要的急性期反应蛋白，在急性炎症、应激和外科手术时，它的血浆含量明显增高。本室建立了改良火箭电泳法检测人血浆a1-ACT含量，为a1-ACT与疾病的相关性的临床及基础研究提供一种免疫定量法。!]|#?5, 百拇医药
1 材料与方法!]|#?5, 百拇医药
1.1 血浆收集 选择本院哮喘儿童90例作为哮喘组，年龄0.25～12.75岁；健康儿童180例作为对照组，年龄0.04～13.2岁；哮喘儿童采急性期及缓解期双份血浆，所有研究对象均采静脉血，用ACD液抗凝。!]|#?5, 百拇医药
1.2 试剂 免疫人a1-ACT抗血清及人血浆蛋白标准品购自DAKO公司；琼脂糖购自Promega公司；巴比妥钠、盐酸为国产分析纯。!]|#?5, 百拇医药
1.3 方法 采用0.06 mol/L巴比妥钠-盐酸缓冲液(pH8.6)作为电极液，0.03 mol/L巴比妥钠-盐酸缓冲液(pH8.6)，将琼脂糖配成1.3%胶，标准品血浆中a1-ACT含量为0.3 g/L，每次实验前用生理盐水稀释成每5 μl含a1-ACT量分别为0.25 μg、0.20 μg、0.125 μg、0.06 μg、0.03 μg、0.02 μg；被测血浆用生理盐水按1∶10稀释。26 ml胶含兔抗人a1-ACT抗血清0.139 ml，制成胶板并打孔，每孔分别加上血浆稀释标准品及稀释的被测血浆5 μl。电泳条件为25 °C，端电压10 v/cm，电泳时间4 h。电泳完后，0.9%的生理盐水漂洗过夜，然后用0.1%的考马氏亮蓝R250染液染色5 min，再用冰乙酸、无水醇及蒸馏水按1∶3∶6配成的脱色液脱色至背景清晰为止。根据火箭高度及标准a1-ACT含量作标准曲线，由标准曲线求被测人血浆中a1-ACT含量。
2 结果f-cr, 百拇医药
按本法测定180例正常儿童血浆a1-ACT含量为0.3093±0.087 g/L；90例哮喘儿童急性期血浆a1-ACT含量为0.5472±0.127 g/L，缓解期a1-ACT含量为0.3174±0.118 g/L。哮喘组急性期血浆a1-ACT含量明显高于正常儿童组(P<0.01)，且明显高于缓解期(P<0.01)；而哮喘组缓解期血浆a1-ACT含量与正常儿童组则无显著性差异(P>0.05)。f-cr, 百拇医药
3 讨论f-cr, 百拇医药
本文结果表明：哮喘急性发作期血浆a1-ACT含量明显高于缓解期和正常儿童组；而哮喘组缓解期血浆a1-ACT含量与正常儿童组则无显著性差异。这一现象可能与a1-ACT属于急性相反应蛋白有关。炎症、变态反应等病理情况可刺激a1-ACT合成；血浆a1-ACT升高对维持体内蛋白酶与抗蛋白酶之间的平衡是重要的，并可能参与炎症反应与免疫反应的调节[1]。因此测定血浆a1-ACT可作为观察哮喘病情转归的一项有用指标。f-cr, 百拇医药
火箭电泳是一种免疫学方法，应用抗原与抗体反应结合原理，直接检测血浆a1-ACT含量，只要样本中a1-ACT抗原性不发生改变，便可准确测定出其含量；而单向免疫扩散电泳有时间长、误差大的缺点。故火箭电泳的特点是特异性强、灵敏度高、操作简便、不易受其它非抗糜蛋白酶干扰、测定结果易作比较。所以a1-ACT火箭免疫电泳的建立为a1-ACT应用于临床及基础研究提供了又一种方法。f-cr, 百拇医药
[基金项目] 国家自然科学基金资助项目(39570749)f-cr, 百拇医药
[作者简介] 尹晓娟(1966-)，女，湖南邵阳市人，主治医师，硕士，主要从事a1-抗糜蛋白酶遗传缺陷在中国人发病中的作用研究。f-cr, 百拇医药
[参考文献]f-cr, 百拇医药
[1] 尹晓娟，李为明.a1-抗糜蛋白酶的研究进展[J].四川医学，1999，20(3)：281～283.f-cr, 百拇医药
[2] LAURELL C-B.Electroimmunoassay[J]. Scand J Clin Lab Invest， 1972，124(Suppl)：21～27.f-cr, 百拇医药
[收稿日期] 1999-10-26 [修稿日期] 2000-04-18(尹晓娟 李为明 奚敏 邱荆安)
单位：尹晓娟(第三军医大学西南医院儿科，重庆 400038)；李为明(第三军医大学新桥医院儿科，重庆 400037)；奚敏(第三军医大学新桥医院儿科，重庆 400037)；邱荆安(第三军医大学新桥医院儿科，重庆 400037)!]|#?5, 百拇医药
关键词：火箭电泳；a1-抗糜蛋白酶!]|#?5, 百拇医药
免疫学杂志000524 [中图分类号] Q556.9 [文献标识码] B!]|#?5, 百拇医药
[文章编号]1000-8861(2000)05-0394-01!]|#?5, 百拇医药
Determining of plasma a1-ACT level with rochet electroimmunoassay!]|#?5, 百拇医药
a1-抗糜蛋白酶(a1-ACT)是一种主要的急性期反应蛋白，在急性炎症、应激和外科手术时，它的血浆含量明显增高。本室建立了改良火箭电泳法检测人血浆a1-ACT含量，为a1-ACT与疾病的相关性的临床及基础研究提供一种免疫定量法。!]|#?5, 百拇医药
1 材料与方法!]|#?5, 百拇医药
1.1 血浆收集 选择本院哮喘儿童90例作为哮喘组，年龄0.25～12.75岁；健康儿童180例作为对照组，年龄0.04～13.2岁；哮喘儿童采急性期及缓解期双份血浆，所有研究对象均采静脉血，用ACD液抗凝。!]|#?5, 百拇医药
1.2 试剂 免疫人a1-ACT抗血清及人血浆蛋白标准品购自DAKO公司；琼脂糖购自Promega公司；巴比妥钠、盐酸为国产分析纯。!]|#?5, 百拇医药
1.3 方法 采用0.06 mol/L巴比妥钠-盐酸缓冲液(pH8.6)作为电极液，0.03 mol/L巴比妥钠-盐酸缓冲液(pH8.6)，将琼脂糖配成1.3%胶，标准品血浆中a1-ACT含量为0.3 g/L，每次实验前用生理盐水稀释成每5 μl含a1-ACT量分别为0.25 μg、0.20 μg、0.125 μg、0.06 μg、0.03 μg、0.02 μg；被测血浆用生理盐水按1∶10稀释。26 ml胶含兔抗人a1-ACT抗血清0.139 ml，制成胶板并打孔，每孔分别加上血浆稀释标准品及稀释的被测血浆5 μl。电泳条件为25 °C，端电压10 v/cm，电泳时间4 h。电泳完后，0.9%的生理盐水漂洗过夜，然后用0.1%的考马氏亮蓝R250染液染色5 min，再用冰乙酸、无水醇及蒸馏水按1∶3∶6配成的脱色液脱色至背景清晰为止。根据火箭高度及标准a1-ACT含量作标准曲线，由标准曲线求被测人血浆中a1-ACT含量。
2 结果f-cr, 百拇医药
按本法测定180例正常儿童血浆a1-ACT含量为0.3093±0.087 g/L；90例哮喘儿童急性期血浆a1-ACT含量为0.5472±0.127 g/L，缓解期a1-ACT含量为0.3174±0.118 g/L。哮喘组急性期血浆a1-ACT含量明显高于正常儿童组(P<0.01)，且明显高于缓解期(P<0.01)；而哮喘组缓解期血浆a1-ACT含量与正常儿童组则无显著性差异(P>0.05)。f-cr, 百拇医药
3 讨论f-cr, 百拇医药
本文结果表明：哮喘急性发作期血浆a1-ACT含量明显高于缓解期和正常儿童组；而哮喘组缓解期血浆a1-ACT含量与正常儿童组则无显著性差异。这一现象可能与a1-ACT属于急性相反应蛋白有关。炎症、变态反应等病理情况可刺激a1-ACT合成；血浆a1-ACT升高对维持体内蛋白酶与抗蛋白酶之间的平衡是重要的，并可能参与炎症反应与免疫反应的调节[1]。因此测定血浆a1-ACT可作为观察哮喘病情转归的一项有用指标。f-cr, 百拇医药
火箭电泳是一种免疫学方法，应用抗原与抗体反应结合原理，直接检测血浆a1-ACT含量，只要样本中a1-ACT抗原性不发生改变，便可准确测定出其含量；而单向免疫扩散电泳有时间长、误差大的缺点。故火箭电泳的特点是特异性强、灵敏度高、操作简便、不易受其它非抗糜蛋白酶干扰、测定结果易作比较。所以a1-ACT火箭免疫电泳的建立为a1-ACT应用于临床及基础研究提供了又一种方法。f-cr, 百拇医药
[基金项目] 国家自然科学基金资助项目(39570749)f-cr, 百拇医药
[作者简介] 尹晓娟(1966-)，女，湖南邵阳市人，主治医师，硕士，主要从事a1-抗糜蛋白酶遗传缺陷在中国人发病中的作用研究。f-cr, 百拇医药
[参考文献]f-cr, 百拇医药
[1] 尹晓娟，李为明.a1-抗糜蛋白酶的研究进展[J].四川医学，1999，20(3)：281～283.f-cr, 百拇医药
[2] LAURELL C-B.Electroimmunoassay[J]. Scand J Clin Lab Invest， 1972，124(Suppl)：21～27.f-cr, 百拇医药
[收稿日期] 1999-10-26 [修稿日期] 2000-04-18(尹晓娟 李为明 奚敏 邱荆安)