当前位置: 首页 > 期刊 > 《微循环学杂志》 > 2000年第2期
编号:10259622
实验性糖尿病神经和微血管形态研究及黄腐酸钠早期干预
http://www.100md.com 《微循环学杂志》 2000年第2期
     作者:杨光燃 袁申元 袁明霞 张盛忠 朱良湘 刘元涛

    单位:杨光燃(北京同仁医院微循环糖尿病科, 邮政编码 北京100730);袁申元(北京同仁医院微循环糖尿病科, 邮政编码 北京100730);袁明霞(北京同仁医院微循环糖尿病科, 邮政编码 北京100730);张盛忠(北京同仁医院微循环病理科, 邮政编码 北京100730);朱良湘(北京同仁医院微循环糖尿病科, 邮政编码 北京100730);刘元涛(北京同仁医院微循环糖尿病科, 邮政编码 北京100730)

    关键词:糖尿病神经病变;黄腐酸钠;大鼠

    微循环学杂志000202

    目的: 观察糖尿病大鼠神经和神经内膜毛细血管形态变化及黄腐酸钠早期干预效果。方法: 腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。 给予黄腐酸钠治疗6个月。结果: (1) 糖尿病动物血糖明显增高。 (2) 糖尿病组有髓神经纤维密度明显低于对照组。 黄腐酸钠治疗组有髓神经纤维密度明显高于糖尿病组。 (3) 电镜下糖尿病组神经纤维、 神经内膜毛细血管出现结构改变; 黄腐酸钠治疗组上述改变较轻。 结论: 提示糖尿病大鼠病程6个月时出现早期糖尿病神经病变及神经内膜毛细血管结构改变, 黄腐酸钠可一定程度地抑制其进展。
, 百拇医药
    Structural Changes of Nerve and Microvessels in Experimental Diabetes and Primary Effect of Sodium Fulvate

    Yang Guangran, Yuan Shenyuan, Yuan Mingxia

    (Tongren Hospital of Beijing City, Beijing 100730)

    Objective: To evaluate the changes of morphology of nerve fibers and endoneurial capillaries, the effect of sodium fulvate(SF) in STZ-DM rats. Method: Diabetic rats were induced by ip of streptozotocin(STZ). DM rats were given SF for six months.Results: (1) Diabetic rats were hyperglycemia. There was no effects of SF on hyperglycemia in diabetic rats. (2) The myelinated nerve density in diabetic group was 10 140.74±1 237.48/mm2, that in control group was 12 730.55±947.51/mm2(P<0.05), that in SF-treated group was 11 315.78±1 233.80/mm2(P<0.05). (3) The ultrastructureal changes of nerve fibers and endoneurial capillaries in diabetic rats were found, which were more severe than those in SF-treated diabetic rats. Conclusion: The present results indicated that changes of nerve fibers and endoneurial capillaries occurred in diabetic rats six months after STZ administration which suggested early diabetic peripheral neuropathy had happened. SF can prevent the changes of nerve pathology.
, 百拇医药
    Key words: Diabetic neuropathy; Sodium fulvate; Rat

    糖尿病周围神经病变是糖尿病常见的慢性并发症之一, 目前发病机制尚不完全清楚, 治疗方 法不够满意。 近年来, 关于神经微循环障碍在糖尿病神经病变发病中所起的作用日益受到 重视; 中药提取的黄腐酸钠(Sodium Fulvate, SF)经我科20年来的实验证实, 能减轻心、 脑、 胃、 胰腺的微循环障碍[1,2], 可初步抑制实验性糖尿病视网膜病变和早 期肾脏病变的进展[3]。本研究拟观察实验性糖尿病时神经纤维、 神经内膜毛细血 管形态变化及黄腐酸钠对其影响。

    1 材料和方法

    1.1建立糖尿病动物模型

    选用成年雄性纯系Wistar大鼠(北京医科大学实验动物学部提供), 体重200~250 g, 实验 过程中自由进食水, 单只代谢笼分笼饲养。 大鼠禁食10 h后, 予链脲佐菌素溶液(Strept ozotocin, STZ, Sigma公司)60 mg/kg一次性腹腔注射。 二周后, 取尾静脉血用One Touch Ⅱ血糖仪(Life-scan公司, USA)测血糖, 将空腹血糖≥16.6 mmol/L, 尿糖持续 阳性者定为糖尿病模型动物。
, 百拇医药
    1.2 研究方法

    实验动物分为三组: 制造模型前随机选择10只健康大鼠作为正常对照组, 糖尿病鼠24只 随机分为糖尿病组和治疗组各12只。 治疗组于糖尿病模型制成后每日皮下注射0.5%黄 腐酸钠(河南巩义制药厂, 批号871117)6 ml/kg; 糖尿病组注射等容积生理盐水, 正常组 不做处理, 均饲养6个月。

    1.3 观察指标

    1.3.1 一般指标: 包括(1) 体重; (2) 血糖: 方法同前; (3) 糖化血 红蛋白: 用乳胶免疫聚集抑制法测定(德国Bayer公司DCA2000仪器及试纸盒)。 均于模型制 成后6个月时测定。

    1.3.2 光镜观察: 实验结束时取大鼠坐骨神经标本, 用0.05%四氧化 锇固定, 常规脱水、 透明, 石蜡包埋, 制成7 μm石蜡切片, 于显微镜下观察, 放大1 0×40倍, 于神经横切面上中下左右各取一视野, 计算每平方毫米有髓神经纤维的密度。
, 百拇医药
    1.3.3 电镜观察: 于实验结束时取大鼠坐骨神经标本, 置于预冷的3%戊 二醛中固定, 1%四氧化锇后固定, Epon812包埋, 超薄切片, 铅铀染色, 透射电镜(JEM -2000EX, Japan)下观察、 摄影。

    1.4 统计方法

    所有数据用SPSS for Windows 6.0处理, 结果以平均值±标准差表示, 组间比较用 方差分析, 若有显著性差异, 任意二组间比较用Student-New-man-Keuls检验。 2 结 果

    2.1动物一般情况

    实验结束时, 糖尿病组血糖(22.32±5.17 mmol/L)及糖化血红蛋白(8.67%± 1.19%)显著高于对照组, 体重显著低于对照组(P<0.05)。 SF治疗组与糖尿病 组之间上述指标无显著差异(附表)。
, 百拇医药
    附表 实验动物体重、 血糖及糖化血红蛋白测量结果(±s) 组别

    n

    体 重

    (g)

    血 糖

    (mmol/L)

    糖化血红蛋白

    (%)

    对照组

    10

    557.50±90.78
, http://www.100md.com
    5.02±1.60

    3.2 5±0.18

    糖尿病组

    9

    381.11±47.221)

    22.32±5.171)

    8.67±1.191 )

    治疗组

    9

    351.67±42.721)

    22.93±4.161)
, 百拇医药
    8.28±1.141)

    注: 1)与对照组相比P<0.05

    2.2 神经光镜观察

    光镜下, 糖尿病组有髓神经纤维密度(10 140.74±1 237.48个/mm2)较对照组( 12 730.55±947.51个/mm2)明显减少, 神经纤维间隙扩大, 并见髓鞘肿胀。 治疗组有髓神经纤维密度(11 315.78±1 233.80个/mm2)与糖尿病组比较, 有明 显升高(P<0.05), 仍低于对照组(图1)。

    图 1 各组有髓神经纤维密度之比较
, 百拇医药
    图中: 1) 与对照组比较, P<0.05; 2) 与糖尿病组比 较, P<0.05。

    2.3 神经超微结构变化

    正常对照组神经髓鞘板层结构清晰, 神经原纤维排列规整; 糖尿病组神经髓鞘板层结构不 清, 部分可见板层松散、 断裂, 神经原纤维排列紊乱, 轴索微丝及微管断裂、 溶解, 线粒体肿胀。 而治疗组上述改变较轻。

    2.4 神经内膜毛细血管电镜观察结果

    对照组神经内膜毛细血管管腔规则, 管壁较光滑(图2); 糖尿病组神经内膜毛细血管管腔 变形、 狭窄, 内皮细胞肿胀向管腔内突出, 绒毛样突起和吞饮泡显著增多, 基底膜增厚 (图3); 黄腐酸钠治疗组上述改变较轻(图4)。
, http://www.100md.com
    图2 对照组大鼠神经内膜毛细血管管腔规则

    图3 糖尿病组神经内膜毛细血管管腔变形,狭窄,内皮细胞肿胀向腔内突出,基底膜增厚×5000

    图4 黄腐酸钠治疗组有轻微管腔变形,内皮细胞肿胀和基底膜增厚的程度明显轻于糖尿病组

    3 讨 论

    我们对病程6个月的糖尿病大鼠神经内膜毛细血管超微结构进行观察, 发现其神经内膜毛细 血管管腔变形、 狭窄, 内皮细胞肿胀, 绒毛样突起和吞饮泡显著增多, 基底膜增厚, 这势必降低神经血流和神经内膜氧水平, 导致神经纤维营养障碍, 引起神经变性、 坏死 。 还发现其有髓神经纤维明显减少, 超微结构观察发现神经纤维髓鞘、 轴索均有改变, 提示神经纤维变性可能与神经内膜血流量减少有关。 另外我们还在制成糖尿病动物模型后 给予黄腐酸钠治疗, 发现黄腐酸钠治疗组神经纤维数量、 神经内膜毛细血管结构改变均较 未治疗组明显减轻。 进一步提示微血管改变在糖尿病神经病变可能起一定作用。
, 百拇医药
    近年的动物实验和临床研究证实糖尿病神经病变存在的神经微血管异常, 而尤以神经内膜 微血管病变与糖尿病神经病变发展密切相关[4~6]。 而改善神经血供的治疗可减 轻糖尿病神经病变[7,8]。 这些均为糖尿病周围神经病变的微血管病变提供了佐 证。 临床在给予神经营养药的同时也应重视改善神经微循环在防治糖尿病神经病变中的作 用。

    黄腐酸钠(Sodium Fulvate, 简称SF)是从《本草纲目》金石部所载“乌金石”中提取的有效 成分, 由一系列分子量大小不等, 以多元芳香羧酸为主要结构、 活性基团相似的化合物 所组成。 临床观察发现黄腐酸钠对于缓解糖尿病合并周围神经病变患者的疼痛有明显疗效 。 近年我科的实验研究发现, 黄腐酸钠对实验性糖尿病视网膜病变和早期肾脏病变的进展 有一定抑制作用[3]

    结合本实验结果提示黄腐酸钠改善实验性糖尿病神经纤维变性可能与其改善神经内膜微循环 有关。 另外我们还发现目前剂量黄腐酸钠未影响其血糖和糖化血红蛋白(附表), 说明其疗 效不是直接通过降低血糖而实现的。 黄腐酸钠临床应用的实践证明, 该药可长期使用而副 作用极少, 如能在临床上与降糖药物合用, 可能会有更明显的效果, 将有可能为早期防 治糖尿病神经病变提供新的思路。
, http://www.100md.com
    本文作者简介:杨光燃(1972~), 女, 汉族, 医师, 硕士

    参考文献

    1,沈彤, 刘诚仪, 潘素芳, 等. 实验性胃溃疡大鼠胃粘膜血流的研究. 中华医 学杂志, 1989, 69(3):163~165.

    2,原标, 陈佛来, 文武, 等. 黄腐酸钠对大鼠重症胰腺炎胰腺微循环障碍的防 治研究. 中华肝胆外科杂志, 1998, 4(2):95~98.

    3,刘元涛, 袁明霞, 袁申元, 等. 黄腐酸钠对实验性糖尿病大鼠肾脏的保护作 用. 中华肾脏病杂志,1999, 15(2):24~26.

    4,Malik RA, Tesfage S, Thompson SD, et al. Endoneurial localisation of m icrovascular damage in human diabetic neuropathy. Diabetologia, 1993, 36:454~45 9.
, 百拇医药
    5,Malik RA, Veves A, Masson EA, et al. Endoneurial capillary abnormaliti es in mild human diabetic neuropathy. J Neurol Neurosurg Psychiatry, 1992, 55:55 7~561.

    6,Giannini C, Dyck PJ. Ulrastructural morphometric abnormalities of sura l nerve endoneurial microvessels in diabetes mellitus. Ann Neurol, 1994, 36:408 ~415.

    7,Hotta N, Koh N, Sakakibara E, et al. Prevention of abnormalities in mo tor nerve conduction and nerve blood flow by a prostacyclin analog, Beraprost so dium, in streptozotocin-induced diabetic rats. Prostaglandins, 1995, 49:339~43 9.

    8,Kappelle AC, Biessels G, Bravenboer B, et al. Beneficial effect of the Ca2+ antagonist, nimodipine, on existing diabetic neuropathy in the BB/W or rat. Br J Pharmacol, 1994, 111:887.

    本文1999-12-27收到, 2000-05-09接受, http://www.100md.com