恶性间皮瘤免疫组化诊断30例
作者：袁素波 杨青 王治明
单位：610041 成都，华西医科大学公共卫生学院(袁素波现在军事医学科学院毒物药物研究所工作)
关键词：恶性间皮瘤；癌胚抗原；角蛋白；波形蛋白
中华劳动卫生职业病杂志980508 【摘要】 目的 借助免疫组化技术，在光镜下确诊恶性间皮瘤。 方法 运用胰蛋白酶消化SP法及商品化的癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、角蛋白(keratin)和波形蛋白(vimentin)，对30例恶性间皮瘤组织进行了免疫组化研究。 结果 (1)恶性间皮瘤组织基本不表达癌胚抗原，藉此可以剔除癌的混杂。(2)恶性间皮瘤具有既表达细胞角蛋白(阳性率43%)，又表达波形蛋白(阳性率70%)的免疫组化特征，藉此可以与其它间叶来源的恶性肿瘤相区别。 结论 同时运用3种抗体进行免疫组化染色，可为在光镜下确诊恶性间皮瘤提供可靠的诊断依据。
, 百拇医药
Immunohistochemical diagnosis of 30 malignant mesothelioma cases Yuan Subo,Yang Qing,Wang Zhiming.Public Hygiene College,West China University of Medical Sciences,Chengdu 610041
【Abstract】 Objective To establish diagnosis of malignant mesothelioma under light microscope with the aid of immunohistochemical staintechnique.Methods Immunohistochemical study in 30 patients with malignant mesothelioma was carried out by using streptavidin-peroxidase(SP) method and carcinoembryonic antigen(CEA),keratin and vimentin.Results In general,malignant mesothelioma was negative in carcinoembryonic antigen.Thus we could distinguish malignant mesothelioma from carcinomas.Malignant mesothelioma cells gave positive expression in vimentin and keratin.The positive rate was 70% and 43% respectively.By this observation,we could demonstrate malignant mesothelioma in mesenchymal neoplasm.Conclusion The immunohistochemical stain for carcinoembryonic antigen(CEA),cytokeratin(CK) and vimentin might provide the useful diagnostic basis for malignant mesothelioma under light microscope.
, 百拇医药
【Key words】 Malignant mesothelioma Carcinoembryonic antigen Keratin Vimentin
恶性间皮瘤在普通人群中极为罕发，为一般的临床及病理医师所不熟悉，误诊较多;因其组织发生学不清、结构复杂，光镜诊断常感困难。在电镜技术尚未作为常规诊断手段时，在职业肿瘤领域有必要利用免疫组化染色技术,进行恶性间皮瘤与肺癌、转移性癌及其它间叶源性恶性肿瘤的鉴别，以提高诊断的准确性。
材料与方法
1.标本的来源与收集：恶性间皮瘤蜡块标本主要从四川、河北、重庆、新疆、山西、青海等地搜集，共34例(所有标本均经各搜集单位病理确诊为恶性间皮瘤，后经华西医科大学病理科复核证实)。病例诊断年限跨度36年，其中4例为石棉作业工人、11例是矿山居住者，共计有石棉接触史病例15例，占病例总数的44%(15/34)。
, 百拇医药
2.所收集的标本首先切片，作HE染色，对组织细胞形态作初步了解。因标本来源广泛，处理、保存方法难尽一致，故对组织形态上显示瘤组织过少、组织处理不当、细胞坏死的蜡块一律淘汰。得到组织形态保存完整而又具备一定细胞数量的蜡块30例，其病理组织学构成为：上皮型6例，占20%；纤维型11例，占37%；混合型13例，占43%。
试剂：免疫组化抗体来源及工作浓度见表1。
表1 免疫组化抗体来源和稀释度
Table 1 Dilution and source of antibodies 抗 体
Antibody
种 类
Kind
, 百拇医药
稀释度
Dilution
来 源
Source
角蛋白
Keratin
多抗
Polyclonal
1∶500
SYMED
癌胚抗原
CEA
单抗
, 百拇医药
Monoclonal
1∶50
SYMED
波形蛋白
Vimentin
单抗
Monoclonal
1∶50
SYMED
S-P试剂盒
S-P kit
B-Ⅱ抗
, 百拇医药 Antibody SP
1∶500
1∶500
DAKO
DAKO
3.实验方法：按常规免疫组化SP法进行，肿瘤组织作4 μm厚的石蜡切片，常规脱蜡水化，3%过氧化氢浸泡10分钟以阻断内源性过氧化物酶，充分水洗；0.05%的胰蛋白酶消化(37℃)30分钟，TBS洗；继之以5%非免疫小牛血清封闭30分钟，再依次加入一抗,4℃湿盒过夜;生物素化二抗及SP复合物按试剂盒说明加入；最后以DAB显色，苏木素复染，常规脱水透明，树胶封固。实验以TBS代替一抗作为阴性对照、以已知p53免疫组化阳性的乳腺癌标本作为阳性对照。以胞浆出现棕黄色着色为阳性。结 果
癌胚抗原(CEA)、角蛋白(keratin)及波形蛋白(vimentin)免疫组化染色观察结果见表2。
, 百拇医药
1.抗CEA抗体染色：由表2可见，本组30例恶性间皮瘤中，除2例混合型的腺样上皮部分表达较弱的CEA外，其余各型细胞CEA染色均呈阴性。
表2 恶性间皮瘤免疫组化染色结果
Table 2 Results of immunohistochemical stain
for mesotheliomas 类 型
Type
例 数
n
角蛋白
Keratin
波形蛋白
, 百拇医药
Vimentin
癌胚抗原
CEA
上皮型
Epithelial
6
4(66%)
2(33%)
0(0%)
纤维型
Fibrous
11
2(18%)
, 百拇医药
8(72%)
0(0%)
混合型
Mixed
13
7(54%)
11(84%)
2(15%)
合 计
Total
30
13(43%)
21(70%)
, http://www.100md.com
2(6%)
2.抗细胞角蛋白抗体染色：30例恶性间皮瘤中角蛋白阳性13例，占43%。其中,以上皮型阳性率最高，为66%(4/6)；纤维型最低，为18%(2/11)；混合型居中，54%(7/13)。各型阳性率之间的差异经χ2检验，无显著意义。反应阳性物均匀地分布在细胞浆内(图1)。
3.抗波形蛋白抗体染色：30例恶性间皮瘤中，21例抗波形蛋白抗体染色呈阳性反应，阳性染色分布在细胞浆内(图2)。其中,以混合型阳性率最高，为84%(11/13)；纤维型阳性率次之，为72%(8/11)；上皮型最低，为33%(2/6)。组织学类型之间的阳性率比较，差异无显著性。讨 论
转移至胸膜的肺癌或其它器官的转移癌是导致恶性间皮瘤误诊的主要肿瘤。大量的研究已经证实：癌的特征是CEA染色通常呈强阳性[1，2]。恶性间皮瘤CEA染色基本上为阴性，藉此可以剔除癌的混杂。恶性间皮瘤的腺样分化部分有时可有较弱的CEA表达，本组2例混合型病例的腺样上皮分化部分有较弱的CEA表达，与国内张容轩[3]的报道相似，属恶性间皮瘤的少数较特殊情况。
, 百拇医药
恶性间皮瘤系间叶起源的恶性肿瘤，波形蛋白系间叶组织的标记。1982年Wu等[4]报告了培养的间皮细胞可产生大量的波形蛋白，被认为是间皮细胞的特征。间皮细胞出现恶性转化以后仍保留这一特征。本组病例以纤维型及混合型居多，波形蛋白阳性率分别为72%(8/11)和84%(11/13)。国内张容轩[3]报道的纤维型50%(3/6)和混合型75%(3/4)的结果与此次相近，但与散在病例报告的100%(9/9和3/3)的阳性率不尽吻合[5]。但我们认为可由此反映间皮瘤的间叶起源。
Battifora[1]和Holden[6]于1984年报道恶性间皮瘤细胞可以产生多种角蛋白。本实验结果提示：角蛋白总阳性率为43%(13/30)，其中以上皮型出现的比例最高，为66%(4/6)；混合型次之，为54%(7/13)。符合角蛋白为上皮细胞标志的特征。本组角蛋白阳性率为43%，低于文献报道的78%和100%[3，5]，可能与此次材料中上皮型间皮瘤所占比例较少有关。
, 百拇医药
同时应用3种抗体对恶性间皮瘤进行鉴别诊断可以剔除癌的混杂，同时表达角蛋白和波形蛋白的肿瘤还有肾细胞癌和滑膜肉瘤，但由其发病部位即可与间皮瘤区分。因此，同时采用3种抗体进行免疫组化染色，在光镜下即可基本确立恶性间皮瘤的诊断。
图1 恶性间皮瘤角蛋白免疫组化染色阳性 SP×400
Fig 1 Malignant mesothelioma,positive immunohisto-
chemical stain for keratin SP×400
图2 恶性间皮瘤波形蛋白免疫组化染色阳性 SP×400
, 百拇医药
Fig 2 Malignant mesothelioma,positive immunohisto-
chemical stain for vimentin SP×400
本课题受国家自然科学基金和美国中华医学基金会资助
参考文献
1 Battifora H,kopinski MI.Distinction of mesothelioma and reactive mesothelial cells from adenocarcinoma.Lab Invest,1984,50:4～5.
2 Wang NS,Huang SN,Gold P.Absence of carcinoembryonic antigen-like material in mesothelioma.Cancer,1979,44:973～943.
, http://www.100md.com
3 张容轩.24例胸膜间皮瘤与肺腺癌免疫组化研究.肿瘤，1994，14：260～264.
4 Wu YJ,Parker CT,Binder NE,et al.The mesothelial keratins:a new family of cytoskeletal proteins identified in cultured mesothelial cells and nonkeratinizing epithelia.Cell,1982,31:693～703.
5 杨德忠，吴霞，邓永红.恶性弥漫性间皮瘤的光镜，电镜，组化及免疫组化研究.实用内科杂志，1992，12：182～183.
6 Holden J,Churg A.Immunohistochemical staining for keratin and carcinoembryonic antigen in the diagnosis of malignant mesothelioma.Am J Surg Pathol,1984,8:277～279.
(收稿：1997-08-19 修回：1998-01-05), 百拇医药
单位：610041 成都，华西医科大学公共卫生学院(袁素波现在军事医学科学院毒物药物研究所工作)
关键词：恶性间皮瘤；癌胚抗原；角蛋白；波形蛋白
中华劳动卫生职业病杂志980508 【摘要】 目的 借助免疫组化技术，在光镜下确诊恶性间皮瘤。 方法 运用胰蛋白酶消化SP法及商品化的癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、角蛋白(keratin)和波形蛋白(vimentin)，对30例恶性间皮瘤组织进行了免疫组化研究。 结果 (1)恶性间皮瘤组织基本不表达癌胚抗原，藉此可以剔除癌的混杂。(2)恶性间皮瘤具有既表达细胞角蛋白(阳性率43%)，又表达波形蛋白(阳性率70%)的免疫组化特征，藉此可以与其它间叶来源的恶性肿瘤相区别。 结论 同时运用3种抗体进行免疫组化染色，可为在光镜下确诊恶性间皮瘤提供可靠的诊断依据。
, 百拇医药
Immunohistochemical diagnosis of 30 malignant mesothelioma cases Yuan Subo,Yang Qing,Wang Zhiming.Public Hygiene College,West China University of Medical Sciences,Chengdu 610041
【Abstract】 Objective To establish diagnosis of malignant mesothelioma under light microscope with the aid of immunohistochemical staintechnique.Methods Immunohistochemical study in 30 patients with malignant mesothelioma was carried out by using streptavidin-peroxidase(SP) method and carcinoembryonic antigen(CEA),keratin and vimentin.Results In general,malignant mesothelioma was negative in carcinoembryonic antigen.Thus we could distinguish malignant mesothelioma from carcinomas.Malignant mesothelioma cells gave positive expression in vimentin and keratin.The positive rate was 70% and 43% respectively.By this observation,we could demonstrate malignant mesothelioma in mesenchymal neoplasm.Conclusion The immunohistochemical stain for carcinoembryonic antigen(CEA),cytokeratin(CK) and vimentin might provide the useful diagnostic basis for malignant mesothelioma under light microscope.
, 百拇医药
【Key words】 Malignant mesothelioma Carcinoembryonic antigen Keratin Vimentin
恶性间皮瘤在普通人群中极为罕发，为一般的临床及病理医师所不熟悉，误诊较多;因其组织发生学不清、结构复杂，光镜诊断常感困难。在电镜技术尚未作为常规诊断手段时，在职业肿瘤领域有必要利用免疫组化染色技术,进行恶性间皮瘤与肺癌、转移性癌及其它间叶源性恶性肿瘤的鉴别，以提高诊断的准确性。
材料与方法
1.标本的来源与收集：恶性间皮瘤蜡块标本主要从四川、河北、重庆、新疆、山西、青海等地搜集，共34例(所有标本均经各搜集单位病理确诊为恶性间皮瘤，后经华西医科大学病理科复核证实)。病例诊断年限跨度36年，其中4例为石棉作业工人、11例是矿山居住者，共计有石棉接触史病例15例，占病例总数的44%(15/34)。
, 百拇医药
2.所收集的标本首先切片，作HE染色，对组织细胞形态作初步了解。因标本来源广泛，处理、保存方法难尽一致，故对组织形态上显示瘤组织过少、组织处理不当、细胞坏死的蜡块一律淘汰。得到组织形态保存完整而又具备一定细胞数量的蜡块30例，其病理组织学构成为：上皮型6例，占20%；纤维型11例，占37%；混合型13例，占43%。
试剂：免疫组化抗体来源及工作浓度见表1。
表1 免疫组化抗体来源和稀释度
Table 1 Dilution and source of antibodies 抗 体
Antibody
种 类
Kind
, 百拇医药
稀释度
Dilution
来 源
Source
角蛋白
Keratin
多抗
Polyclonal
1∶500
SYMED
癌胚抗原
CEA
单抗
, 百拇医药
Monoclonal
1∶50
SYMED
波形蛋白
Vimentin
单抗
Monoclonal
1∶50
SYMED
S-P试剂盒
S-P kit
B-Ⅱ抗
, 百拇医药 Antibody SP
1∶500
1∶500
DAKO
DAKO
3.实验方法：按常规免疫组化SP法进行，肿瘤组织作4 μm厚的石蜡切片，常规脱蜡水化，3%过氧化氢浸泡10分钟以阻断内源性过氧化物酶，充分水洗；0.05%的胰蛋白酶消化(37℃)30分钟，TBS洗；继之以5%非免疫小牛血清封闭30分钟，再依次加入一抗,4℃湿盒过夜;生物素化二抗及SP复合物按试剂盒说明加入；最后以DAB显色，苏木素复染，常规脱水透明，树胶封固。实验以TBS代替一抗作为阴性对照、以已知p53免疫组化阳性的乳腺癌标本作为阳性对照。以胞浆出现棕黄色着色为阳性。结 果
癌胚抗原(CEA)、角蛋白(keratin)及波形蛋白(vimentin)免疫组化染色观察结果见表2。
, 百拇医药
1.抗CEA抗体染色：由表2可见，本组30例恶性间皮瘤中，除2例混合型的腺样上皮部分表达较弱的CEA外，其余各型细胞CEA染色均呈阴性。
表2 恶性间皮瘤免疫组化染色结果
Table 2 Results of immunohistochemical stain
for mesotheliomas 类 型
Type
例 数
n
角蛋白
Keratin
波形蛋白
, 百拇医药
Vimentin
癌胚抗原
CEA
上皮型
Epithelial
6
4(66%)
2(33%)
0(0%)
纤维型
Fibrous
11
2(18%)
, 百拇医药
8(72%)
0(0%)
混合型
Mixed
13
7(54%)
11(84%)
2(15%)
合 计
Total
30
13(43%)
21(70%)
, http://www.100md.com
2(6%)
2.抗细胞角蛋白抗体染色：30例恶性间皮瘤中角蛋白阳性13例，占43%。其中,以上皮型阳性率最高，为66%(4/6)；纤维型最低，为18%(2/11)；混合型居中，54%(7/13)。各型阳性率之间的差异经χ2检验，无显著意义。反应阳性物均匀地分布在细胞浆内(图1)。
3.抗波形蛋白抗体染色：30例恶性间皮瘤中，21例抗波形蛋白抗体染色呈阳性反应，阳性染色分布在细胞浆内(图2)。其中,以混合型阳性率最高，为84%(11/13)；纤维型阳性率次之，为72%(8/11)；上皮型最低，为33%(2/6)。组织学类型之间的阳性率比较，差异无显著性。讨 论
转移至胸膜的肺癌或其它器官的转移癌是导致恶性间皮瘤误诊的主要肿瘤。大量的研究已经证实：癌的特征是CEA染色通常呈强阳性[1，2]。恶性间皮瘤CEA染色基本上为阴性，藉此可以剔除癌的混杂。恶性间皮瘤的腺样分化部分有时可有较弱的CEA表达，本组2例混合型病例的腺样上皮分化部分有较弱的CEA表达，与国内张容轩[3]的报道相似，属恶性间皮瘤的少数较特殊情况。
, 百拇医药
恶性间皮瘤系间叶起源的恶性肿瘤，波形蛋白系间叶组织的标记。1982年Wu等[4]报告了培养的间皮细胞可产生大量的波形蛋白，被认为是间皮细胞的特征。间皮细胞出现恶性转化以后仍保留这一特征。本组病例以纤维型及混合型居多，波形蛋白阳性率分别为72%(8/11)和84%(11/13)。国内张容轩[3]报道的纤维型50%(3/6)和混合型75%(3/4)的结果与此次相近，但与散在病例报告的100%(9/9和3/3)的阳性率不尽吻合[5]。但我们认为可由此反映间皮瘤的间叶起源。
Battifora[1]和Holden[6]于1984年报道恶性间皮瘤细胞可以产生多种角蛋白。本实验结果提示：角蛋白总阳性率为43%(13/30)，其中以上皮型出现的比例最高，为66%(4/6)；混合型次之，为54%(7/13)。符合角蛋白为上皮细胞标志的特征。本组角蛋白阳性率为43%，低于文献报道的78%和100%[3，5]，可能与此次材料中上皮型间皮瘤所占比例较少有关。
, 百拇医药
同时应用3种抗体对恶性间皮瘤进行鉴别诊断可以剔除癌的混杂，同时表达角蛋白和波形蛋白的肿瘤还有肾细胞癌和滑膜肉瘤，但由其发病部位即可与间皮瘤区分。因此，同时采用3种抗体进行免疫组化染色，在光镜下即可基本确立恶性间皮瘤的诊断。
图1 恶性间皮瘤角蛋白免疫组化染色阳性 SP×400
Fig 1 Malignant mesothelioma,positive immunohisto-
chemical stain for keratin SP×400
图2 恶性间皮瘤波形蛋白免疫组化染色阳性 SP×400
, 百拇医药
Fig 2 Malignant mesothelioma,positive immunohisto-
chemical stain for vimentin SP×400
本课题受国家自然科学基金和美国中华医学基金会资助
参考文献
1 Battifora H,kopinski MI.Distinction of mesothelioma and reactive mesothelial cells from adenocarcinoma.Lab Invest,1984,50:4～5.
2 Wang NS,Huang SN,Gold P.Absence of carcinoembryonic antigen-like material in mesothelioma.Cancer,1979,44:973～943.
, http://www.100md.com
3 张容轩.24例胸膜间皮瘤与肺腺癌免疫组化研究.肿瘤，1994，14：260～264.
4 Wu YJ,Parker CT,Binder NE,et al.The mesothelial keratins:a new family of cytoskeletal proteins identified in cultured mesothelial cells and nonkeratinizing epithelia.Cell,1982,31:693～703.
5 杨德忠，吴霞，邓永红.恶性弥漫性间皮瘤的光镜，电镜，组化及免疫组化研究.实用内科杂志，1992，12：182～183.
6 Holden J,Churg A.Immunohistochemical staining for keratin and carcinoembryonic antigen in the diagnosis of malignant mesothelioma.Am J Surg Pathol,1984,8:277～279.
(收稿：1997-08-19 修回：1998-01-05), 百拇医药