苦黄注射液细菌内毒素检测方法研究
作者：扈春萍
单位：苏州市药品检验所，苏州，215006
关键词：苦黄注射液；细菌内毒素检测；最大有效稀释
苏州医学院学报991113 摘要 目的：通过试验确定，苦黄注射液细菌内毒检查法的可行性。方法：用最大有效稀释法排除苦黄注射液对鲎试剂凝集反应的干扰。结果：苦黄注射液样品对鲎试剂的凝集反应有抑制作用，但可用稀释法消除干扰。结论：细菌内毒素检查法可以代替热原检查法。
中图法分类 R927.1
Study of Bacterial Endotoxin Test in Kuhuang Injection
Hu chun ping
, http://www.100md.com
(The Institute of Medicine Test in Suzhou,Suzhou,215006)
Abstract Objective To determine the feasibility of kuhuang injection using defermination of endotoxin in bacteria. Methods To exclude the interence of kuhuang injection to the coagulating reaction of kuhuang injection to the coagulating reaction of Techypleus Amebocyte Lysate(TAL) through MVD method. Conclusions Bacterial endotoxin test may replace pyrogen test.
Key words Kuhuang injection; bacterial endotoxin text
, http://www.100md.com
鲎试剂是一种有生物活性的试剂，它与细菌内毒素的凝集反应是一系列复杂的酶促反应。如果药品中存在阻碍或促进该反应的因素时，可导致结果的异常，出现假阴性或假阳性。本文对苦黄注射液的细菌内毒素的检测方法进行了初步研究。结果表明，采用最大有效稀释法可消除样品对鲎试剂反应的干扰作用。初步认为，苦黄注射液可用细菌内毒素检查法代替热原检查法。
1 实验材料
鲎试剂：批号是970901灵敏度0.125EU/ml；批号980320，灵敏度0.5 EU/ml；湛江安度斯生物有限公司生产。
细菌内毒素工作品：批号9703，中国生物制品检定所提供。
细菌内毒素检查用水：批号980827，湛江安度斯生物有限公司生产。
苦黄注射液：批号970913，971015，971116，常熟市制药厂生产。热原检查均合格。
, http://www.100md.com
2 方法与结果
2.1 苦黄注射液细菌毒素限值(L)的确定：本品热原检查注射剂量M=2ml.kg-1，内毒素的致热阈值K=5EU*kg-1[1]，按公式L=K/M=5EU*kg-1/2ml.kg-1=2.5EU*ml-1。
2.2 最大有效稀释倍数MVD：选用灵敏度为0.125EU.ml-1的鲎试剂，MVD=L/λb=2.5 EU.ml-1/0.125EU.ml-1=20倍(λb为鲎试剂的标示灵敏度值EU*ml-1)。
2.3 鲎试剂灵敏度的标定：按细菌内毒素检查法[2]，用检查用水将细菌内毒素工作品按1∶2等比稀释成系列浓度的内毒素溶液，然后与鲎试剂混合，置37℃水浴60min，结果λc=0.125EU.ml-1(λc为灵敏度的标定值)，符合规定，见表1。
, http://www.100md.com
表1 鲎试剂灵敏度标定(批号970901，λb=0.125EU..ml-1)
细菌内毒素浓度(EU.ml-1)
0.5
0.25
0.125
0.0625
阴性对照
反应终点
++++
++++
, 百拇医药 ++++--------
反应值
λc=0.125EU.ml-1
2.4 干扰试剂的预试验：用检查用水样品稀释成1∶5，1∶10，1∶15，1∶20的系列浓度，分别用各浓度样品稀释细菌内毒素，使每一浓度均合细菌内毒素2λ，(λ=0.5EU.ml-1，2λ=1.0EU/ml)再分别与鲎试剂反应，结果见表2。
表2 干扰试验的预试验(鲎试剂λb=0.5EU.ml-1,批号980320) 苦黄注射液
1∶5
1∶10
, http://www.100md.com
1∶15
1∶20
阴性对照
-
-
+
+
+
-
-
-
+
+
+
, http://www.100md.com
-
表3 干扰试验 (鲎试剂λb=0.125EU.ml-1,批号970901) 批号
苦黄注射注细菌内毒素浓度(EU.ml-1)
0.5
0.25
0.125
0.0625
阴性对照
970913
++++
, 百拇医药
++++
++++--------
971015
++++
++++
+-++--------
971116
++++
++++
-++---------
2.5 干扰试验：选用灵敏度为0.125EU*ml-1的鲎试剂，用检查用水将样品做1∶20稀释，用此浓度样品溶解细菌内毒素工作标准品，并稀释成1∶2的系列浓度，再分别与鲎试剂反应。结果见表3，3批样品反应终点均为0.5λb≤λc≤2λb，说明样品在该浓度下对实验无干扰。
, 百拇医药
3 讨论
本试验结果表明，苦黄注射液样品及1∶5稀释液均对鲎试剂的凝集反应有抑制作用，但可用稀释法消除干扰。选用灵敏度为0.125EU*ml-1的鲎试剂，将样品做1∶20稀释，此稀释样品对实验无干扰。从而初步认为苦黄注射液的细菌内毒素检测法可代替热原检查法。 参考文献
1 黄清泉.药品细菌内毒素的实验设计.中国药学杂志，1997，32(2)∶72
2 细菌内毒素检查法.中国药典：二部附录，1995：76
(1999年6月10收稿), 百拇医药
单位：苏州市药品检验所，苏州，215006
关键词：苦黄注射液；细菌内毒素检测；最大有效稀释
苏州医学院学报991113 摘要 目的：通过试验确定，苦黄注射液细菌内毒检查法的可行性。方法：用最大有效稀释法排除苦黄注射液对鲎试剂凝集反应的干扰。结果：苦黄注射液样品对鲎试剂的凝集反应有抑制作用，但可用稀释法消除干扰。结论：细菌内毒素检查法可以代替热原检查法。
中图法分类 R927.1
Study of Bacterial Endotoxin Test in Kuhuang Injection
Hu chun ping
, http://www.100md.com
(The Institute of Medicine Test in Suzhou,Suzhou,215006)
Abstract Objective To determine the feasibility of kuhuang injection using defermination of endotoxin in bacteria. Methods To exclude the interence of kuhuang injection to the coagulating reaction of kuhuang injection to the coagulating reaction of Techypleus Amebocyte Lysate(TAL) through MVD method. Conclusions Bacterial endotoxin test may replace pyrogen test.
Key words Kuhuang injection; bacterial endotoxin text
, http://www.100md.com
鲎试剂是一种有生物活性的试剂，它与细菌内毒素的凝集反应是一系列复杂的酶促反应。如果药品中存在阻碍或促进该反应的因素时，可导致结果的异常，出现假阴性或假阳性。本文对苦黄注射液的细菌内毒素的检测方法进行了初步研究。结果表明，采用最大有效稀释法可消除样品对鲎试剂反应的干扰作用。初步认为，苦黄注射液可用细菌内毒素检查法代替热原检查法。
1 实验材料
鲎试剂：批号是970901灵敏度0.125EU/ml；批号980320，灵敏度0.5 EU/ml；湛江安度斯生物有限公司生产。
细菌内毒素工作品：批号9703，中国生物制品检定所提供。
细菌内毒素检查用水：批号980827，湛江安度斯生物有限公司生产。
苦黄注射液：批号970913，971015，971116，常熟市制药厂生产。热原检查均合格。
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2 方法与结果
2.1 苦黄注射液细菌毒素限值(L)的确定：本品热原检查注射剂量M=2ml.kg-1，内毒素的致热阈值K=5EU*kg-1[1]，按公式L=K/M=5EU*kg-1/2ml.kg-1=2.5EU*ml-1。
2.2 最大有效稀释倍数MVD：选用灵敏度为0.125EU.ml-1的鲎试剂，MVD=L/λb=2.5 EU.ml-1/0.125EU.ml-1=20倍(λb为鲎试剂的标示灵敏度值EU*ml-1)。
2.3 鲎试剂灵敏度的标定：按细菌内毒素检查法[2]，用检查用水将细菌内毒素工作品按1∶2等比稀释成系列浓度的内毒素溶液，然后与鲎试剂混合，置37℃水浴60min，结果λc=0.125EU.ml-1(λc为灵敏度的标定值)，符合规定，见表1。
, http://www.100md.com
表1 鲎试剂灵敏度标定(批号970901，λb=0.125EU..ml-1)
细菌内毒素浓度(EU.ml-1)
0.5
0.25
0.125
0.0625
阴性对照
反应终点
++++
++++
, 百拇医药 ++++--------
反应值
λc=0.125EU.ml-1
2.4 干扰试剂的预试验：用检查用水样品稀释成1∶5，1∶10，1∶15，1∶20的系列浓度，分别用各浓度样品稀释细菌内毒素，使每一浓度均合细菌内毒素2λ，(λ=0.5EU.ml-1，2λ=1.0EU/ml)再分别与鲎试剂反应，结果见表2。
表2 干扰试验的预试验(鲎试剂λb=0.5EU.ml-1,批号980320) 苦黄注射液
1∶5
1∶10
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1∶15
1∶20
阴性对照
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表3 干扰试验 (鲎试剂λb=0.125EU.ml-1,批号970901) 批号
苦黄注射注细菌内毒素浓度(EU.ml-1)
0.5
0.25
0.125
0.0625
阴性对照
970913
++++
, 百拇医药
++++
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971015
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971116
++++
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2.5 干扰试验：选用灵敏度为0.125EU*ml-1的鲎试剂，用检查用水将样品做1∶20稀释，用此浓度样品溶解细菌内毒素工作标准品，并稀释成1∶2的系列浓度，再分别与鲎试剂反应。结果见表3，3批样品反应终点均为0.5λb≤λc≤2λb，说明样品在该浓度下对实验无干扰。
, 百拇医药
3 讨论
本试验结果表明，苦黄注射液样品及1∶5稀释液均对鲎试剂的凝集反应有抑制作用，但可用稀释法消除干扰。选用灵敏度为0.125EU*ml-1的鲎试剂，将样品做1∶20稀释，此稀释样品对实验无干扰。从而初步认为苦黄注射液的细菌内毒素检测法可代替热原检查法。 参考文献
1 黄清泉.药品细菌内毒素的实验设计.中国药学杂志，1997，32(2)∶72
2 细菌内毒素检查法.中国药典：二部附录，1995：76
(1999年6月10收稿), 百拇医药