可溶性日本血吸虫成虫抗原及可溶性蚯蚓抗原对小鼠胸腺细胞亚群的影响
作者：余爽 孙焱 贺宇飞 姜昌富
单位：余爽、孙焱、贺宇飞：同济医科大学94级7年制学生，武汉 430030；姜昌富：同济医科大学基础医学院寄生虫学教研室，武汉 430030
关键词：蚯蚓抗原；日本血吸虫；细胞免疫；胸腺细胞亚群
同济医科大学学报990535 中图法分类号 R383.2， R392.12
血吸虫疫苗的研究与发展是血吸虫病防治的热点[1]。本实验观察了感染日本血吸虫或以可溶性日本血吸虫成虫抗原(SWAP)及可溶性蚯蚓抗原(SEWP)免疫后小鼠胸腺细胞总数、胸腺活性细胞率、CD+4细胞百分率、CD+8细胞百分率的变化，现予以报道。
, http://www.100md.com 1 材料与方法
1.1 SEWP及SWAP的制备： 蚯蚓为参环毛蚓(pheretima asperigllum)，血吸虫成虫取自人工感染兔， 其抗原制备具体方法见文献[2]。所得SEWP蛋白含量为0.198 mg/ml，SWAP蛋白含量为0.195 mg/ml。
1.2 实验动物及分组： 取BALB/c纯系小鼠55只，体重15.8～22.6 g，由同济医科大学附属同济医院实验动物室提供。随机分为5组，每组11只。第1组为对照组；第2组为感染组，每只小鼠经腹部皮肤感染60条日本血吸虫尾蚴；第3组为SEWP免疫组，每只小鼠每次接种0.5 ml SEWP，含100 μg可溶性蚯蚓抗原；第4组为SWAP免疫组，每只每次接种0.5 ml SWAP，含100 μg可溶性日本血吸虫成虫抗原；第5组为SEWP与SWAP共同免疫组，每只每次接种0.5 ml抗原，含可溶性蚯蚓抗原及可溶性日本血吸虫成虫抗原各50 μg。免疫组小鼠均采用背部皮下注射抗原，每周免疫1次，共免疫3周。
, 百拇医药
1.3 胸腺细胞活性测定： 免疫3周后分别摘取全部小鼠胸腺，加Hank's液研碎，200目尼龙筛过滤，取滤液1500 r/min离心3 min，弃上清。取沉渣加入Hank's液2 ml 混匀。取50 μl细胞悬液加2 g/L台盼蓝50 μl室温染色10 min，滴入细胞计数板中，置光学显微镜下计数200个细胞，计数其活性细胞率，即不着色细胞百分率。
1.4 胸腺细胞总数测定： 基本操作方法同1.3。但在计数板上细胞总数应为4大格的细胞数除4乘104乘稀释倍数。
1.5 胸腺细胞亚群变化： 将上述方法所制备的胸腺细胞制成1×107个/ml的细胞悬液，加入94孔培养板中，10 μl/孔，再分别加入大鼠抗小鼠L3T4(TH)和Lyt2(TS)的McAb各20 μl/孔，混匀，37 ℃水浴30 min，加入1∶5补体20 μl/孔，水浴30 min ,加入1 g/L伊红Y和0.8 g/L戊二醛15 μl/孔，混匀后滴于细胞计数板上，光镜下每孔计数200个细胞，分别计数着色细胞率。
, http://www.100md.com
2 结果
实验BALB/c小鼠的样本数、胸腺细胞总数、胸腺活性细胞率、CD+4细胞百分率及CD+8细胞百分率见附表。
附表 感染组和免疫组小鼠胸腺细胞及其亚群的变化〔(
±s)%〕
组 别
样本
数
胸腺细胞总数
(×107/ml)
胸腺活性细胞
, 百拇医药
CD+8细胞
CD+4细胞
对照组
11
16.75±1.06
91.73±2.79
30.79±2.93
89.57±3.66
感染组
9
15.54±0.79
, http://www.100md.com
90.02±3.47
31.12±2.54
90.79±3.03
SEWP免疫组
9
15.43±0.59
89.89±2.98
30.32±4.58
91.29±2.02
SWAP免疫组
10
17.90±0.39
, http://www.100md.com
92.41±1.65
31.17±2.48
93.04±2.08*
SEWP+SWAP免疫组
10
18.37±0.31*
97.28±1.71**
30.30±1.68
96.29±2.92*
与对照组相比 *P<0.05，**P<0.01
, 百拇医药
3 讨论
据Wisnewski 报道，SEWP与SWAP具有交叉抗原，用SEWP免疫小鼠后36%可获得抗日本血吸虫再感染的保护性免疫[2]。本研究中，SEWP免疫组小鼠的各项指标与对照组相比均无显著差异，提示SEWP保护性免疫力不完全依赖于细胞免疫，以下三种机制可能参与了其免疫应答的建立：①抗体依赖的非淋巴细胞包括嗜酸性粒细胞、单核巨噬细胞等介导的ADCC效应。②NK细胞介导的ADCC。③其它机制。但SEWP不能充分激活胸腺这一中枢免疫器官，产生有效的细胞免疫，提示其作为疫苗发展的前景并不理想。
与对照组相比，SEWP与SWAP共同免疫组小鼠的胸腺细胞总数显著增加(P<0.05)，胸腺活性细胞率有非常显著增加(P<0.01)，说明SEWP能与SWAP协同，增强其免疫原性，刺激机体产生较高水平的细胞免疫。
本研究中，与对照组相比，SWAP与SEWP共同免疫组小鼠CD+4细胞百分率有非常显著增加(P<0.01)，而SWAP免疫组小鼠只有显著增加(P<0.05)，提示CD+4细胞参与了SWAP诱导的早期细胞免疫和SEWP诱发的保护性免疫力，此结果也进一步表明SEWP与SWAP有协同作用，能使CD+4细胞介导的细胞免疫水平提高，提示SEWP为开发研制新型血吸虫疫苗提供了新的前景。
参考文献
1 姜小山，赖建平.血吸虫疫苗的研究现状与展望.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1997，15(2)：111
2 Wisnewski A V, Kresina T F. Introduction of protective immunity to schistosomiasis with immunologically cross-reactive lumbricus molecules. Int J Paras,1995,25:503
收稿日期：1998-05-11, http://www.100md.com
单位：余爽、孙焱、贺宇飞：同济医科大学94级7年制学生，武汉 430030；姜昌富：同济医科大学基础医学院寄生虫学教研室，武汉 430030
关键词：蚯蚓抗原；日本血吸虫；细胞免疫；胸腺细胞亚群
同济医科大学学报990535 中图法分类号 R383.2， R392.12
血吸虫疫苗的研究与发展是血吸虫病防治的热点[1]。本实验观察了感染日本血吸虫或以可溶性日本血吸虫成虫抗原(SWAP)及可溶性蚯蚓抗原(SEWP)免疫后小鼠胸腺细胞总数、胸腺活性细胞率、CD+4细胞百分率、CD+8细胞百分率的变化，现予以报道。
, http://www.100md.com 1 材料与方法
1.1 SEWP及SWAP的制备： 蚯蚓为参环毛蚓(pheretima asperigllum)，血吸虫成虫取自人工感染兔， 其抗原制备具体方法见文献[2]。所得SEWP蛋白含量为0.198 mg/ml，SWAP蛋白含量为0.195 mg/ml。
1.2 实验动物及分组： 取BALB/c纯系小鼠55只，体重15.8～22.6 g，由同济医科大学附属同济医院实验动物室提供。随机分为5组，每组11只。第1组为对照组；第2组为感染组，每只小鼠经腹部皮肤感染60条日本血吸虫尾蚴；第3组为SEWP免疫组，每只小鼠每次接种0.5 ml SEWP，含100 μg可溶性蚯蚓抗原；第4组为SWAP免疫组，每只每次接种0.5 ml SWAP，含100 μg可溶性日本血吸虫成虫抗原；第5组为SEWP与SWAP共同免疫组，每只每次接种0.5 ml抗原，含可溶性蚯蚓抗原及可溶性日本血吸虫成虫抗原各50 μg。免疫组小鼠均采用背部皮下注射抗原，每周免疫1次，共免疫3周。
, 百拇医药
1.3 胸腺细胞活性测定： 免疫3周后分别摘取全部小鼠胸腺，加Hank's液研碎，200目尼龙筛过滤，取滤液1500 r/min离心3 min，弃上清。取沉渣加入Hank's液2 ml 混匀。取50 μl细胞悬液加2 g/L台盼蓝50 μl室温染色10 min，滴入细胞计数板中，置光学显微镜下计数200个细胞，计数其活性细胞率，即不着色细胞百分率。
1.4 胸腺细胞总数测定： 基本操作方法同1.3。但在计数板上细胞总数应为4大格的细胞数除4乘104乘稀释倍数。
1.5 胸腺细胞亚群变化： 将上述方法所制备的胸腺细胞制成1×107个/ml的细胞悬液，加入94孔培养板中，10 μl/孔，再分别加入大鼠抗小鼠L3T4(TH)和Lyt2(TS)的McAb各20 μl/孔，混匀，37 ℃水浴30 min，加入1∶5补体20 μl/孔，水浴30 min ,加入1 g/L伊红Y和0.8 g/L戊二醛15 μl/孔，混匀后滴于细胞计数板上，光镜下每孔计数200个细胞，分别计数着色细胞率。
, http://www.100md.com
2 结果
实验BALB/c小鼠的样本数、胸腺细胞总数、胸腺活性细胞率、CD+4细胞百分率及CD+8细胞百分率见附表。
附表 感染组和免疫组小鼠胸腺细胞及其亚群的变化〔(
±s)%〕组 别
样本
数
胸腺细胞总数
(×107/ml)
胸腺活性细胞
, 百拇医药
CD+8细胞
CD+4细胞
对照组
11
16.75±1.06
91.73±2.79
30.79±2.93
89.57±3.66
感染组
9
15.54±0.79
, http://www.100md.com
90.02±3.47
31.12±2.54
90.79±3.03
SEWP免疫组
9
15.43±0.59
89.89±2.98
30.32±4.58
91.29±2.02
SWAP免疫组
10
17.90±0.39
, http://www.100md.com
92.41±1.65
31.17±2.48
93.04±2.08*
SEWP+SWAP免疫组
10
18.37±0.31*
97.28±1.71**
30.30±1.68
96.29±2.92*
与对照组相比 *P<0.05，**P<0.01
, 百拇医药
3 讨论
据Wisnewski 报道，SEWP与SWAP具有交叉抗原，用SEWP免疫小鼠后36%可获得抗日本血吸虫再感染的保护性免疫[2]。本研究中，SEWP免疫组小鼠的各项指标与对照组相比均无显著差异，提示SEWP保护性免疫力不完全依赖于细胞免疫，以下三种机制可能参与了其免疫应答的建立：①抗体依赖的非淋巴细胞包括嗜酸性粒细胞、单核巨噬细胞等介导的ADCC效应。②NK细胞介导的ADCC。③其它机制。但SEWP不能充分激活胸腺这一中枢免疫器官，产生有效的细胞免疫，提示其作为疫苗发展的前景并不理想。
与对照组相比，SEWP与SWAP共同免疫组小鼠的胸腺细胞总数显著增加(P<0.05)，胸腺活性细胞率有非常显著增加(P<0.01)，说明SEWP能与SWAP协同，增强其免疫原性，刺激机体产生较高水平的细胞免疫。
本研究中，与对照组相比，SWAP与SEWP共同免疫组小鼠CD+4细胞百分率有非常显著增加(P<0.01)，而SWAP免疫组小鼠只有显著增加(P<0.05)，提示CD+4细胞参与了SWAP诱导的早期细胞免疫和SEWP诱发的保护性免疫力，此结果也进一步表明SEWP与SWAP有协同作用，能使CD+4细胞介导的细胞免疫水平提高，提示SEWP为开发研制新型血吸虫疫苗提供了新的前景。
参考文献
1 姜小山，赖建平.血吸虫疫苗的研究现状与展望.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1997，15(2)：111
2 Wisnewski A V, Kresina T F. Introduction of protective immunity to schistosomiasis with immunologically cross-reactive lumbricus molecules. Int J Paras,1995,25:503
收稿日期：1998-05-11, http://www.100md.com