淋巴细胞胞质分裂阻滞微核法与常规法的对比
作者:郑巧玲 李来玉 叶华清 梁丽燕
单位:510310 广州,广东省职业病防治院
关键词:
淋巴细胞胞质分裂阻滞微核法与常规法的对比
人外周血淋巴细胞微核作为检测人群遗传毒性影响的指标,在国内应用较多。在射线接触中胞质分裂阻滞微核试验(CB)法已有成功的应用,但对于化学因素,CB法能否提高这一指标的敏感性和稳定性,则报道不多。为此,我们进行了本研究。
一、材料与方法
1.血样:取自3例健康男性,年龄20~30岁,6个月内无射线、化学毒物和农药等接触史。
2.诱变剂:(1)丝裂霉素C(MMC):日本,Kyowa Hakko Kogyo Co,Ltd(批号:329AFG)。(2)秋水仙素:Fluka AG(批号:242746783)。(3)60Co γ射线:剂量率为0.5 Gy/min。
, 百拇医药
3.CB法和常规法(微量全血培养法)[1,2]:体外试验的条件为丝裂霉毒C于培养10小时后加入,剂量为0、0.003 12、0.006 25、0.012 50和0.025 00mg/L;秋水仙素于培养24小时后加入,剂量为0、0.000 01、0.000 10和0.001 00 mg/L;γ射线一次照射,剂量为0、0.10、0.25、0.50和1.00 Gy,照后血样立即于37℃恒温放置2小时,然后分装培养。上述试验CB法均于培养36小时后加入细胞松弛素B(cyt-B),终浓度为6mg/L,60小时收获细胞。常规法培养72小时收获。
4.统计学处理:按白玉书[3]提出的方法进行。
二、结果
1.丝裂霉素C诱发的微核效应的检测结果:CB法的微核细胞率数值比常规法大(表1),但遗传毒性的最低敏感剂量两法相同;稳定性试验(5次)结果:丝裂霉素C剂量均为0.02500 mg/L,CB法(每次观察3000个细胞)变异系数为11.6%,比常规法(每次观察6000个细胞,43.1%)小。
, 百拇医药
表1 MMC诱发微核效应两种方法的结果△(±S)
剂量
(mg/L)
微核细胞率(每1千个细胞)
CB法
常规法
0
, http://www.100md.com
5.67±0.85
2.50±1.02
0.00312
6.50±0.98
3.15±1.61
0.00625
9.33±1.12
4.17±1.73
0.01250
13.33±1.20**
5.20±2.08**
, 百拇医药
0.02500
20.67±2.31**
8.50±3.38**
与对照组(0组)比较,**P<0.01;△:每个剂量组观察的细胞数:CB法3 000个,常规法6 000个
2.秋水仙素诱发的微核效应的检测结果:CB法的微核细胞率数值比常规法大,但遗传毒性的最低敏感剂量两法相同(表2)。
表2 秋水仙素诱发微核效应两种方法的结果△(±S)
, 百拇医药
剂量(mg/L)
微核细胞率(每1千个细胞)
CB法
常规法
0
3.00±0.51
1.60±0.65
0.00001
2.00±0.42
1.80±0.61
0.00010
2.50±0.46
, 百拇医药
1.90±0.74
0.00100
6.50±0.72**
3.80±1.58**
与对照组(0组)比较,**P<0.01;△:每个剂量组观察的细胞数:CB法3 000个,常规法6 000个
3.γ射线诱发的微核效应两种方法的测定结果:CB法的微核细胞率数值比常规法大,且遗传毒性的最低敏感剂量CB法比常规法下降(表3)。
表3 γ射线诱发微核效应两种方法的结果△(±S)
, 百拇医药
剂量
(Gy)
微核细胞率(每1千个细胞)
CB法
常规法
0
2.33±0.31
1.67±0.41
0.10
5.00±0.46*
3.00±0.60
0.25
, 百拇医药
9.67±0.82**
3.67±0.21*
0.50
13.33±0.47**
7.67±0.89**
1.00
31.67±2.80**
12.00±0.82**
与对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;△:每个剂量组观察的细胞数:CB法3 000个,常规法6 000个
, 百拇医药
三、讨论
1.CB法的敏感性:由于CB法只统计双核细胞的微核,从细胞分裂的角度分析,CB法的1个双核细胞相当于常规法的两个转化细胞,即计数微核细胞率时,CB法分母比常规法少1倍,微核细胞率应增加1倍。故CB法微核细胞率的数值增加并不一定是敏感性提高的表现,如检出诱变因子遗传毒性的最低敏感剂量下降,且有剂量-效应关系时,则可认为是敏感性提高。本次研究中,对γ射线CB法表现出敏感性提高,值得健康监护工作中应用;而对化学因子丝裂霉素C和秋水仙素,CB法并不比常规法敏感,这与倪祖尧[4]的报道相同。因此,使用CB法监测化学毒物不一定优于常规法。
2.CB法的稳定性:丝裂霉素C诱发微核的稳定性试验结果显示,CB法比常规法变异系数小得多,其稳定性有所提高。对其他毒物则有待进一步研究。
参 考 文 献
, http://www.100md.com [1] 李来玉,郑巧玲,叶华清.非吸烟者外周血微核正常范围参考值测定.职业医学,1993,20:298-299.
[2] 李来玉,梁丽燕,郑巧玲.用培养法测定广州地区120例健康成人外周血的微核正常值.职业医学,1992,19:219-221.
[3] 白玉书.淋巴细胞微核估算受照剂量方法的标准化问题.中华放射医学与防护杂志,1991,11:133-135.
[4] 倪祖尧.中国仓鼠肺细胞细胞周期阻滞微核试验与常规微核试验的对照研究.癌变.畸变.突变,1993,5(6):17-19.
(收稿:1998-02-04 修回:1998-04-02), 百拇医药
单位:510310 广州,广东省职业病防治院
关键词:
淋巴细胞胞质分裂阻滞微核法与常规法的对比
人外周血淋巴细胞微核作为检测人群遗传毒性影响的指标,在国内应用较多。在射线接触中胞质分裂阻滞微核试验(CB)法已有成功的应用,但对于化学因素,CB法能否提高这一指标的敏感性和稳定性,则报道不多。为此,我们进行了本研究。
一、材料与方法
1.血样:取自3例健康男性,年龄20~30岁,6个月内无射线、化学毒物和农药等接触史。
2.诱变剂:(1)丝裂霉素C(MMC):日本,Kyowa Hakko Kogyo Co,Ltd(批号:329AFG)。(2)秋水仙素:Fluka AG(批号:242746783)。(3)60Co γ射线:剂量率为0.5 Gy/min。
, 百拇医药
3.CB法和常规法(微量全血培养法)[1,2]:体外试验的条件为丝裂霉毒C于培养10小时后加入,剂量为0、0.003 12、0.006 25、0.012 50和0.025 00mg/L;秋水仙素于培养24小时后加入,剂量为0、0.000 01、0.000 10和0.001 00 mg/L;γ射线一次照射,剂量为0、0.10、0.25、0.50和1.00 Gy,照后血样立即于37℃恒温放置2小时,然后分装培养。上述试验CB法均于培养36小时后加入细胞松弛素B(cyt-B),终浓度为6mg/L,60小时收获细胞。常规法培养72小时收获。
4.统计学处理:按白玉书[3]提出的方法进行。
二、结果
1.丝裂霉素C诱发的微核效应的检测结果:CB法的微核细胞率数值比常规法大(表1),但遗传毒性的最低敏感剂量两法相同;稳定性试验(5次)结果:丝裂霉素C剂量均为0.02500 mg/L,CB法(每次观察3000个细胞)变异系数为11.6%,比常规法(每次观察6000个细胞,43.1%)小。
, 百拇医药
表1 MMC诱发微核效应两种方法的结果△(±S)
剂量
(mg/L)
微核细胞率(每1千个细胞)
CB法
常规法
0
, http://www.100md.com
5.67±0.85
2.50±1.02
0.00312
6.50±0.98
3.15±1.61
0.00625
9.33±1.12
4.17±1.73
0.01250
13.33±1.20**
5.20±2.08**
, 百拇医药
0.02500
20.67±2.31**
8.50±3.38**
与对照组(0组)比较,**P<0.01;△:每个剂量组观察的细胞数:CB法3 000个,常规法6 000个
2.秋水仙素诱发的微核效应的检测结果:CB法的微核细胞率数值比常规法大,但遗传毒性的最低敏感剂量两法相同(表2)。
表2 秋水仙素诱发微核效应两种方法的结果△(±S)
, 百拇医药
剂量(mg/L)
微核细胞率(每1千个细胞)
CB法
常规法
0
3.00±0.51
1.60±0.65
0.00001
2.00±0.42
1.80±0.61
0.00010
2.50±0.46
, 百拇医药
1.90±0.74
0.00100
6.50±0.72**
3.80±1.58**
与对照组(0组)比较,**P<0.01;△:每个剂量组观察的细胞数:CB法3 000个,常规法6 000个
3.γ射线诱发的微核效应两种方法的测定结果:CB法的微核细胞率数值比常规法大,且遗传毒性的最低敏感剂量CB法比常规法下降(表3)。
表3 γ射线诱发微核效应两种方法的结果△(±S)
, 百拇医药
剂量
(Gy)
微核细胞率(每1千个细胞)
CB法
常规法
0
2.33±0.31
1.67±0.41
0.10
5.00±0.46*
3.00±0.60
0.25
, 百拇医药
9.67±0.82**
3.67±0.21*
0.50
13.33±0.47**
7.67±0.89**
1.00
31.67±2.80**
12.00±0.82**
与对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;△:每个剂量组观察的细胞数:CB法3 000个,常规法6 000个
, 百拇医药
三、讨论
1.CB法的敏感性:由于CB法只统计双核细胞的微核,从细胞分裂的角度分析,CB法的1个双核细胞相当于常规法的两个转化细胞,即计数微核细胞率时,CB法分母比常规法少1倍,微核细胞率应增加1倍。故CB法微核细胞率的数值增加并不一定是敏感性提高的表现,如检出诱变因子遗传毒性的最低敏感剂量下降,且有剂量-效应关系时,则可认为是敏感性提高。本次研究中,对γ射线CB法表现出敏感性提高,值得健康监护工作中应用;而对化学因子丝裂霉素C和秋水仙素,CB法并不比常规法敏感,这与倪祖尧[4]的报道相同。因此,使用CB法监测化学毒物不一定优于常规法。
2.CB法的稳定性:丝裂霉素C诱发微核的稳定性试验结果显示,CB法比常规法变异系数小得多,其稳定性有所提高。对其他毒物则有待进一步研究。
参 考 文 献
, http://www.100md.com [1] 李来玉,郑巧玲,叶华清.非吸烟者外周血微核正常范围参考值测定.职业医学,1993,20:298-299.
[2] 李来玉,梁丽燕,郑巧玲.用培养法测定广州地区120例健康成人外周血的微核正常值.职业医学,1992,19:219-221.
[3] 白玉书.淋巴细胞微核估算受照剂量方法的标准化问题.中华放射医学与防护杂志,1991,11:133-135.
[4] 倪祖尧.中国仓鼠肺细胞细胞周期阻滞微核试验与常规微核试验的对照研究.癌变.畸变.突变,1993,5(6):17-19.
(收稿:1998-02-04 修回:1998-04-02), 百拇医药