筛选中药诱导细菌L型的结果观察
作者：邓维秀 杨靖 张克兰 裴德翠
单位：邓维秀 杨靖 裴德翠 郧阳医学院微生物学教研室 十堰 442000 ；张克兰 十堰市太和医院药剂科
关键词：大黄；黄连；丹参；板蓝根；L型菌；微生物敏感性试验
郧阳医学院学报990205摘 要 目的：为进一步探讨中药诱导细菌L型及其临床意义。方法：用大黄、黄连、丹参、板蓝根生药制成10%煎剂。经药敏试验(K-B纸片法)与筛选，尔后再以不同浓度稀释经纸片法诱导金葡菌、痢疾杆菌、大肠杆菌形成L型。结果：经药敏试验筛选，三种中药浓度均在40mg/片和50 mg/片诱导L型菌落及形态较典型。结论：大黄、黄连、丹参可使痢疾杆菌、大肠杆菌形成L型，提示临床用中药治疗急、慢性感染无效时，也要注意检查是否细菌变为L型及必要时调整用药，以免造成疾病迁延与再发。
中国图书资料分类法分类号 R372
, 百拇医药
Observations on Screened Traditional Chinese
Herb Induced L-type Bacteria
Deng Weixiu,Yang Jing,Zhang Kelan,et al
(Teaching and Research Section of Microboology,Yunyang Medical College Shiyan 442000)
Abstract Objective:To make a further study of the induction of L-type bacteria with the traditional Chinese herbs and its clinical significance.Methods:A 10% decoction was made up from coptis chinensis,paeonol,and soon.After the skin test and screening,the decoction was diluted at different concentrations so that staphylococus aureus,Bacillus dysenteriae and Bacillus coli could be induced to form bacteria L.Results:More typical colony and form of the induced bacteria were obtainal when the three drugs had a concentration of 40 mg or 50 mg per pill.Conclusion:The three kinds of drug can change Bacillus dysenteriae and Bacillus coli into L-type bacteria,including that it must be made sure whether bacteria L develop when the clinical treatmant for acute or chronic infections with the traditional Chinese herbs does not work .Necessary drug regulation shoud be done to avoid the progression and relapse if there is the development or L-type bacteria.
, 百拇医药
Key words Rhevm Palmatum;Coptis Chinensis;Salvia Miltiorrhiza;Radix Isatidis;L Forms;Microbiol Sensitivity Tests
众所周知，中药临床常用治疗各种慢性感染性疾病，疗效尚佳。尤其是对于易产生耐药性的金葡菌、痢疾杆菌等感染。目前国内、外有大量资料报答，疾病迁延再发与细菌转变为L型有关[1]。L型体内、外多种因素可诱导其形成。体外常用抗生素、溶菌酶、补体加抗体等，且研究报告较多，但中药则甚少。作者曾实验观察大黄、黄连可诱导金葡菌形成L型[2]。该中药对其他细菌是否有相同作用，以及其他中药能否诱导该菌形成L型，目前尚鲜有报道。为此作者选择了具有广谱抗菌作用的四种中药(大黄、黄连、丹参、板蓝根)分别对金葡菌、痢疾杆菌、大肠杆菌进行了药敏试验与筛选，以及L型诱导试验。观察该中药诱导该菌转变成L型的情况，以便为临床用药提供参考。并提示临床应用中药治疗慢性感染性疾病无效时，也要注意检查是否细菌转变为L型，必要时可调整用药，以免造成疾病迁延再发。现报告如下。
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1 材料和方法
1.1 菌种
金黄色葡萄球菌Cowan Ⅰ(简称金葡菌)、福氏痢疾杆菌Ⅱ型(简称痢疾杆菌)和大肠杆菌ATCC25912。分别由蚌埠医学院微生物学教研室、十堰市卫生防疫站和十堰市太和医院检验科提供。
1.2 中药液
称取大黄(湖北产)、黄连(四川产)、丹参(四川产)、板蓝根(四川产)各10g，切细加10倍冷水浸泡30 min，然后加热到100 ℃持续30min后过滤。药渣重复处理一次，废弃。将两次滤液合并，蒸发浓缩到10 ml(每毫升相当于1 g中药)为原液，将原液再浓缩5倍(每毫升相当于5g中药)为浓缩液。煮沸消毒分装小瓶，放冰箱备用。
1.3 纸片
武汉产滤纸(新华牌)直径6mm，以双蒸水(pH=0)稀释大黄、黄连浓缩液及原液，分别制成10 mg、20mg、30mg、40mg和50mg 1片的药片，分装小瓶，放冰箱备用。
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1.4 L型固体培养基
按文献[3]操作。
1.5 中药药敏试验与筛选(K-B纸片法)
取培养24 h金葡菌、痢疾杆菌和大肠杆菌菌落，用无菌0.85%盐水稀释成1.5～1.6亿/ml的细菌悬液，分别以棉签沾湿菌液化普通平板3只，贴浸有中药液的纸片，37 ℃培养24h观察抑菌圈大小进行筛选。取直径较大者再以同法贴不同浓度10mg、20mg、30mg、40mg和50mg 1片的药片供诱导试验选择。
1.6 L型诱导试验(纸片法)
金葡菌、痢疾杆菌、大肠杆菌普通肉汤培养6～8h，用无菌0.85%盐水稀释成约10000个细菌/ml的细菌悬液，吸0.1 ml(约1000个细菌)分别3只L型平板均匀涂布，，取经药敏试验筛选的中药，以不同浓度(10mg、20mg、30mg、40mg和50mg)药片药片贴平板，5%～10% CO2烛缸37 ℃培养，每日观察L型菌生长的情况。
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2 结果
2.1 药敏试验筛选结果
24 h后观察大黄、黄连、丹参原液对痢疾杆菌均有抑制作用, 抑菌圈平均直径分别为10～15 mm、10～16 mm、9～15 mm；40mg和50mg 1片的药片抑菌圈直径与前者相近；其余浓度抑菌圈直径较小(6～8 mm)。三种中药原液及40 mg和50 mg 1片的药片对大肠杆菌也有抑制作用，其抑菌圈直径略小于痢疾杆菌(平均为9～14mm、10～15mm、9～14mm)、其余浓度同前述。板蓝根原液及不同浓度对三种细菌均无抑制作用。丹参对金葡菌作用同板蓝根。
2.2 L型诱导试验结果
培养24 h后平板置光学显微镜低倍镜下观察，大黄、黄连、丹参40mg和50mg1片的药片诱导大肠杆菌和痢疾杆菌，在其抑菌圈内可见G型菌落。培养48h后可见L型菌落。G型及L型菌落涂片可见长丝体和巨形体、圆球体等明显多形性。细胞壁染色缺壁浓染，能通过0.22μm的除菌滤器。其余浓度诱导L型不典型。
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3 讨论
随着医学科学的快速发展，传统中药的研究也随之升华。临床治疗各种慢性感染性疾病倍受重视。我们根据中药理论及临床施治，选择具有广谱抗菌作用的四种中药(大黄、黄连、丹参、板蓝根)进行药敏试验与筛选。结果表明：前三种中药均对痢疾杆菌和大肠杆菌有明显抑制作用，与文献报道大致相同[4、5] 。但丹参对金葡菌作用则不明显，与文献[6]略有不同。板蓝根对三种细菌无明显抑制作用。这可能因试验菌种本身对两种中药的抑菌作用存在差异，以及是否对该中药产生耐药性，尚待进一步深入探讨。
文献报道大黄、黄连诱导金葡菌形成L型[2]。本文根据药敏试验筛选，用大黄、黄连、丹参诱导痢疾杆菌和大肠杆菌L型获成功。黄连的抗菌机理是由于抑制了细菌的RNA、蛋白质和脂质的生物合成及糖的酵解，并可与DNA形成聚合物，从而影响DNA的复制，干扰了细菌的繁殖[4]。大黄可能由于影响了吡啶核苷酸、黄素、核苷酸的硫基的酶系统抑制呼吸及抑制RNA、DAN和蛋白质合成[5]。总之，该中药对菌细胞壁皆无直接作用，但有关资料报道，各种诱导剂通过不同的作用方式能使细菌形成L型。由此可见，凡直接和间接作用于细胞壁而使细菌发生亚致死损伤的因素都有可能促使细菌转变为L型。
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大黄、黄连为肠道感染常用药[7]。丹参对痢疾杆菌也有抗菌作用。由于三种中药可使痢疾杆菌和大肠杆菌形成L型。故建议临床在以该中药治疗急、慢性感染无明显效果时，注意检查是否细菌变为L型，必要时调整用药，以免造成病情迁延、反复发作，影响疗效。
作者简介：邓维秀，女，1952年生，副教授
参考文献
1 林特夫，汤秀兰，倪语星等.金黄色葡萄球菌败血症与L型的关系.中华医学杂志，1983，63(8)：502
2 邓维秀，陈绪云，张克兰.大黄、黄连诱导金葡菌L型的实验观察.中华微生物和免疫学杂志，1991，11(6)：361
3 林特夫，黄谷良，汤秀兰等.苯甲异恶唑青霉素诱导金黄色葡萄球菌形成L型的生态观察和培养基改良.中华微生物学和免疫学杂志，1981，1(5)：324
4 周金黄主编.中药药理学.上海科学技术出版社，1986.99，186
5 王筠默主编.中药药理学 .上海科学技术出版社，1983.37
6 高玉桂，宋玉梅，杨友义等.丹参酮的药理.药学学报，1979，14(2)：75
7 魏长志，张来周，时淑平.黄连与香连丸的体外抑菌实验对比.山东中医杂志，1994，13(1)：34
(1999-01-02 收稿), http://www.100md.com
单位：邓维秀 杨靖 裴德翠 郧阳医学院微生物学教研室 十堰 442000 ；张克兰 十堰市太和医院药剂科
关键词：大黄；黄连；丹参；板蓝根；L型菌；微生物敏感性试验
郧阳医学院学报990205摘 要 目的：为进一步探讨中药诱导细菌L型及其临床意义。方法：用大黄、黄连、丹参、板蓝根生药制成10%煎剂。经药敏试验(K-B纸片法)与筛选，尔后再以不同浓度稀释经纸片法诱导金葡菌、痢疾杆菌、大肠杆菌形成L型。结果：经药敏试验筛选，三种中药浓度均在40mg/片和50 mg/片诱导L型菌落及形态较典型。结论：大黄、黄连、丹参可使痢疾杆菌、大肠杆菌形成L型，提示临床用中药治疗急、慢性感染无效时，也要注意检查是否细菌变为L型及必要时调整用药，以免造成疾病迁延与再发。
中国图书资料分类法分类号 R372
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Observations on Screened Traditional Chinese
Herb Induced L-type Bacteria
Deng Weixiu,Yang Jing,Zhang Kelan,et al
(Teaching and Research Section of Microboology,Yunyang Medical College Shiyan 442000)
Abstract Objective:To make a further study of the induction of L-type bacteria with the traditional Chinese herbs and its clinical significance.Methods:A 10% decoction was made up from coptis chinensis,paeonol,and soon.After the skin test and screening,the decoction was diluted at different concentrations so that staphylococus aureus,Bacillus dysenteriae and Bacillus coli could be induced to form bacteria L.Results:More typical colony and form of the induced bacteria were obtainal when the three drugs had a concentration of 40 mg or 50 mg per pill.Conclusion:The three kinds of drug can change Bacillus dysenteriae and Bacillus coli into L-type bacteria,including that it must be made sure whether bacteria L develop when the clinical treatmant for acute or chronic infections with the traditional Chinese herbs does not work .Necessary drug regulation shoud be done to avoid the progression and relapse if there is the development or L-type bacteria.
, 百拇医药
Key words Rhevm Palmatum;Coptis Chinensis;Salvia Miltiorrhiza;Radix Isatidis;L Forms;Microbiol Sensitivity Tests
众所周知，中药临床常用治疗各种慢性感染性疾病，疗效尚佳。尤其是对于易产生耐药性的金葡菌、痢疾杆菌等感染。目前国内、外有大量资料报答，疾病迁延再发与细菌转变为L型有关[1]。L型体内、外多种因素可诱导其形成。体外常用抗生素、溶菌酶、补体加抗体等，且研究报告较多，但中药则甚少。作者曾实验观察大黄、黄连可诱导金葡菌形成L型[2]。该中药对其他细菌是否有相同作用，以及其他中药能否诱导该菌形成L型，目前尚鲜有报道。为此作者选择了具有广谱抗菌作用的四种中药(大黄、黄连、丹参、板蓝根)分别对金葡菌、痢疾杆菌、大肠杆菌进行了药敏试验与筛选，以及L型诱导试验。观察该中药诱导该菌转变成L型的情况，以便为临床用药提供参考。并提示临床应用中药治疗慢性感染性疾病无效时，也要注意检查是否细菌转变为L型，必要时可调整用药，以免造成疾病迁延再发。现报告如下。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 菌种
金黄色葡萄球菌Cowan Ⅰ(简称金葡菌)、福氏痢疾杆菌Ⅱ型(简称痢疾杆菌)和大肠杆菌ATCC25912。分别由蚌埠医学院微生物学教研室、十堰市卫生防疫站和十堰市太和医院检验科提供。
1.2 中药液
称取大黄(湖北产)、黄连(四川产)、丹参(四川产)、板蓝根(四川产)各10g，切细加10倍冷水浸泡30 min，然后加热到100 ℃持续30min后过滤。药渣重复处理一次，废弃。将两次滤液合并，蒸发浓缩到10 ml(每毫升相当于1 g中药)为原液，将原液再浓缩5倍(每毫升相当于5g中药)为浓缩液。煮沸消毒分装小瓶，放冰箱备用。
1.3 纸片
武汉产滤纸(新华牌)直径6mm，以双蒸水(pH=0)稀释大黄、黄连浓缩液及原液，分别制成10 mg、20mg、30mg、40mg和50mg 1片的药片，分装小瓶，放冰箱备用。
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1.4 L型固体培养基
按文献[3]操作。
1.5 中药药敏试验与筛选(K-B纸片法)
取培养24 h金葡菌、痢疾杆菌和大肠杆菌菌落，用无菌0.85%盐水稀释成1.5～1.6亿/ml的细菌悬液，分别以棉签沾湿菌液化普通平板3只，贴浸有中药液的纸片，37 ℃培养24h观察抑菌圈大小进行筛选。取直径较大者再以同法贴不同浓度10mg、20mg、30mg、40mg和50mg 1片的药片供诱导试验选择。
1.6 L型诱导试验(纸片法)
金葡菌、痢疾杆菌、大肠杆菌普通肉汤培养6～8h，用无菌0.85%盐水稀释成约10000个细菌/ml的细菌悬液，吸0.1 ml(约1000个细菌)分别3只L型平板均匀涂布，，取经药敏试验筛选的中药，以不同浓度(10mg、20mg、30mg、40mg和50mg)药片药片贴平板，5%～10% CO2烛缸37 ℃培养，每日观察L型菌生长的情况。
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2 结果
2.1 药敏试验筛选结果
24 h后观察大黄、黄连、丹参原液对痢疾杆菌均有抑制作用, 抑菌圈平均直径分别为10～15 mm、10～16 mm、9～15 mm；40mg和50mg 1片的药片抑菌圈直径与前者相近；其余浓度抑菌圈直径较小(6～8 mm)。三种中药原液及40 mg和50 mg 1片的药片对大肠杆菌也有抑制作用，其抑菌圈直径略小于痢疾杆菌(平均为9～14mm、10～15mm、9～14mm)、其余浓度同前述。板蓝根原液及不同浓度对三种细菌均无抑制作用。丹参对金葡菌作用同板蓝根。
2.2 L型诱导试验结果
培养24 h后平板置光学显微镜低倍镜下观察，大黄、黄连、丹参40mg和50mg1片的药片诱导大肠杆菌和痢疾杆菌，在其抑菌圈内可见G型菌落。培养48h后可见L型菌落。G型及L型菌落涂片可见长丝体和巨形体、圆球体等明显多形性。细胞壁染色缺壁浓染，能通过0.22μm的除菌滤器。其余浓度诱导L型不典型。
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3 讨论
随着医学科学的快速发展，传统中药的研究也随之升华。临床治疗各种慢性感染性疾病倍受重视。我们根据中药理论及临床施治，选择具有广谱抗菌作用的四种中药(大黄、黄连、丹参、板蓝根)进行药敏试验与筛选。结果表明：前三种中药均对痢疾杆菌和大肠杆菌有明显抑制作用，与文献报道大致相同[4、5] 。但丹参对金葡菌作用则不明显，与文献[6]略有不同。板蓝根对三种细菌无明显抑制作用。这可能因试验菌种本身对两种中药的抑菌作用存在差异，以及是否对该中药产生耐药性，尚待进一步深入探讨。
文献报道大黄、黄连诱导金葡菌形成L型[2]。本文根据药敏试验筛选，用大黄、黄连、丹参诱导痢疾杆菌和大肠杆菌L型获成功。黄连的抗菌机理是由于抑制了细菌的RNA、蛋白质和脂质的生物合成及糖的酵解，并可与DNA形成聚合物，从而影响DNA的复制，干扰了细菌的繁殖[4]。大黄可能由于影响了吡啶核苷酸、黄素、核苷酸的硫基的酶系统抑制呼吸及抑制RNA、DAN和蛋白质合成[5]。总之，该中药对菌细胞壁皆无直接作用，但有关资料报道，各种诱导剂通过不同的作用方式能使细菌形成L型。由此可见，凡直接和间接作用于细胞壁而使细菌发生亚致死损伤的因素都有可能促使细菌转变为L型。
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大黄、黄连为肠道感染常用药[7]。丹参对痢疾杆菌也有抗菌作用。由于三种中药可使痢疾杆菌和大肠杆菌形成L型。故建议临床在以该中药治疗急、慢性感染无明显效果时，注意检查是否细菌变为L型，必要时调整用药，以免造成病情迁延、反复发作，影响疗效。
作者简介：邓维秀，女，1952年生，副教授
参考文献
1 林特夫，汤秀兰，倪语星等.金黄色葡萄球菌败血症与L型的关系.中华医学杂志，1983，63(8)：502
2 邓维秀，陈绪云，张克兰.大黄、黄连诱导金葡菌L型的实验观察.中华微生物和免疫学杂志，1991，11(6)：361
3 林特夫，黄谷良，汤秀兰等.苯甲异恶唑青霉素诱导金黄色葡萄球菌形成L型的生态观察和培养基改良.中华微生物学和免疫学杂志，1981，1(5)：324
4 周金黄主编.中药药理学.上海科学技术出版社，1986.99，186
5 王筠默主编.中药药理学 .上海科学技术出版社，1983.37
6 高玉桂，宋玉梅，杨友义等.丹参酮的药理.药学学报，1979，14(2)：75
7 魏长志，张来周，时淑平.黄连与香连丸的体外抑菌实验对比.山东中医杂志，1994，13(1)：34
(1999-01-02 收稿), http://www.100md.com
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