气功处理利福霉素产生菌机制的探讨
作者：杨叶东 陈佳明
单位：312500浙江新昌制药厂 杨叶东
关键词：
气功与科学990811
利福霉素是Sensi.P等人于1957年首次从地中海诺卡氏菌发酵液中分离出的一类抗生素，其最显著的生物活性是对革兰氏阴性细菌和分枝细菌有抑制作用，其半合成产物之一的利福平是治疗结核病的口服广谱抗生素。
气功在医疗保健、植物生长等方面的杰出作用已有很多报导，华北制药厂还应用智能气功处理洁霉素菌种提高了产量。我们用智能气功处理利福霉素产生菌，并与紫外线诱变作用相比较，对气功处理机制进行初步探讨。
材料与方法
, 百拇医药
一、出发菌株1074—38
系浙江新昌制药厂生产菌株。
二、培养基
1.斜面培养基：主要成份为蔗糖、蛋白胨等。
2.种子培养基：主要成份为葡萄糖、蛋白胨、豆饼粉等。
3.发酵培养基：主要成份为葡萄糖、鱼粉、蛋白胨、豆饼粉等。
4.分离培养基：同斜面培养基。
三、培养条件
1.斜面种子：27℃，6天。
2.平皿培养：27℃，11～12天。
, 百拇医药
3.摇瓶种子：27℃，46～48小时，旋转式摇床，220转/分。
4.摇瓶分酵：接种量8%，26—28℃，144小时，旋转式摇床，220转/分。
四、诱变因素和处理方法
1.诱变因素为紫外线：波长2537A，功率30W。处理时将菌悬液置紫外灯下30cm处照一定时间，照射时伴以磁力搅拌。
2.处理因素为智能气功：
将菌悬液交发功人处理一定时间。
3.诱变或处理后的菌悬液稀释到10—5涂布于平皿培养。
五、筛选方法
常规摇瓶法。二级发酵。
, 百拇医药
六、测定方法
效价测定：按利福霉素SV化学效价测定法测定。721型分光光度计。455nm波长。
实验结果
一、紫外线诱变
紫外线各种不同时间诱变1074—38菌株的结果： 照射时间(秒)
0
20
40
60
80
100
120
, 百拇医药
140
160
180
致死率(%)
0
16.5
45.8
57.6
72.9
77.6
84.7
90.5
98.8
, http://www.100md.com
98.8
平均效价(u/mL)
6481
6503
6481
6434
6446
6662
6625
6575
5550
6156
效价正(负)变率(%)
, http://www.100md.com
0
0.33
0
-0.72
-0.54
2.8
2.2
1.4
-14
-5.0
二、出发菌株情况
对保存的各种菌株性能进行考察，情形如下： 菌株编号
11
, http://www.100md.com
38
10
26
16
33
51
平行两个发
6887
7275
5413
5775
5688
6150
, 百拇医药
3750
酵瓶效价(u/mL)
5225
5588
4588
5888
4850
4963
4400
上表效价的明显波动以及斜面菌丝颜色、光泽的参差不齐，说明这些菌种已有相当程度的退化。
三、智能气功处理
智能气功各种不同时间处理1074—38菌种的结果： 处理时间(分)
, 百拇医药
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
致死率
(%)
0
, http://www.100md.com
13.3
40.4
46.7
46.7
37.7
53.3
55.5
48.9
51.1
40
平均效价
(u/mL)
5503
, http://www.100md.com
5449
6120
5748
5794
5560
5934
5959
6330
6395
6290
效价正(负)变
率(%)
0
, 百拇医药
-0.98
11.2
4.45
5.9
1.04
8.20
8.29
15.0
16.2
14.3
总试验
菌落数
(个)
, 百拇医药
22
109
效价低于
6000u/ml
的菌落数
(个)
16
43
最高效价
(u/mL)
7075
8013(16分钟处理)
四、罐上试验
, 百拇医药
智能气功选育出的菌种已开始应用于生产，发酵罐体积30吨，初步结果如下： 菌株编号
P62
P63
P91
P65
初筛效价(u/mL)
6800
6525
6338
6800
复筛效价(u/ml)
7021
, 百拇医药
6614
6713
7330
试验罐数
2罐
2罐
1罐
1罐
及罐上效价
5413
5413
6062
6214
, http://www.100md.com
(u/mL)
5225
5964
讨 论
1.据报道，利福霉素种是抗噬菌体突变株，突变后伴随着失去形成气生菌丝和孢子的能力。该菌种属于地中海诺卡氏菌，诺卡氏菌的特点是在培养15小时至4天内，菌丝体产生横隔膜，分枝的菌丝体突然全部断裂成长短近于一致的杆状或球状体或带杈的杆状体。因此实验时处理的是其菌丝片断悬浮液。
2.紫外线诱变时间与致死率之间存在着正相关性，诱变时间提高到一定程度能杀死所有菌丝片断。诱变时间与各菌落效价分布之间有一种似钟形曲线的关系，100秒左右的照射能使正向突变达到最高。
3.与紫外线相比，智能气功处理有两个明显的独特之处。一个是其致死率并不随处理时间的增加而提高，而是在50%左右波动。另一个是其对菌悬液中低产量部分杀死更多，达到“浓缩高单位”的效应，而且正向突变率的分布显示出向处理时间延长方面移动的上升趋势。
4.许多菌种都已经过紫外线多次诱变，相应的抗性往往不可避免，以致继续使用紫外线进行选育难以出现较大的突破。在这种情况下，用气功处理或许不失为可行之道。
参考文献
(1)张仲良等：东方气功，1990.3.40
(2)周家惠：国外药学(抗生素分册)，1983.(3)：213
(3)武汉大学和复旦大学生物系微生物学教研室编：微生物学，67, http://www.100md.com
单位：312500浙江新昌制药厂 杨叶东
关键词：
气功与科学990811
利福霉素是Sensi.P等人于1957年首次从地中海诺卡氏菌发酵液中分离出的一类抗生素，其最显著的生物活性是对革兰氏阴性细菌和分枝细菌有抑制作用，其半合成产物之一的利福平是治疗结核病的口服广谱抗生素。
气功在医疗保健、植物生长等方面的杰出作用已有很多报导，华北制药厂还应用智能气功处理洁霉素菌种提高了产量。我们用智能气功处理利福霉素产生菌，并与紫外线诱变作用相比较，对气功处理机制进行初步探讨。
材料与方法
, 百拇医药
一、出发菌株1074—38
系浙江新昌制药厂生产菌株。
二、培养基
1.斜面培养基：主要成份为蔗糖、蛋白胨等。
2.种子培养基：主要成份为葡萄糖、蛋白胨、豆饼粉等。
3.发酵培养基：主要成份为葡萄糖、鱼粉、蛋白胨、豆饼粉等。
4.分离培养基：同斜面培养基。
三、培养条件
1.斜面种子：27℃，6天。
2.平皿培养：27℃，11～12天。
, 百拇医药
3.摇瓶种子：27℃，46～48小时，旋转式摇床，220转/分。
4.摇瓶分酵：接种量8%，26—28℃，144小时，旋转式摇床，220转/分。
四、诱变因素和处理方法
1.诱变因素为紫外线：波长2537A，功率30W。处理时将菌悬液置紫外灯下30cm处照一定时间，照射时伴以磁力搅拌。
2.处理因素为智能气功：
将菌悬液交发功人处理一定时间。
3.诱变或处理后的菌悬液稀释到10—5涂布于平皿培养。
五、筛选方法
常规摇瓶法。二级发酵。
, 百拇医药
六、测定方法
效价测定：按利福霉素SV化学效价测定法测定。721型分光光度计。455nm波长。
实验结果
一、紫外线诱变
紫外线各种不同时间诱变1074—38菌株的结果： 照射时间(秒)
0
20
40
60
80
100
120
, 百拇医药
140
160
180
致死率(%)
0
16.5
45.8
57.6
72.9
77.6
84.7
90.5
98.8
, http://www.100md.com
98.8
平均效价(u/mL)
6481
6503
6481
6434
6446
6662
6625
6575
5550
6156
效价正(负)变率(%)
, http://www.100md.com
0
0.33
0
-0.72
-0.54
2.8
2.2
1.4
-14
-5.0
二、出发菌株情况
对保存的各种菌株性能进行考察，情形如下： 菌株编号
11
, http://www.100md.com
38
10
26
16
33
51
平行两个发
6887
7275
5413
5775
5688
6150
, 百拇医药
3750
酵瓶效价(u/mL)
5225
5588
4588
5888
4850
4963
4400
上表效价的明显波动以及斜面菌丝颜色、光泽的参差不齐，说明这些菌种已有相当程度的退化。
三、智能气功处理
智能气功各种不同时间处理1074—38菌种的结果： 处理时间(分)
, 百拇医药
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
致死率
(%)
0
, http://www.100md.com
13.3
40.4
46.7
46.7
37.7
53.3
55.5
48.9
51.1
40
平均效价
(u/mL)
5503
, http://www.100md.com
5449
6120
5748
5794
5560
5934
5959
6330
6395
6290
效价正(负)变
率(%)
0
, 百拇医药
-0.98
11.2
4.45
5.9
1.04
8.20
8.29
15.0
16.2
14.3
总试验
菌落数
(个)
, 百拇医药
22
109
效价低于
6000u/ml
的菌落数
(个)
16
43
最高效价
(u/mL)
7075
8013(16分钟处理)
四、罐上试验
, 百拇医药
智能气功选育出的菌种已开始应用于生产，发酵罐体积30吨，初步结果如下： 菌株编号
P62
P63
P91
P65
初筛效价(u/mL)
6800
6525
6338
6800
复筛效价(u/ml)
7021
, 百拇医药
6614
6713
7330
试验罐数
2罐
2罐
1罐
1罐
及罐上效价
5413
5413
6062
6214
, http://www.100md.com
(u/mL)
5225
5964
讨 论
1.据报道，利福霉素种是抗噬菌体突变株，突变后伴随着失去形成气生菌丝和孢子的能力。该菌种属于地中海诺卡氏菌，诺卡氏菌的特点是在培养15小时至4天内，菌丝体产生横隔膜，分枝的菌丝体突然全部断裂成长短近于一致的杆状或球状体或带杈的杆状体。因此实验时处理的是其菌丝片断悬浮液。
2.紫外线诱变时间与致死率之间存在着正相关性，诱变时间提高到一定程度能杀死所有菌丝片断。诱变时间与各菌落效价分布之间有一种似钟形曲线的关系，100秒左右的照射能使正向突变达到最高。
3.与紫外线相比，智能气功处理有两个明显的独特之处。一个是其致死率并不随处理时间的增加而提高，而是在50%左右波动。另一个是其对菌悬液中低产量部分杀死更多，达到“浓缩高单位”的效应，而且正向突变率的分布显示出向处理时间延长方面移动的上升趋势。
4.许多菌种都已经过紫外线多次诱变，相应的抗性往往不可避免，以致继续使用紫外线进行选育难以出现较大的突破。在这种情况下，用气功处理或许不失为可行之道。
参考文献
(1)张仲良等：东方气功，1990.3.40
(2)周家惠：国外药学(抗生素分册)，1983.(3)：213
(3)武汉大学和复旦大学生物系微生物学教研室编：微生物学，67, http://www.100md.com