孕妇血、脐血、乳汁的乙型肝炎病毒DNA水平及其相关性
作者：李小毛 刘穗玲 李霞 黄怀筠 卢建溪 高志良
单位：中山医科大学附属第三医院妇产科，广东 广州 510630
关键词：肝炎病毒，乙型；DNA，病毒；胎血；乳，人
中山医科大学学报000322
摘 要：【目的】探讨乙型肝炎病毒(HBV)母婴垂直传播的规律，为预防和阻断HBV的母婴传播提供依据。【方法】对68例HBsAg阳性孕产妇以荧光定量PCR方法检测其静脉血、脐血、乳汁HBV DNA含量并分析其相关性。【结果】孕妇血与脐血HBV DNA的含量相关系数为0.3446(P=0.008)，孕妇血与乳汁HBV DNA的含量的相关系数为0.1449(P=0.261)。【结论】孕妇血HBV DNA水平与脐血HBV DNA水平呈正相关，降低孕妇血HBV DNA水平，有利于控制HBV宫内感染；对HBsAg阳性产妇应检测乳汁HBV DNA，以便指导母乳喂养。
, 百拇医药
中图分类号：R 714.251 文献标识码：A 文章编号：1000-257X(2000)03-0233-03
The Relative Study of Hepatitise B Virus DNA in Maternal blood Umbilical Blood and Breastmilk
LI Xiao-mao,LIU Sui-ling,LI Xia,HUANG Huai-jun,LU Jian-xi,GAO Zhi-liang(Department of Obstetric and Gynecology,Third Hospital,Sun Yat-sen University of Medical Sciences,Guangzhou 510630,China)
Abstract:【Objective】To study the rule of vertical transmission of hepatitise B virus (HBV) in order to prevent and stop the transmission.【Methods】To detect HBV DNA in venous blood,umbilical blood and breastmilk of 68 HBsAg positive parturients by FQ-PCR and analyse their relativity.【Results】The relative ratio between the value of venous HBV DNA and that of umbilical HBV DNA was 0.3446(P=0.008).The relative ratio between the value of venous HBV DNA and that of breastmilk HBV DNA was 0.1449 (P=0.261).【Conclusion】HBV DNA level in the umbilical blood is positive relative to that in the venous blood.Decrease of the HBV DNA level in venous blood would be helpful to control HBV intrauterine transmission.Detection of HBV DNA in breastmilk should be done to HBV carrier mothers in order to conduct breasfeeding.
, http://www.100md.com
Key words: hepatitis B virus; DNA,virus; fetal blood; milk,human
乙型肝炎病毒(HBV)不仅造成众多的HBV慢性携带者，也是导致成人慢性肝炎、肝硬化、肝癌的重要因素。母婴传播是HBV传播的重要途径之一[1]。本研究检测68例HBsAg阳性孕产妇静脉血、脐血、乳汁中HBV DNA含量并进行相关性分析，探讨HBV母婴传播规律，为预防和阻断HBV DNA的母婴传播提供依据。
1 资料和方法
1.1 研究对象
我院产前门诊68例产妇，其中初产妇62例，经产妇6例。平均年龄(26.9±2.8)岁(20～37岁)，平均孕周(39.0±1.3)周(35～42周)。对门诊筛查HBsAg阳性孕妇，分娩前采集静脉血、分娩时采集脐血，产后3 d内采集乳汁，分别检测HBV DNA含量。采脐血者用消毒干纱布擦干穿刺点附近的脐带表面血污，并用酒精消毒后抽取脐血；采集乳汁者先清洁乳头，并要求乳头无破损。
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1.2 方 法
1.2.1 血清学检测 孕妇HBV血清学标志物(包括：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)用酶联免疫吸附法(ELISA)，试剂购自中山生物制剂厂。
1.2.2 HBV DNA荧光定量PCR检测 用DNA/RNA血清提取液纯化HBV DNA，前期PCR过程进行不对称扩增，再加入HBV Amplisensor双链信号引物，进行半巢式扩增，ASAP专用软件处理原始数据。HBV DNA定量：<2 000拷贝/mL为阴性，≥2 000拷贝/mL为阳性。
1.3 统计学方法
全部数据采用SPSS for windows软件处理，统计学方法包括等级相关分析，秩和检验。
2 结 果
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2.1 孕妇血与脐血HBV DNA含量的关系
68例孕妇血HBV DNA含量为2.4×102～5.7×108拷贝/mL，中位数3.5×105拷贝/mL；脐血HBV DNA含量为2.4×102～4.4×108拷贝/mL，中位数6.2×104拷贝/mL；两组HBV DNA含量的相关系数为0.3446(P=0.008)，孕妇血HBV DNA含量与脐血HBV DNA含量呈正相关。
脐血HBV DNA阳性者50例，孕妇血HBV DNA含量2.5×103～5.7×108拷贝/mL，中位数6×105拷贝/mL；阴性者18例，孕妇血HBV DNA含量2.4×102～1.6×108拷贝/mL，中位数8.7×103拷贝/mL，两组孕妇血HBV DNA含量有显著性差异(P=0.0149)。
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2.2 孕妇血HBeAg与HBV DNA含量的关系
HBeAg阳性孕妇22例，孕妇血HBV DNA含量2.4×103～3.1×108拷贝/mL，中位数1.02×107拷贝/mL；HBeAg阴性孕妇46例，孕妇血HBV DNA含量3×102～5.7×108拷贝/mL，中位数1.65×105拷贝/mL，两组孕妇血HBV DNA含量比较，无显著性差异(P=0.581)。
2.3 孕妇血HBeAg与脐血HBV DNA含量的关系
HBeAg阳性孕妇22例，脐血HBV DNA含量2.4×102～4.4×108拷贝/mL，中位数1.7×105拷贝/mL；HBeAg阴性孕妇46例，脐血HBV DNA含量2.4×102～2.7×108拷贝/mL，中位数8.8×104拷贝/mL，两组脐血HBV DNA含量比较，无显著性差异(P=0.446)。
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2.4 孕妇血与其乳汁HBV DNA含量的关系
68例产妇乳汁HBV DNA含量为60～1.1×108拷贝/mL，中位数5.2×104拷贝/mL；孕妇血与其乳汁HBV DNA含量的相关系数为0.1449(P=0.261)，两者无相关性。
乳汁HBV DNA阳性者54例，孕妇血HBV DNA含量1.6×103～5.7×108拷贝/mL，中位数3.5×105拷贝/mL；阴性者14例，孕妇血HBV DNA含量2.4×102～3.1×108拷贝/mL，中位数7.7×104拷贝/mL，两组孕妇血HBV DNA含量无显著性差异(P=0.2748)。
3 讨 论
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3.1 探讨HBV宫内感染的规律，对防止并阻断HBV母婴传播具有重要意义
我国是HBV感染的高发区，人群中HBsAg阳性率高达10%以上，母婴传播是HBV的重要传播途径之一。文献报道[1]，HBV携带者母亲所生的新生儿接受主动和被动联合免疫有效率为70%～90%，认为联合免疫只对产时及产后感染有效，免疫失败者多数为宫内感染，并认为可能是宫内感染导致机体对疫苗免疫耐受的结果。因此，探讨HBV宫内感染的规律，对防止并阻断HBV母婴传播具有重要意义。
3.2 母血HBV DNA含量是评价其传染性的重要指标
既往许多学者认为母血HBsAg滴度及HBeAg可作为HBV母婴传播的指标，HBsAg滴度愈高或HBeAg阳性，其传染性强[2]。随着现代分子生物学技术的发展，人们能直接检测血中HBV DNA含量。研究发现[3，4]HBeAg阳性与HBV DNA并不一致，部分HBeAg阴性患者，其血中存在有复制能力的HBV；部分HBeAg阳性母亲血中缺乏HBV DNA，其婴儿被感染的危险性低。本组资料母血HBeAg阳性与HBV DNA含量无相关性，HBeAg阳性者脐血HBV DNA阳性率无明显增高，提示母血HBeAg未能准确反映其传染性，母血HBV DNA含量是评价其传染性的重要指标。
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3.3 降低孕妇血HBV DNA水平，对控制与阻断HBV宫内感染具有重要意义
脐血是胎儿循环的一部分，有人认为脐血可能存在母血污染，不适合作为确诊胎儿宫内感染HBV的证据[5]。然而抽取新生儿外周血存在一定的实际困难，对新生儿有一定的损伤与痛苦。相当部分的研究是以检测脐血HBV DNA用于判断胎儿宫内感染状况[6]。本研究比较孕妇血的HBV DNA含量与脐血HBV DNA含量，发现两者存在相关性，孕妇血HBV DNA含量愈高，则其传染性强，愈易引起宫内感染。虽然宫内感染机制目前尚未明确，本资料结果提示对HBV感染孕妇积极治疗，降低血中HBV DNA含量，对控制和阻断HBV宫内感染具有重要意义。文献报道[7]，HBsAg阳性的孕妇产前给予多次注射乙肝高效价免疫球蛋白(HBIG)可以有效减少胎儿宫内HBV感染，并推测其原理是降低了外周血HBV含量。
3.4 对HBV携带者检测乳汁HBV DNA以指导母乳喂养
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母乳是引起婴儿HBV感染的重要因素，母乳中检测出HBV DNA是其具传染性的指标。HBV可感染肝外组织，可在乳汁中分泌，本研究未发现孕妇血HBV DNA含量与乳汁HBV DNA含量的相关性，因此，从孕妇血的HBV感染状况难以估计乳汁的传染性。我们认为对HBV携带者，应检测乳汁HBV DNA含量，其乳汁HBV DNA阴性者提倡母乳喂养。
基金项目：广州市科委科研基金资助课题
作者简介：李小毛(1962-)，男，湖南临武人，硕士，副教授.
参考文献：
[1]杨晓菊.乙型肝炎病毒宫内垂直传播的预防[J].中国优生优育，1997，8(3)：134.
[2]Beasley R P,Trepo C,Stevens C S,et al.The e antigen and vertical transmission of hepatitise B surface antigen[J].Am J Epidemiol,1977,105(2):94.
, http://www.100md.com
[3]Lieberman H M,LaBrecque D R,Kew M C.Detection of Hepatitise B virus DNA directly in human serum by a simpified molecular hybridization test: comparison to HBeAg and anti-HBe status in HBsAg carriers[J].Hepatology,1983,3(4):285.
[4]Scott J S,Pan P E,Pace R A,et al.The absence of hepatitise B virus DNA in hepatitise B e antigen positive sera from chronic Hepatitise B surface antigen carriers in China[J].J Med Virol,1990,30(2):103.
[5]李寿复，罗光湘，刘淑华，等.乙型肝炎病毒宫内感染与围产期传播[J].中华流行病学杂志，1987，8(3)：154.
[6]柳国胜，冯泽康.脐血中乙型肝炎病毒DNA的检出对早期诊断乙型肝炎宫内感染的意义[J].中华儿科杂志，1991，29(3)：142.
[7]朱启榕，吕 晴，顾新焕，等.阻断乙型肝炎病毒宫内传播的初步研究[J].中华儿科杂志，1995，33(2)：93.
收稿日期：2000-01-04, 百拇医药
单位：中山医科大学附属第三医院妇产科，广东 广州 510630
关键词：肝炎病毒，乙型；DNA，病毒；胎血；乳，人
中山医科大学学报000322
摘 要：【目的】探讨乙型肝炎病毒(HBV)母婴垂直传播的规律，为预防和阻断HBV的母婴传播提供依据。【方法】对68例HBsAg阳性孕产妇以荧光定量PCR方法检测其静脉血、脐血、乳汁HBV DNA含量并分析其相关性。【结果】孕妇血与脐血HBV DNA的含量相关系数为0.3446(P=0.008)，孕妇血与乳汁HBV DNA的含量的相关系数为0.1449(P=0.261)。【结论】孕妇血HBV DNA水平与脐血HBV DNA水平呈正相关，降低孕妇血HBV DNA水平，有利于控制HBV宫内感染；对HBsAg阳性产妇应检测乳汁HBV DNA，以便指导母乳喂养。
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中图分类号：R 714.251 文献标识码：A 文章编号：1000-257X(2000)03-0233-03
The Relative Study of Hepatitise B Virus DNA in Maternal blood Umbilical Blood and Breastmilk
LI Xiao-mao,LIU Sui-ling,LI Xia,HUANG Huai-jun,LU Jian-xi,GAO Zhi-liang(Department of Obstetric and Gynecology,Third Hospital,Sun Yat-sen University of Medical Sciences,Guangzhou 510630,China)
Abstract:【Objective】To study the rule of vertical transmission of hepatitise B virus (HBV) in order to prevent and stop the transmission.【Methods】To detect HBV DNA in venous blood,umbilical blood and breastmilk of 68 HBsAg positive parturients by FQ-PCR and analyse their relativity.【Results】The relative ratio between the value of venous HBV DNA and that of umbilical HBV DNA was 0.3446(P=0.008).The relative ratio between the value of venous HBV DNA and that of breastmilk HBV DNA was 0.1449 (P=0.261).【Conclusion】HBV DNA level in the umbilical blood is positive relative to that in the venous blood.Decrease of the HBV DNA level in venous blood would be helpful to control HBV intrauterine transmission.Detection of HBV DNA in breastmilk should be done to HBV carrier mothers in order to conduct breasfeeding.
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Key words: hepatitis B virus; DNA,virus; fetal blood; milk,human
乙型肝炎病毒(HBV)不仅造成众多的HBV慢性携带者，也是导致成人慢性肝炎、肝硬化、肝癌的重要因素。母婴传播是HBV传播的重要途径之一[1]。本研究检测68例HBsAg阳性孕产妇静脉血、脐血、乳汁中HBV DNA含量并进行相关性分析，探讨HBV母婴传播规律，为预防和阻断HBV DNA的母婴传播提供依据。
1 资料和方法
1.1 研究对象
我院产前门诊68例产妇，其中初产妇62例，经产妇6例。平均年龄(26.9±2.8)岁(20～37岁)，平均孕周(39.0±1.3)周(35～42周)。对门诊筛查HBsAg阳性孕妇，分娩前采集静脉血、分娩时采集脐血，产后3 d内采集乳汁，分别检测HBV DNA含量。采脐血者用消毒干纱布擦干穿刺点附近的脐带表面血污，并用酒精消毒后抽取脐血；采集乳汁者先清洁乳头，并要求乳头无破损。
, http://www.100md.com
1.2 方 法
1.2.1 血清学检测 孕妇HBV血清学标志物(包括：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)用酶联免疫吸附法(ELISA)，试剂购自中山生物制剂厂。
1.2.2 HBV DNA荧光定量PCR检测 用DNA/RNA血清提取液纯化HBV DNA，前期PCR过程进行不对称扩增，再加入HBV Amplisensor双链信号引物，进行半巢式扩增，ASAP专用软件处理原始数据。HBV DNA定量：<2 000拷贝/mL为阴性，≥2 000拷贝/mL为阳性。
1.3 统计学方法
全部数据采用SPSS for windows软件处理，统计学方法包括等级相关分析，秩和检验。
2 结 果
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2.1 孕妇血与脐血HBV DNA含量的关系
68例孕妇血HBV DNA含量为2.4×102～5.7×108拷贝/mL，中位数3.5×105拷贝/mL；脐血HBV DNA含量为2.4×102～4.4×108拷贝/mL，中位数6.2×104拷贝/mL；两组HBV DNA含量的相关系数为0.3446(P=0.008)，孕妇血HBV DNA含量与脐血HBV DNA含量呈正相关。
脐血HBV DNA阳性者50例，孕妇血HBV DNA含量2.5×103～5.7×108拷贝/mL，中位数6×105拷贝/mL；阴性者18例，孕妇血HBV DNA含量2.4×102～1.6×108拷贝/mL，中位数8.7×103拷贝/mL，两组孕妇血HBV DNA含量有显著性差异(P=0.0149)。
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2.2 孕妇血HBeAg与HBV DNA含量的关系
HBeAg阳性孕妇22例，孕妇血HBV DNA含量2.4×103～3.1×108拷贝/mL，中位数1.02×107拷贝/mL；HBeAg阴性孕妇46例，孕妇血HBV DNA含量3×102～5.7×108拷贝/mL，中位数1.65×105拷贝/mL，两组孕妇血HBV DNA含量比较，无显著性差异(P=0.581)。
2.3 孕妇血HBeAg与脐血HBV DNA含量的关系
HBeAg阳性孕妇22例，脐血HBV DNA含量2.4×102～4.4×108拷贝/mL，中位数1.7×105拷贝/mL；HBeAg阴性孕妇46例，脐血HBV DNA含量2.4×102～2.7×108拷贝/mL，中位数8.8×104拷贝/mL，两组脐血HBV DNA含量比较，无显著性差异(P=0.446)。
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2.4 孕妇血与其乳汁HBV DNA含量的关系
68例产妇乳汁HBV DNA含量为60～1.1×108拷贝/mL，中位数5.2×104拷贝/mL；孕妇血与其乳汁HBV DNA含量的相关系数为0.1449(P=0.261)，两者无相关性。
乳汁HBV DNA阳性者54例，孕妇血HBV DNA含量1.6×103～5.7×108拷贝/mL，中位数3.5×105拷贝/mL；阴性者14例，孕妇血HBV DNA含量2.4×102～3.1×108拷贝/mL，中位数7.7×104拷贝/mL，两组孕妇血HBV DNA含量无显著性差异(P=0.2748)。
3 讨 论
, 百拇医药
3.1 探讨HBV宫内感染的规律，对防止并阻断HBV母婴传播具有重要意义
我国是HBV感染的高发区，人群中HBsAg阳性率高达10%以上，母婴传播是HBV的重要传播途径之一。文献报道[1]，HBV携带者母亲所生的新生儿接受主动和被动联合免疫有效率为70%～90%，认为联合免疫只对产时及产后感染有效，免疫失败者多数为宫内感染，并认为可能是宫内感染导致机体对疫苗免疫耐受的结果。因此，探讨HBV宫内感染的规律，对防止并阻断HBV母婴传播具有重要意义。
3.2 母血HBV DNA含量是评价其传染性的重要指标
既往许多学者认为母血HBsAg滴度及HBeAg可作为HBV母婴传播的指标，HBsAg滴度愈高或HBeAg阳性，其传染性强[2]。随着现代分子生物学技术的发展，人们能直接检测血中HBV DNA含量。研究发现[3，4]HBeAg阳性与HBV DNA并不一致，部分HBeAg阴性患者，其血中存在有复制能力的HBV；部分HBeAg阳性母亲血中缺乏HBV DNA，其婴儿被感染的危险性低。本组资料母血HBeAg阳性与HBV DNA含量无相关性，HBeAg阳性者脐血HBV DNA阳性率无明显增高，提示母血HBeAg未能准确反映其传染性，母血HBV DNA含量是评价其传染性的重要指标。
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3.3 降低孕妇血HBV DNA水平，对控制与阻断HBV宫内感染具有重要意义
脐血是胎儿循环的一部分，有人认为脐血可能存在母血污染，不适合作为确诊胎儿宫内感染HBV的证据[5]。然而抽取新生儿外周血存在一定的实际困难，对新生儿有一定的损伤与痛苦。相当部分的研究是以检测脐血HBV DNA用于判断胎儿宫内感染状况[6]。本研究比较孕妇血的HBV DNA含量与脐血HBV DNA含量，发现两者存在相关性，孕妇血HBV DNA含量愈高，则其传染性强，愈易引起宫内感染。虽然宫内感染机制目前尚未明确，本资料结果提示对HBV感染孕妇积极治疗，降低血中HBV DNA含量，对控制和阻断HBV宫内感染具有重要意义。文献报道[7]，HBsAg阳性的孕妇产前给予多次注射乙肝高效价免疫球蛋白(HBIG)可以有效减少胎儿宫内HBV感染，并推测其原理是降低了外周血HBV含量。
3.4 对HBV携带者检测乳汁HBV DNA以指导母乳喂养
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母乳是引起婴儿HBV感染的重要因素，母乳中检测出HBV DNA是其具传染性的指标。HBV可感染肝外组织，可在乳汁中分泌，本研究未发现孕妇血HBV DNA含量与乳汁HBV DNA含量的相关性，因此，从孕妇血的HBV感染状况难以估计乳汁的传染性。我们认为对HBV携带者，应检测乳汁HBV DNA含量，其乳汁HBV DNA阴性者提倡母乳喂养。
基金项目：广州市科委科研基金资助课题
作者简介：李小毛(1962-)，男，湖南临武人，硕士，副教授.
参考文献：
[1]杨晓菊.乙型肝炎病毒宫内垂直传播的预防[J].中国优生优育，1997，8(3)：134.
[2]Beasley R P,Trepo C,Stevens C S,et al.The e antigen and vertical transmission of hepatitise B surface antigen[J].Am J Epidemiol,1977,105(2):94.
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[3]Lieberman H M,LaBrecque D R,Kew M C.Detection of Hepatitise B virus DNA directly in human serum by a simpified molecular hybridization test: comparison to HBeAg and anti-HBe status in HBsAg carriers[J].Hepatology,1983,3(4):285.
[4]Scott J S,Pan P E,Pace R A,et al.The absence of hepatitise B virus DNA in hepatitise B e antigen positive sera from chronic Hepatitise B surface antigen carriers in China[J].J Med Virol,1990,30(2):103.
[5]李寿复，罗光湘，刘淑华，等.乙型肝炎病毒宫内感染与围产期传播[J].中华流行病学杂志，1987，8(3)：154.
[6]柳国胜，冯泽康.脐血中乙型肝炎病毒DNA的检出对早期诊断乙型肝炎宫内感染的意义[J].中华儿科杂志，1991，29(3)：142.
[7]朱启榕，吕 晴，顾新焕，等.阻断乙型肝炎病毒宫内传播的初步研究[J].中华儿科杂志，1995，33(2)：93.
收稿日期：2000-01-04, 百拇医药