实验性牙髓炎疼痛诱发c-fos在中枢内的表达
作者：林正梅 程斌 凌均 陈小华
单位：中山医科大学附属光华口腔医院内科， 广东 广州 510055
关键词：牙髓炎；病理学；神经传导；基因；c-fos
中山医科大学学报000406
摘 要：【目的】 了解实验性牙髓炎疼痛信号在中枢的传导特点。【方法】 应用免疫组织化学方法检测牙髓炎疼痛诱发中枢神经系统(central nerve system, CNS)c-fos的表达。【结果】 牙髓炎疼痛能诱导c-fos在CNS内呈时间依赖性表达。诱痛后2 h为Fos免疫阳性神经元(Fos-like immunoreactivity neuron, FLN)的表达高峰，4 h左右开始减弱。FLN除了密集分布在三叉神经脊束核尾侧亚核(nucleus of the spinal tract of the trigeminal nerve,caudal part， sp5c)的Ⅰ、Ⅱ层外，极间核、口核、感觉主核、躯体感觉皮层等可见FLN的表达；臂旁核、室旁核、中央杏仁核等与痛调节有关的内脏中继核团亦可见FLN的表达。【结论】 在三叉神经脑干复合体中，所有三叉神经脊束核均参与了牙痛的传导，但以尾侧亚核的第二层为主；此外，与内脏调节有关的核团亦参与了牙痛的传导和调节作用。
, 百拇医药
中图分类号：R781.31 文献标识码： A
文章编码：1000-257X(2000)04-0256-04
Expression and Effect of c-fos Gene in Central Nerve System Induced by Experimental Pulpitis Pain
LIN Zheng-mei, CHENG Bin, LING Jun-qi, CHEN Xiao-hua
(Guanghua Hospital of Stomatology, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510055, China)
Abstract： 【Objective】 To investigate the transmission signal of the experimental pulpitis pain. 【Method】 The immunohistochemical method was used to detect Fos expression in Central Nerve System(CNS) induced by pulpitis pain. 【Results】 Time-dependant expression of c-fos in CNS induced by pulpitis pain was observed. The peak of Fos-like immunoreactivity neuron(FLN) appeared 2 hours after the stimulation. FLN densely distributed not only in the Ⅰ、Ⅱ layers of trigeminal caudal nucleus, but also in interpolar nucleus, oral nucleus, main sensory and body cerebral cortex. FLN were also seen in the nucleus associated with pain regulation such as parabrachial nucleus and nucleus of solitary tract. 【Conclusion】 The neurons of trigeminal brainstem complex are involved in transduction of dental pain signal, with the dominant role played by the second layer of caudalis. Some nucleus related to the regulation of viscera are taken part in this process.
, 百拇医药
Key words:pulpitis / pathology; neural conduction; gene, c-fos
牙髓炎是最常见的口腔疾病之一，它具有冷热刺激痛、自发痛、夜间痛及放散痛等显著的疼痛特点。但目前牙痛信号在二级神经元(三叉神经复合体)内的传导途经仍未明确。Hu等[1]根据神经解剖学和电生理学研究结果提出，三叉神经脊束核是面口部浅感觉信号的中继核团，尤其三叉神经脊束核尾侧亚核(nucleus of the spinal tract of the trigeminal nerve,caudal part， sp5c) 是面口部痛觉信号传入的重要驿站；而Takemura等[2]发现，猴牙髓传入神经在尾侧亚核仅有稀少投射，因而认为sp5c甚至整个三叉神经脊束核在牙痛信号传导中的作用仍有待明确。
c-fos基因与疼痛密切相关, 是细胞信息传递过程中的“核内第三信使”，它能将细胞外短时程的剌激转换成长时程的细胞效应，研究发现在外周刺激所引起的神经元活动过程中，c-fos基因被激活并表达Fos蛋白[3]，用免疫组织化学方法可检测Fos蛋白在中枢神经系统(Central Nerve Systen，CNS)内的表达及分布特点，从而可显示中枢神经系统内的功能通路[4]。本文拟在建立实验性牙髓炎疼痛模型的基础上，用免疫组织化学方法检测脑内Fos免疫阳性神经元(Fos-like immunoreactivity neuron，FLN)的分布及规律，以了解牙痛刺激信号在中枢内的传导途经，初步探讨牙痛的中枢传导机制。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 动物分组与处理
空白对照组(A组)：9只SD大白鼠，不作任何处理，安静环境下饲养；牙髓炎诱痛组(B组)：45只SD大白鼠，均先建立实验性牙髓炎模型，封细菌内毒素后24 h于乙醚麻醉下用烧热的充填器反复刺激牙唇面，直到清醒，并观察其嘶叫情形，诱痛后存活时间与动物数分别为0.5 h(9只)、1 h(9只)、2 h(9只)、4 h(9只)、8 h(9只)；吗啡注射组(C组)：9只SD大白鼠，先建立实验性牙髓炎诱痛模型，在热刺激前0.5 h腹腔注射吗啡(10 mg/kg)，诱痛后存活2 h。
1.2 取 材
各组动物存活至预定时间后行腹腔麻醉，经质量浓度40 g/L中性多聚甲醛心脏灌注固定，断头，用大鼠脑立体定位仪定位，取块，恒冷冰冻切片机连续切片，40 μm厚，用体积分数3 mL/L H2O2接片，待处理。
, http://www.100md.com
1.3 免疫组织化学染色步骤
上述切片用LSAB法及GDN(硫酸镍铵加强染色)法进行漂染。实验步骤简述如下：切片用1 mL正常羊血清(含3 μL Tritone X-100)4 ℃下孵育0.5 h；转入稀释度为1∶1 000的Fos单抗溶液(Santa Cruz)，4 ℃下孵育24 h；转入二抗溶液(生物素标记的抗小鼠IgG)，4 ℃下孵育24 h；转入三抗溶液(辣根过氧化酶标记的链霉卵白素复合物)，室温下轻摇2 h；DAB法显色，缓慢加入硫酸镍铵葡萄糖氧化酶混合液加强染色；裱片；室温下风干，梯度脱水，透明；封片。实验中用PBS代替一抗作阴性对照。
1.4 Fos表达的测量
核团内神经元细胞核呈棕黑色染色者为阳性细胞；高倍镜下(×40)在一个核团内随机选择5个视野，利用测试网格计算每个视野中的阳性颗粒数，再取5个视野的平均值，则为该核团的平均阳性颗粒数。
, 百拇医药
1.5 统计学处理
q检验(Newman-keuls法)，检验水准双侧α=0.05。
2 结 果
2.1 Fos在实验性牙髓炎鼠中枢的表达
在牙髓炎症情况下施予反复热刺激，实验鼠CNS内c-fos基因被激活，表现为各核团出现数量不等的FLN(图1、表1)。从sp5c、孤束核(nucleus of solitary tract)、室旁核(paraventricular nucleus)、臂旁核(parabrachial nucleus)、大脑皮层(cerebral cortex)这5个有代表性的核团观察到：诱痛后0.5 h， FLN的数量开始增多；1～2 h FLN的数量达到高峰；4 h后FLN的数量开始减少，直至8 h FLN数量又基本恢复至未刺激时的状态。其余核团也观察到类似的现象，说明FLN在脑内各核表达的数量呈时间依赖性。
, http://www.100md.com
表1 FLN在大鼠中枢系统内的表达
Table 1 Expression of FLN in rat's CNS Time
0.5h
1h
2h
4h
8h
Caudalis
+
+ + +
+ + +
+ +
, http://www.100md.com
+
Interpolaris
-
+
+
-
-
Oralis
-
+
+
-
-
Principal sensory nucleus
, http://www.100md.com
-
+
+
-
-
Nucleus of solitary tract
+
+ +
+ +
+
+
Periphery gray of central
+
, 百拇医药
+
+
-
-
canal
Paraventricular nucleus
+
+ +
+ +
+
-
Parabrachial nucleus
+
, http://www.100md.com
+ +
+ +
+
-
Locus ceruleus
+
+
+
+
-
Cerebral cortex
+
+ +
, http://www.100md.com
+ +
+
-
2.2 各核团FLN分布的特点
2.2.1 三叉神经脊束核尾侧亚核 空白对照组的sp5c内仅见极少量的FLN分布(5.4±2.8)。牙髓炎疼痛后2 h，sp5c的Ⅰ、Ⅱ层背腹侧和中间部分可见较为密集的FLN(72.8±9.7，P<0.05)，其分布大致呈新月形；在Ⅲ至Ⅴ层见少量的FLN，第Ⅴ层内的FLN细胞体较大(图1A)；对侧亦可见少量的FLN，主要在中间部。诱痛后应用吗啡，相应核团FLN数量明显减少，与空白对照组相近(7.3±2.5，P>0.05)。
图1 牙髓炎诱痛后2 h中枢神经系统内Fos的表达
, http://www.100md.com
Fig.1 Fos expressed in central nerve system after 2h of the pulpitis pain
A: Fos distributed densely in the Ⅰ and Ⅱ layers of the trigeminal caudalis. (LSAB+GDN,×100)； B: Fos expressed in the trigeminal interpolaris. (LSAB+GDN,×100)； C: Fos expressed largely in the parabrachial neucleus. (LSAB+GDN,×100)； D: Fos appeared in the cerebral cortex. (LSAB+GDN,×50)
2.2.2 三叉神经脊束核的其它亚核 牙髓炎诱痛后2 h，感觉主核(principal sensory nucleus)、口核(oralis)、极间核(interpolaris)(图1B)可见少量至中等量的FLN出现(见表1)，诱痛后使用吗啡能抑制这些核团的FLN的出现。
, 百拇医药
2.2.3 其它核团 牙髓炎诱痛后2 h，蓝斑(locus ceruleus)、孤束核(nucleus of solitary)、臂旁核(parabrachial nucleus，图1C)、中脑导水管周围灰质(periphery gray of central canal)、室旁核(paraventricular nucleus)及大脑躯体感觉皮质(cerebral cortex，图1D)等均可见中等量至大量的FLN (见表1)，以同侧为主, 诱痛后使用吗啡使明显抑制上述核团的FLN。
3 讨 论
三叉神经系统的痛刺激从外周向中枢传导的过程经过第一级双极神经元，第二级三叉神经感觉核簇，第三级丘脑腹后区神经元后到达大脑皮质的躯体感觉区[6]，产生了痛觉。本研究发现，在二级传导通路核团上，FLN主要出现在sp5c的第Ⅰ、Ⅱ层，少量出现在第Ⅴ层。Takemura等[2,7,8] 观察到痛传入神经纤维主要终止在尾侧亚核的Ⅰ、Ⅱ层；尾侧亚核Ⅰ、Ⅱ层是痛感受神经元的分布区[7,8]，第Ⅲ、Ⅳ层主要是非伤害性神经元的分布区，提示尾侧亚核与头面部的初级传入尤其是痛(伤害性刺激) 传入有密切联系。因此,本实验结果对sp5c尤其是第Ⅱ层在牙痛痛觉的传导和调节中所起的关键作用，提供了形态学的证据。
, http://www.100md.com
本实验进一步观察到：FLN阳性颗粒主要密集分布在尾侧亚核，而且极间核、口核和感觉主核同样可见到FLN的分布。以前的研究结果认为三叉神经脑干复合体中只有尾侧亚核参与了牙痛信息的中枢传导，极间核、口核、感觉主核等其它的亚核并未在牙痛中起作用[9]。本实验与既往的研究结果不同,其原因可能是由于实验中采用的动物模型、刺激的类型及诱导的疼痛的强度不同所致。例如在实验过程中我们观察到大鼠对热刺激诱发的牙髓炎疼痛反应较为剧烈，出现嘶叫、呼吸急促、烦燥等躯体反应，这可能是因为本实验诱发的疼痛程度较强，诱发了极间核、口核、感觉主核内的痛感受神经元的反应。据此，我们认为除了尾侧亚核外，三叉神经脊束核的其他亚核亦参与了牙痛信息的中枢传导和调节。
本研究还发现Fos蛋白在孤束核、蓝斑、臂旁核、室旁核、中央杏仁核、中脑导水管周围灰质等非特异性核团内也有表达。但实验中未能发现丘脑腹后内侧核核团内有FLN阳性颗粒的出现，而在大脑皮质层躯体感觉区却有FLN的出现。这一结果与丘脑的腹后内侧核是三叉神经伤害性刺激向大脑皮质层投射的中继核的传统观点有差异[8], 这提示传导痛觉的Fos样神经元由二级传入后可能并未中转于腹后内侧核，而是通过其它的核团，如臂旁核等投射到感觉皮层，即可能通过c-fos以外的途径将痛觉传到最高中枢。
, http://www.100md.com
本实验的结果提示：除了三叉神经脑干复合体外，孤束核、蓝斑、臂旁核、室旁核、中央杏仁核等核团亦参与了牙髓炎疼痛的中枢传导及调控作用。这些核团的共同特点是：它们是内脏活动的中继核团，参与内脏的调节活动。结合神经解剖学研究结果,可以认为三叉神经系统与内脏核团间形成的某些旁路，参与了三叉神经系统的调节作用[10]。
基金项目：中山医科大学科研基金(1996)
作者简介：林正梅(1966-)，女，广东梅州人，硕士，讲师.
参考文献：
[1] Hu J W. Response properties of nociceptive and non-nociceptive neurons in the rat's trigeminal subnucleus caudalis (medullary dorsal horn) related to cutaneous and deep craniofacial afferent stimulation and modulation by diffuse noxious inhibitory controls[J]. Pain, 1990, 41(3):331.
, 百拇医药
[2] Takemura M, Nagase Y, Yoshida A, et al. The central projections of the monkey tooth pulp afferent neurons[J]. Somatosens Mot Res, 1993, 10(2):217.
[3] Morgan J I, Curran T. Stimulus-transcription coupling in the nervous system: involvement of the inducible proto-oncogenes fos and jun[J]. Annu Rev Neurosci, 1991, 14(1):421.
[4] Wallois F, Gros F, Masmoudi K ,et al. C-Fos-like immunoreactivity in the cat brainstem evoked by sneeze-inducing air puff stimulation of the nasal mucosa[J]. Brain Res,1995,687(1～2):143.
, http://www.100md.com
[5] 林正梅，凌均，凌征宇,等. 实验性牙髓炎疼痛动物模型的建立[J]. 广东牙病防治杂志，1999，7(4):249.
[6] Marota J J, Crosby G, Uhl G R. Selective effects of pentobarbital and halothane on c-fos and jun-B gene expression in rat brain[J]. Anesthesiology, 1992, 77(2):365.
[7] Coimbra F, Coimbra A. Dental noxious input reaches the subnucleus caudalis of the trigeminal complex in the rat, as shown by c-fos expression upon thermal or mechanical stimulation[J]. Neurosci Lett, 1994, 173(1～2):201.
, 百拇医药
[8] Dong W K, Chudler E H, Kawakami Y. Tooth pulp-evoked potentials in the trigeminal brainstem nuclear complex[J]. Brain Res, 1990, 529(1～2):131.
[9] Allen G V, Barbrick B, Esser M J. Trigeminal-parabrachial connections: possible pathway for nociception-induced cardiovascular reflex responses[J]. Brain Res, 1996, 715(1～2):125.
[10] Bouhassira D, Villanueva L, Le Bars D. Effects of systemic morphine on diffuse noxious inhibitory controls: role of the periaqueductal grey[J]. Eur J Pharmacol, 1992, 216(2):149.
收稿日期：1999-12-22, http://www.100md.com
单位：中山医科大学附属光华口腔医院内科， 广东 广州 510055
关键词：牙髓炎；病理学；神经传导；基因；c-fos
中山医科大学学报000406
摘 要：【目的】 了解实验性牙髓炎疼痛信号在中枢的传导特点。【方法】 应用免疫组织化学方法检测牙髓炎疼痛诱发中枢神经系统(central nerve system, CNS)c-fos的表达。【结果】 牙髓炎疼痛能诱导c-fos在CNS内呈时间依赖性表达。诱痛后2 h为Fos免疫阳性神经元(Fos-like immunoreactivity neuron, FLN)的表达高峰，4 h左右开始减弱。FLN除了密集分布在三叉神经脊束核尾侧亚核(nucleus of the spinal tract of the trigeminal nerve,caudal part， sp5c)的Ⅰ、Ⅱ层外，极间核、口核、感觉主核、躯体感觉皮层等可见FLN的表达；臂旁核、室旁核、中央杏仁核等与痛调节有关的内脏中继核团亦可见FLN的表达。【结论】 在三叉神经脑干复合体中，所有三叉神经脊束核均参与了牙痛的传导，但以尾侧亚核的第二层为主；此外，与内脏调节有关的核团亦参与了牙痛的传导和调节作用。
, 百拇医药
中图分类号：R781.31 文献标识码： A
文章编码：1000-257X(2000)04-0256-04
Expression and Effect of c-fos Gene in Central Nerve System Induced by Experimental Pulpitis Pain
LIN Zheng-mei, CHENG Bin, LING Jun-qi, CHEN Xiao-hua
(Guanghua Hospital of Stomatology, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510055, China)
Abstract： 【Objective】 To investigate the transmission signal of the experimental pulpitis pain. 【Method】 The immunohistochemical method was used to detect Fos expression in Central Nerve System(CNS) induced by pulpitis pain. 【Results】 Time-dependant expression of c-fos in CNS induced by pulpitis pain was observed. The peak of Fos-like immunoreactivity neuron(FLN) appeared 2 hours after the stimulation. FLN densely distributed not only in the Ⅰ、Ⅱ layers of trigeminal caudal nucleus, but also in interpolar nucleus, oral nucleus, main sensory and body cerebral cortex. FLN were also seen in the nucleus associated with pain regulation such as parabrachial nucleus and nucleus of solitary tract. 【Conclusion】 The neurons of trigeminal brainstem complex are involved in transduction of dental pain signal, with the dominant role played by the second layer of caudalis. Some nucleus related to the regulation of viscera are taken part in this process.
, 百拇医药
Key words:pulpitis / pathology; neural conduction; gene, c-fos
牙髓炎是最常见的口腔疾病之一，它具有冷热刺激痛、自发痛、夜间痛及放散痛等显著的疼痛特点。但目前牙痛信号在二级神经元(三叉神经复合体)内的传导途经仍未明确。Hu等[1]根据神经解剖学和电生理学研究结果提出，三叉神经脊束核是面口部浅感觉信号的中继核团，尤其三叉神经脊束核尾侧亚核(nucleus of the spinal tract of the trigeminal nerve,caudal part， sp5c) 是面口部痛觉信号传入的重要驿站；而Takemura等[2]发现，猴牙髓传入神经在尾侧亚核仅有稀少投射，因而认为sp5c甚至整个三叉神经脊束核在牙痛信号传导中的作用仍有待明确。
c-fos基因与疼痛密切相关, 是细胞信息传递过程中的“核内第三信使”，它能将细胞外短时程的剌激转换成长时程的细胞效应，研究发现在外周刺激所引起的神经元活动过程中，c-fos基因被激活并表达Fos蛋白[3]，用免疫组织化学方法可检测Fos蛋白在中枢神经系统(Central Nerve Systen，CNS)内的表达及分布特点，从而可显示中枢神经系统内的功能通路[4]。本文拟在建立实验性牙髓炎疼痛模型的基础上，用免疫组织化学方法检测脑内Fos免疫阳性神经元(Fos-like immunoreactivity neuron，FLN)的分布及规律，以了解牙痛刺激信号在中枢内的传导途经，初步探讨牙痛的中枢传导机制。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 动物分组与处理
空白对照组(A组)：9只SD大白鼠，不作任何处理，安静环境下饲养；牙髓炎诱痛组(B组)：45只SD大白鼠，均先建立实验性牙髓炎模型，封细菌内毒素后24 h于乙醚麻醉下用烧热的充填器反复刺激牙唇面，直到清醒，并观察其嘶叫情形，诱痛后存活时间与动物数分别为0.5 h(9只)、1 h(9只)、2 h(9只)、4 h(9只)、8 h(9只)；吗啡注射组(C组)：9只SD大白鼠，先建立实验性牙髓炎诱痛模型，在热刺激前0.5 h腹腔注射吗啡(10 mg/kg)，诱痛后存活2 h。
1.2 取 材
各组动物存活至预定时间后行腹腔麻醉，经质量浓度40 g/L中性多聚甲醛心脏灌注固定，断头，用大鼠脑立体定位仪定位，取块，恒冷冰冻切片机连续切片，40 μm厚，用体积分数3 mL/L H2O2接片，待处理。
, http://www.100md.com
1.3 免疫组织化学染色步骤
上述切片用LSAB法及GDN(硫酸镍铵加强染色)法进行漂染。实验步骤简述如下：切片用1 mL正常羊血清(含3 μL Tritone X-100)4 ℃下孵育0.5 h；转入稀释度为1∶1 000的Fos单抗溶液(Santa Cruz)，4 ℃下孵育24 h；转入二抗溶液(生物素标记的抗小鼠IgG)，4 ℃下孵育24 h；转入三抗溶液(辣根过氧化酶标记的链霉卵白素复合物)，室温下轻摇2 h；DAB法显色，缓慢加入硫酸镍铵葡萄糖氧化酶混合液加强染色；裱片；室温下风干，梯度脱水，透明；封片。实验中用PBS代替一抗作阴性对照。
1.4 Fos表达的测量
核团内神经元细胞核呈棕黑色染色者为阳性细胞；高倍镜下(×40)在一个核团内随机选择5个视野，利用测试网格计算每个视野中的阳性颗粒数，再取5个视野的平均值，则为该核团的平均阳性颗粒数。
, 百拇医药
1.5 统计学处理
q检验(Newman-keuls法)，检验水准双侧α=0.05。
2 结 果
2.1 Fos在实验性牙髓炎鼠中枢的表达
在牙髓炎症情况下施予反复热刺激，实验鼠CNS内c-fos基因被激活，表现为各核团出现数量不等的FLN(图1、表1)。从sp5c、孤束核(nucleus of solitary tract)、室旁核(paraventricular nucleus)、臂旁核(parabrachial nucleus)、大脑皮层(cerebral cortex)这5个有代表性的核团观察到：诱痛后0.5 h， FLN的数量开始增多；1～2 h FLN的数量达到高峰；4 h后FLN的数量开始减少，直至8 h FLN数量又基本恢复至未刺激时的状态。其余核团也观察到类似的现象，说明FLN在脑内各核表达的数量呈时间依赖性。
, http://www.100md.com
表1 FLN在大鼠中枢系统内的表达
Table 1 Expression of FLN in rat's CNS Time
0.5h
1h
2h
4h
8h
Caudalis
+
+ + +
+ + +
+ +
, http://www.100md.com
+
Interpolaris
-
+
+
-
-
Oralis
-
+
+
-
-
Principal sensory nucleus
, http://www.100md.com
-
+
+
-
-
Nucleus of solitary tract
+
+ +
+ +
+
+
Periphery gray of central
+
, 百拇医药
+
+
-
-
canal
Paraventricular nucleus
+
+ +
+ +
+
-
Parabrachial nucleus
+
, http://www.100md.com
+ +
+ +
+
-
Locus ceruleus
+
+
+
+
-
Cerebral cortex
+
+ +
, http://www.100md.com
+ +
+
-
2.2 各核团FLN分布的特点
2.2.1 三叉神经脊束核尾侧亚核 空白对照组的sp5c内仅见极少量的FLN分布(5.4±2.8)。牙髓炎疼痛后2 h，sp5c的Ⅰ、Ⅱ层背腹侧和中间部分可见较为密集的FLN(72.8±9.7，P<0.05)，其分布大致呈新月形；在Ⅲ至Ⅴ层见少量的FLN，第Ⅴ层内的FLN细胞体较大(图1A)；对侧亦可见少量的FLN，主要在中间部。诱痛后应用吗啡，相应核团FLN数量明显减少，与空白对照组相近(7.3±2.5，P>0.05)。
图1 牙髓炎诱痛后2 h中枢神经系统内Fos的表达
, http://www.100md.com
Fig.1 Fos expressed in central nerve system after 2h of the pulpitis pain
A: Fos distributed densely in the Ⅰ and Ⅱ layers of the trigeminal caudalis. (LSAB+GDN,×100)； B: Fos expressed in the trigeminal interpolaris. (LSAB+GDN,×100)； C: Fos expressed largely in the parabrachial neucleus. (LSAB+GDN,×100)； D: Fos appeared in the cerebral cortex. (LSAB+GDN,×50)
2.2.2 三叉神经脊束核的其它亚核 牙髓炎诱痛后2 h，感觉主核(principal sensory nucleus)、口核(oralis)、极间核(interpolaris)(图1B)可见少量至中等量的FLN出现(见表1)，诱痛后使用吗啡能抑制这些核团的FLN的出现。
, 百拇医药
2.2.3 其它核团 牙髓炎诱痛后2 h，蓝斑(locus ceruleus)、孤束核(nucleus of solitary)、臂旁核(parabrachial nucleus，图1C)、中脑导水管周围灰质(periphery gray of central canal)、室旁核(paraventricular nucleus)及大脑躯体感觉皮质(cerebral cortex，图1D)等均可见中等量至大量的FLN (见表1)，以同侧为主, 诱痛后使用吗啡使明显抑制上述核团的FLN。
3 讨 论
三叉神经系统的痛刺激从外周向中枢传导的过程经过第一级双极神经元，第二级三叉神经感觉核簇，第三级丘脑腹后区神经元后到达大脑皮质的躯体感觉区[6]，产生了痛觉。本研究发现，在二级传导通路核团上，FLN主要出现在sp5c的第Ⅰ、Ⅱ层，少量出现在第Ⅴ层。Takemura等[2,7,8] 观察到痛传入神经纤维主要终止在尾侧亚核的Ⅰ、Ⅱ层；尾侧亚核Ⅰ、Ⅱ层是痛感受神经元的分布区[7,8]，第Ⅲ、Ⅳ层主要是非伤害性神经元的分布区，提示尾侧亚核与头面部的初级传入尤其是痛(伤害性刺激) 传入有密切联系。因此,本实验结果对sp5c尤其是第Ⅱ层在牙痛痛觉的传导和调节中所起的关键作用，提供了形态学的证据。
, http://www.100md.com
本实验进一步观察到：FLN阳性颗粒主要密集分布在尾侧亚核，而且极间核、口核和感觉主核同样可见到FLN的分布。以前的研究结果认为三叉神经脑干复合体中只有尾侧亚核参与了牙痛信息的中枢传导，极间核、口核、感觉主核等其它的亚核并未在牙痛中起作用[9]。本实验与既往的研究结果不同,其原因可能是由于实验中采用的动物模型、刺激的类型及诱导的疼痛的强度不同所致。例如在实验过程中我们观察到大鼠对热刺激诱发的牙髓炎疼痛反应较为剧烈，出现嘶叫、呼吸急促、烦燥等躯体反应，这可能是因为本实验诱发的疼痛程度较强，诱发了极间核、口核、感觉主核内的痛感受神经元的反应。据此，我们认为除了尾侧亚核外，三叉神经脊束核的其他亚核亦参与了牙痛信息的中枢传导和调节。
本研究还发现Fos蛋白在孤束核、蓝斑、臂旁核、室旁核、中央杏仁核、中脑导水管周围灰质等非特异性核团内也有表达。但实验中未能发现丘脑腹后内侧核核团内有FLN阳性颗粒的出现，而在大脑皮质层躯体感觉区却有FLN的出现。这一结果与丘脑的腹后内侧核是三叉神经伤害性刺激向大脑皮质层投射的中继核的传统观点有差异[8], 这提示传导痛觉的Fos样神经元由二级传入后可能并未中转于腹后内侧核，而是通过其它的核团，如臂旁核等投射到感觉皮层，即可能通过c-fos以外的途径将痛觉传到最高中枢。
, http://www.100md.com
本实验的结果提示：除了三叉神经脑干复合体外，孤束核、蓝斑、臂旁核、室旁核、中央杏仁核等核团亦参与了牙髓炎疼痛的中枢传导及调控作用。这些核团的共同特点是：它们是内脏活动的中继核团，参与内脏的调节活动。结合神经解剖学研究结果,可以认为三叉神经系统与内脏核团间形成的某些旁路，参与了三叉神经系统的调节作用[10]。
基金项目：中山医科大学科研基金(1996)
作者简介：林正梅(1966-)，女，广东梅州人，硕士，讲师.
参考文献：
[1] Hu J W. Response properties of nociceptive and non-nociceptive neurons in the rat's trigeminal subnucleus caudalis (medullary dorsal horn) related to cutaneous and deep craniofacial afferent stimulation and modulation by diffuse noxious inhibitory controls[J]. Pain, 1990, 41(3):331.
, 百拇医药
[2] Takemura M, Nagase Y, Yoshida A, et al. The central projections of the monkey tooth pulp afferent neurons[J]. Somatosens Mot Res, 1993, 10(2):217.
[3] Morgan J I, Curran T. Stimulus-transcription coupling in the nervous system: involvement of the inducible proto-oncogenes fos and jun[J]. Annu Rev Neurosci, 1991, 14(1):421.
[4] Wallois F, Gros F, Masmoudi K ,et al. C-Fos-like immunoreactivity in the cat brainstem evoked by sneeze-inducing air puff stimulation of the nasal mucosa[J]. Brain Res,1995,687(1～2):143.
, http://www.100md.com
[5] 林正梅，凌均，凌征宇,等. 实验性牙髓炎疼痛动物模型的建立[J]. 广东牙病防治杂志，1999，7(4):249.
[6] Marota J J, Crosby G, Uhl G R. Selective effects of pentobarbital and halothane on c-fos and jun-B gene expression in rat brain[J]. Anesthesiology, 1992, 77(2):365.
[7] Coimbra F, Coimbra A. Dental noxious input reaches the subnucleus caudalis of the trigeminal complex in the rat, as shown by c-fos expression upon thermal or mechanical stimulation[J]. Neurosci Lett, 1994, 173(1～2):201.
, 百拇医药
[8] Dong W K, Chudler E H, Kawakami Y. Tooth pulp-evoked potentials in the trigeminal brainstem nuclear complex[J]. Brain Res, 1990, 529(1～2):131.
[9] Allen G V, Barbrick B, Esser M J. Trigeminal-parabrachial connections: possible pathway for nociception-induced cardiovascular reflex responses[J]. Brain Res, 1996, 715(1～2):125.
[10] Bouhassira D, Villanueva L, Le Bars D. Effects of systemic morphine on diffuse noxious inhibitory controls: role of the periaqueductal grey[J]. Eur J Pharmacol, 1992, 216(2):149.
收稿日期：1999-12-22, http://www.100md.com