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编号:10259922
菌毒净复方消毒剂性能的实验观察
http://www.100md.com 《中国消毒学杂志》 1999年第3期
     作者:高东旗 韩艳淑 陈素良 邵新玺 关文英

    单位:(高东旗 邵新玺)北京军区军事医学研究所,石家庄 050081;(韩艳淑 陈素良 关文英)河北省卫生防疫站

    关键词:含甲醛复方消毒剂;杀菌作用;金黄色葡萄球菌;大肠杆菌;枯草杆菌黑色变种;腐蚀性;毒性

    中国消毒学杂志990303 提要 菌毒净复方消毒剂主要成分为甲醛与苯扎溴铵。悬液试验表明,以其1%(原液100倍稀释)水溶液作用3min对金黄色葡萄球菌的杀灭率达99.98%;10%水溶液作用3min对大肠杆菌的杀灭率为99.99%;以原液作用8h,对枯草杆菌黑色变种芽胞的杀灭率100%。急性毒性试验表明,其原液对小白鼠属实际无毒物,对家兔皮肤和眼睛均属无刺激性。原液对所测4种金属均基本无腐蚀作用。

    EXPERIMENTAL OBSERVATION ON PROPERTY OF JUNDUJING COMPOUND DISINFECTANT
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    Gao Dongqi Shao Xinxi

    Institute of Military Medicine, Beijing Military Area, Shijiazhuang 050081

    Han Yanshu Chen Suliang Guan Wenying

    Hebei Provincial Sanitary and Anti-epidemic Station

    Abstract

    The main ingredients of Jundujing Compound Disinfectant are formaldehyde (1.5%) and bromogeramine (0.4%). The results of suspension test indicated that its 1% solution formed by 1∶100 dilution of the stock solution with water with a 3 min contact time and its 10% solution with a 3 min contact time killed more than 99.99% of Staphylococcus aureus and Escherichia coli respectively; its stock solution with a 8 h contact time killed 100% of spores of Bacillus subtilis var. niger. Scrubbing hand and arm with its 10% solution for 2 min could reduce the natural bacteria on skin surface by 90.78%.
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    Its stock solution was essentially not corrosive to stainless steel, carbon steel, copper and aluminum. Acute toxicity test indicated that the LD50of its stock solution in mice was >10 000 mg/kg, so it belongs to actually nontoxic substances. The average index of eye irritation in rabbit was 2.5 and the cumulative score of skin irritative reaction was 0, so it belongs to nonirritative substances.

    Key words formaldehyde-containing compound disinfectant bactericidal action Staphylococcus aureus Escherichia coli Bacillus subtilis var. niger corrosiveness toxicity
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    以1.5%甲醛和0.4%苯扎溴铵(新洁尔灭)为主,配以增效剂,制成菌毒净复方消毒剂。在实验室,对其杀菌作用、毒性、刺激性等性能进行了试验观察。现将结果报告如下。

    1方法

    1.1菌悬液的制备

    试验菌为金黄色葡萄球菌(ATCC6538)、大肠杆菌(8099)、枯草杆菌黑色变种(ATCC 9372)芽胞。用含1%蛋白胨的磷酸盐缓冲液制成含菌量为107~108cfu/ml的菌悬液。

    1.2中和剂筛选试验

    试验菌为金黄色葡萄球菌和枯草杆菌黑色变种芽胞。试验分组为:①消毒剂+菌液;②(消毒剂+菌液)+中和剂;③中和剂+菌液;④(消毒剂+中和剂)+菌液;⑤正常菌对照;⑥未接种菌培养基对照。试验结果,当第6组不长菌,第3、4、5组组间菌数相差不超过10%,第2组长菌且菌数≥100cfu/ml,第1组不长菌或菌数远少于第2组时,表明所用中和剂及其使用浓度适宜。
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    1.3杀菌试验

    将盛有菌悬液与4.5ml消毒液(对照为磷酸盐缓冲液)的试管分别置于20℃水浴中预热。取菌液0.5ml加入消毒液中,混匀。继续置20℃水浴中作用至预定时间,取0.5ml菌药混合液,加入盛有4.5ml中和剂的试管中,混匀。中和作用10min,作活菌计数(37℃,培养48h),计算杀灭率。观察有机物影响时,向菌悬液中添加10%小牛血清。

    1.4皮肤表面消毒试验

    于20名健康人一前臂内侧,用10%菌毒净复方消毒剂水溶液擦拭皮肤后作用2min。以另一臂内侧为对照,分别用无菌棉拭蘸取中和剂溶液在5cm×5cm规格板内涂抹采样。将棉拭头剪入装有5ml中和剂溶液的试管中,敲打试管80次以洗脱棉拭上所采得的自然菌。取0.5ml洗脱液(或其稀释液)进行普通营养琼脂倾注培养。于37℃培养48h,计数菌落,计算对自然菌的灭除率。
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    1.5稳定性试验

    将装有该消毒剂的原包装玻璃瓶于54~56℃存放14d。于放置前、后,分别测定该消毒剂对金黄色葡萄球菌的杀灭效果。

    1.6金属腐蚀性试验

    按照“消毒技术规范”规定的方法〔1〕,用菌毒净复方消毒剂原液浸泡铜、碳钢、不锈钢和铝片。计算腐蚀速率。同时,以水浸泡作对比。

    1.7毒性试验

    1.7.1急性经口毒性试验 选用体重18~22g的昆明种小白鼠50只,随机分成5组,每组10只,雌雄各半。按霍恩氏法,设受试物为五个剂量(mg/kg体重)组:10000、4640、2150、1000、464,分别给动物一次性灌胃,观察7d。计算LD50值。
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    1.7.2家兔急性眼刺激实验 选用体重2~3kg的姶蠖淄只。于试验前24h使其适应实验室环境。试验时,将受试物0.1ml滴于一侧眼睛内,对侧眼睛滴蒸馏水作对照。分别于滴药后6、24、48、72h和4、7d观察双侧眼睛反应情况。

    1.7.3家兔急性皮肤刺激试验 选用体重2~3kg的大耳白兔4只。于试验前24h用脱毛剂脱去脊柱两侧背毛,分别暴露2.5cm×2.5cm皮肤。试验时,将菌毒净原液0.5ml涂于一侧皮肤上,对侧皮肤作对照。染毒24h后用水冲洗,分别于洗后1、24、48h观察双侧皮肤反应情况。

    2结果

    2.1中和剂试验结果

    经试验,作用于金黄色葡萄球菌的10%菌毒净溶液(原液10倍稀释)用含0.3%卵磷脂、0.5%甘氨酸和1.0%吐温80的磷酸盐缓冲液中和;作用于枯草杆菌黑色变种芽胞的菌毒净原液用含0.3%卵磷脂、3.0%甘氨酸和3.0%吐温80的磷酸盐缓冲液中和,均达到所定要求(表1)。
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    表1 菌毒净中和试验结果

    Table1 Results of neutralization test for Jundujing 级别

    Group

    平均菌数

    A verage bacterial count(cfu/ml)

    S.aureus

    枯草杆菌黑色变种牙胞

    Spores of B.subtillis var.niger

    消毒剂+菌悬液

    Disinfectant+bacterial
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    234

    12

    (消毒剂+菌悬液)+中和剂

    (Disinfectant+bacterial suspension)+neutralizer

    10940

    2050000

    中和剂+菌悬液

    Neutralizer+bacterial suspension

    5120000

    4960000

    (消毒剂+中和剂)+菌悬液
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    (Disinfectant+neutralizer)+bacterial suspension

    4910000

    4596000

    正常菌对照

    Normal bacterial control

    4992000

    4686000

    未接种菌培养基对照

    Uninoculated culture medium control

    0
, 百拇医药
    0

    注: 试验温度为20~21℃。金黄色葡萄球菌以10%菌毒净复方水溶液作用1min,枯草杆菌黑色变种芽胞以菌毒净复方原液作用10min。加中和剂后中和作用10min。结果为5次试验平均值。 Note:The temperature was 20~21℃. S. aureus was exposed to 10% water solution of Jundujing Compound Disinfectant for 1 min and spores of B. subtilis var. niger were exposed to stock solution of Jundujing Compound Disinfectant for 10 min. The contact time after adding neutralizer was 10 min. The results were means of 5 tests.

    2.2 杀菌效果
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    试验表明,1%菌毒净复方消毒剂水溶液对金黄色葡萄球菌作用3min,杀灭率达99.9%以上,10%的该液对大肠杆菌作用3min的杀灭率为99.99%。(表2)

    表2 菌毒净复方消毒剂对细菌繁殖体的杀灭作用

    Table 2 The killing effect of Jundujing Compound Disinfectant on vegetative form of bacteria 药物浓度

    Concentration of disinfectant(%)

    对照组菌数

    Bacterial count of control group(cfu/ml)

    作用不同时间(min)的杀灭率(%)
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    Killing rate(%)after exposure for different periods of time(min)

    3

    4

    10

    20

    金黄色葡萄球菌

    S.aureus

    10.0

    8000000

    100.00

    100.00

, 百拇医药     100.00

    100.00

    5.0

    7400000

    99.99

    100.00

    100.00

    100.00

    1.0

    5900000

    99.98

    99.99

    99.99
, 百拇医药
    99.99

    大肠杆菌

    E.coli

    10.0

    5300000

    99.99

    99.99

    99.99

    99.99

    5.0

    5300000

    95.64

    97.95
, 百拇医药
    98.21

    98.63

    3.3

    5300000

    35.22

    39.41

    53.55

    95.57

    注:试验温度为20~21℃。结果为5次试验平均值。Note: The temperature was 20~21℃. The results were means of 5 tests.

    对枯草杆菌黑色变种芽胞,菌毒净复方消毒剂原液作用6h和8h杀灭率分别为99.99%和100%;其75%浓度作用8 h杀灭率为99.99%。(表3)。
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    表3菌毒净复方消毒剂对枯草杆菌黑色变种芽胞的杀灭作用

    Table 3Killing effect of Jundujing Compound Disinfectant on spores ofB. subtilis var. niger Concentration of disinfectant(%)

    Killing rate(%)after exposure for different periods of time(h)

    2

    4

    6

    8

    100(原液)
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    77.29

    98.44

    99.99

    100.00

    75

    78.12

    94.89

    99.87

    99.99

    50

    70.79

    90.82

    98.17
, 百拇医药
    99.85

    注:试验温度为20~21℃。对照组平均菌数为4900000cfu/ml。结果为5次试验平均值。

    Note:The temperature was 20~21℃. The average bacterial count of control group was 4 900 000cfu/ml. The results were means of 5 tests.

    对20人皮肤表面自然菌试验表明,10%菌毒净复方消毒剂水溶液对皮肤作用2min,可使自然菌由3711cfu/cm2下降到342cfu/cm2,平均灭除率为90.78%。

    2.3有机物对杀菌效果的影响

    试验表明,加10%小牛血清的菌悬液,以10%菌毒净复方消毒剂水溶液作用3min,对金黄色葡萄球菌的杀灭率为99.99%,不加小牛血清时杀灭率为100%(表4)。
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    表4 有机物对菌毒净复方消毒剂杀灭金黄色葡萄球菌作用的影响

    Table 4 Influence of organic substance on efficacy of Jundujing Compound 奃isinfectant in killing S. aureus 小牛血清含量

    Calf serum content(%)

    对照组菌数

    Bacterial count of control group(cfu/ml)

    作用不同时间(min)的杀灭率(%)

    Killing rate(%)after exposure for different periods of time(min)
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    3

    5

    10

    20

    0

    8000000

    100.00

    100.000

    100.000

    100.000

    10

    7900000

    99.993
, 百拇医药
    99.999

    99.999

    99.999

    注: 试验温度为20~21℃。消毒液均为10%菌毒净复方水溶液。结果为5次试验平均值。

    Table: The temperature was 20~21℃. The disinfectant was 10% water solution of Jundujing Compound Disinfectant. The results were means of 5 tests.

    2.4稳定性

    菌毒净复方消毒剂在54~56℃条件下放置14d后,其10%水溶液对悬液中金黄色葡萄球菌作用3min的杀灭率为99.996%,作用20min方达100%。
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    2.5 对金属的腐蚀作用

    测定结果表明,菌毒净复方消毒剂原液对不锈钢、铝、铜、碳钢腐蚀速率均<0.01mm/a,属基本无腐蚀作用(表5)。

    表5菌毒净复方消毒剂原液对金属的腐蚀作用

    Table 5 The corrosive effect of stock solution of Jundujing Compond Disinfectant on metals 金属

    Metal

    腐蚀速率(mm/a)

    Rate of corrosion

    对照组

, 百拇医药     Control group

    Experimental group

    不锈钢Stainless steel

    0.00064

    0.00043

    铝Aluminum

    0.00000

    0.00077

    铜Copper

    0.00586

    0.00838

    碳钢Carbon steel
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    0.06899

    0.00414

    2.6毒性

    急性毒性试验表明,菌毒净复方消毒剂原液对小白鼠LD50>10000mg/kg,属实际无毒物。对家兔急性眼刺激积分指数(最高数)为4,眼刺激平均指数48h后为2.5,根据《消毒技术规范》(1991)属无刺激性。对家兔皮肤刺激反应平均积分为0,属无刺激性。

    3 讨论

    甲醛为高效消毒剂。由于其有强烈的刺激气味,对人眼、咽喉与皮肤有刺激,可造成女性月经不调等等〔2〕,应用范围受到一定限制。用其液体浸泡消毒与灭菌需浓度较高,作用时间较长。杀灭细菌芽胞,需用8%甲醛水溶液作用6h,或2%浓度作用32h。为降低其使用浓度,减低副作用,经试验筛选甲醛的杀菌增效剂,表明苯扎溴铵对甲醛杀芽胞的增效倍数可达2.9倍〔3〕,含2%甲醛和0.4%苯扎溴铵的碱性水溶液(pH10.4)在50℃条件下,作用10min即可将染于布片上的枯草杆菌黑色变种芽胞完全杀灭〔4〕。据此研制出菌毒净复方消毒剂。
, 百拇医药
    试验结果表明,菌毒净复方消毒剂的毒性较低,对所测试金属均基本无腐蚀作用。其20℃条件下,原液作用8h对细菌芽胞杀灭率为100%,其10%水溶液作用3min可杀灭大肠杆菌99.99%,擦试后作用2min对皮肤自然菌灭除率为90.78%。

    参考文献

    〔1〕王云峰,王有森,白竞玉,等.消毒技术规范.北京:卫生部,1991:30~100.

    〔2〕韩友圻.甲醛毒性研究进展.消毒与灭菌,1989;6(3):169.

    〔3〕高东旗,刘育京.新洁尔灭与理化因子协同杀灭细菌芽胞作用的研究.中国消毒学杂志,1994;11(4):206.

    〔4〕高东旗,刘育京.新洁尔灭等四因子复合杀芽胞方法的研究.中国消毒学杂志,1995;12(2):71.

    收稿日期:1998-09-24 修回日期:1998-12-10, 百拇医药