氢化物原子吸收法测定红细胞中硒含量的方法探讨
作者：祁 成 张裕曾 陈荣安
单位：祁成 东风汽车公司卫生防病中心 十堰 442000 ；张裕曾 陈荣安 同济医科大学劳动卫生教研室
关键词：硒；分光光度法，原子吸收；红细胞
郧阳医学院学报990227中图法分类号 O657.31
红细胞中硒含量的测定对于研究硒的生理功能具有重要意义[1]，但目前有关其测定方法的研究报道较少。氢化物原子吸收法(HG-AAS)用于微量元素硒的测定方法具有一定的优点，特别是近年来通过不断的研究改进，其应用范围不断扩大[2，3]。本文对应用HG-AAS测定红细胞中硒含量的方法进行了探讨，结果表明，该方法具有一定的实用价值。
1 仪器和试剂
, 百拇医药
原子吸收分光光度计(Varian Spetr AA 40P型)；VA-90气态原子化装置(同济医科大学研制)；硒、锌标准液(国家二级标准物)；硝酸(GR)、高氯酸(GR)、氯化钠(AR)、硼氢化钠(AR)、氢氧化钠(AR)。
2 样品处理
2.1 红细胞制备
取肝素抗凝血约3ml，分离血浆后，用生理盐水离心(3000转/min)洗涤三次，弃去血浆、白细胞、血小板等，最后一次弃去上层液体后加适量生理盐水稀释，氰化高铁法测其血红蛋白含量。
2.2 红细胞消化处理
取1 ml已进行蛋白定量分析的红细胞于三角烧瓶中，加入硝酸、高氯酸(4：1)的混合酸3 ml，置于电热恒温消化器内消化，温度控制140～160 ℃，待样品消化完全后，用10%盐酸洗入比色管中，定容至10ml。
, 百拇医药
3 样品测定
3.1 仪器工作条件
波长：196.0 nm；灯电流：10 mA；狭缝宽度：1 nm；火焰：空气乙炔焰(贫焰)；测量方式：峰面积；测量时间：6 s；载气：氮气；流量：0.8 L/min。
3.2 标准曲线配制
取1 ml硒标准液(1 ml=100 μg)以样品消化同样条件进行消化处理后，有10%盐酸配成含硒0.0 μg/L、5.0 μg/L、10.0 μg/L、20.0 μg/L的标准应用液系列；配制6%NaBH4溶液(含NaOH 5%)。将仪器调至最佳工作状态，各取5 ml标准液，按仪器工人条件分别测定各管，经仪器微机处理后即是标准曲线。
3.3 样品测试
, 百拇医药
取消化好的样品液5 ml，按标准液测定的相同条件，分别测定各管，由标准曲线得出样品中硒浓度。测定过程中，每测10个样品后，以10.0 μg/L的标准液进行较正。
3.4 结果计算
红细胞中硒含量(μg/KgHb)=(C/P)×10×1000
式中：C=仪器测得样品中硒浓度(μg/L)；P=红细胞中血红蛋白(Hb)含量(g/L)。
4 结果与分析
4.1 方法特征浓度
特征浓度是指在给定条件下，某种元素的水溶液能产生1%吸收(或吸光度0.0044)的浓度。本研究中得出硒测定的特征浓度为4.8×10-5(μg/ml/1%)。
, 百拇医药
4.2 方法精密度
取硒标准应用液(5.0，10.0 μg/L)分别测定10次,其精密度(变异系数)分别为2.6%,1.7%。
4.3 方法准确度
回收率测定：取4份样品，每个样品分为两份，其中一份加入一定量的标准液，同样条件消化处理后，分别测定硒浓度。结果见表1。
表1 回收率测定结果(单位：μg/L) 编号
样品测定值
加标量
加标后测定值
回收率(%)
1
, 百拇医药
10.82
4
5.29
112
2
10.76
4
15.00
106
3
5.44
4
9.10
, 百拇医药
92
4
8.34
4
12.44
103
抗干扰实验：氢化物法把H2Se从母液中以气态形式分离出来，因此，避免了那些不能生成气态氢化物元素的谱线干扰。但在分析复杂基体样品时，仍可能存在干扰问题。根据国内外文献及正常人血中化学成分含量[4]，测定了几种物质的干扰情况，结果表明，在与血中正常含量相近的浓度下，这些物质基本无干扰(见表2)。
表2 血中各成分对Se测定的干扰 加入成分
红细胞中正
, 百拇医药
常含量(mg/L)
干扰物浓
度(mg/L)
Se含量测定
结果(μg/L)
回收率(%)
-
-
-
8.59
-
Cu
0.75～1.31
, 百拇医药
1.0
7.23
84.1
Ni
0.048
0.048
8.42
98.0
Cr
0.037
0.048
9.12
106.1
, 百拇医药
Zn
14.2
20.0
8.22
95.6
4.4 测定结果
本次实验应用此方法对某铝厂工人进行了红细胞中硒含量测定，测得对照组工人RBC Se含量平均为453.0±62.3μg/KgHb(n=29);氟暴露工人RBCSe含量平均为410.8±64.6μg/KgHb(n=31),两者之间差异有显著意义,表明氟暴露对工人红细胞中硒含量有一定的影响。
小结：用HG-AAS测定红细胞中硒含量具有操作简便，测量速度快，干扰少等特点，从本次研究结果可看出方法灵敏度、准确度、精密度等均能满足微量分析的要求，具有一定的推广使用价值。 参考文献
1 夏奕明，赵新娥.硒的化学形式对人血中含硒成分的影响.营养学报，1993，15(2)：157
2 郝守进综述.氢化物原子吸收法测定硒的研究进展.国外医学卫生学分册，1992，19(2)：98
3 张裕增.大白鼠红细胞膜和红细胞中钙锌测定方法探讨.中国卫生检验杂志，1995，5(4)：216
4 李盛亮主编.原子吸收光谱法.上海科学技术出版社，1989，56：138
(1998-12-11 收稿), http://www.100md.com
单位：祁成 东风汽车公司卫生防病中心 十堰 442000 ；张裕曾 陈荣安 同济医科大学劳动卫生教研室
关键词：硒；分光光度法，原子吸收；红细胞
郧阳医学院学报990227中图法分类号 O657.31
红细胞中硒含量的测定对于研究硒的生理功能具有重要意义[1]，但目前有关其测定方法的研究报道较少。氢化物原子吸收法(HG-AAS)用于微量元素硒的测定方法具有一定的优点，特别是近年来通过不断的研究改进，其应用范围不断扩大[2，3]。本文对应用HG-AAS测定红细胞中硒含量的方法进行了探讨，结果表明，该方法具有一定的实用价值。
1 仪器和试剂
, 百拇医药
原子吸收分光光度计(Varian Spetr AA 40P型)；VA-90气态原子化装置(同济医科大学研制)；硒、锌标准液(国家二级标准物)；硝酸(GR)、高氯酸(GR)、氯化钠(AR)、硼氢化钠(AR)、氢氧化钠(AR)。
2 样品处理
2.1 红细胞制备
取肝素抗凝血约3ml，分离血浆后，用生理盐水离心(3000转/min)洗涤三次，弃去血浆、白细胞、血小板等，最后一次弃去上层液体后加适量生理盐水稀释，氰化高铁法测其血红蛋白含量。
2.2 红细胞消化处理
取1 ml已进行蛋白定量分析的红细胞于三角烧瓶中，加入硝酸、高氯酸(4：1)的混合酸3 ml，置于电热恒温消化器内消化，温度控制140～160 ℃，待样品消化完全后，用10%盐酸洗入比色管中，定容至10ml。
, 百拇医药
3 样品测定
3.1 仪器工作条件
波长：196.0 nm；灯电流：10 mA；狭缝宽度：1 nm；火焰：空气乙炔焰(贫焰)；测量方式：峰面积；测量时间：6 s；载气：氮气；流量：0.8 L/min。
3.2 标准曲线配制
取1 ml硒标准液(1 ml=100 μg)以样品消化同样条件进行消化处理后，有10%盐酸配成含硒0.0 μg/L、5.0 μg/L、10.0 μg/L、20.0 μg/L的标准应用液系列；配制6%NaBH4溶液(含NaOH 5%)。将仪器调至最佳工作状态，各取5 ml标准液，按仪器工人条件分别测定各管，经仪器微机处理后即是标准曲线。
3.3 样品测试
, 百拇医药
取消化好的样品液5 ml，按标准液测定的相同条件，分别测定各管，由标准曲线得出样品中硒浓度。测定过程中，每测10个样品后，以10.0 μg/L的标准液进行较正。
3.4 结果计算
红细胞中硒含量(μg/KgHb)=(C/P)×10×1000
式中：C=仪器测得样品中硒浓度(μg/L)；P=红细胞中血红蛋白(Hb)含量(g/L)。
4 结果与分析
4.1 方法特征浓度
特征浓度是指在给定条件下，某种元素的水溶液能产生1%吸收(或吸光度0.0044)的浓度。本研究中得出硒测定的特征浓度为4.8×10-5(μg/ml/1%)。
, 百拇医药
4.2 方法精密度
取硒标准应用液(5.0，10.0 μg/L)分别测定10次,其精密度(变异系数)分别为2.6%,1.7%。
4.3 方法准确度
回收率测定：取4份样品，每个样品分为两份，其中一份加入一定量的标准液，同样条件消化处理后，分别测定硒浓度。结果见表1。
表1 回收率测定结果(单位：μg/L) 编号
样品测定值
加标量
加标后测定值
回收率(%)
1
, 百拇医药
10.82
4
5.29
112
2
10.76
4
15.00
106
3
5.44
4
9.10
, 百拇医药
92
4
8.34
4
12.44
103
抗干扰实验：氢化物法把H2Se从母液中以气态形式分离出来，因此，避免了那些不能生成气态氢化物元素的谱线干扰。但在分析复杂基体样品时，仍可能存在干扰问题。根据国内外文献及正常人血中化学成分含量[4]，测定了几种物质的干扰情况，结果表明，在与血中正常含量相近的浓度下，这些物质基本无干扰(见表2)。
表2 血中各成分对Se测定的干扰 加入成分
红细胞中正
, 百拇医药
常含量(mg/L)
干扰物浓
度(mg/L)
Se含量测定
结果(μg/L)
回收率(%)
-
-
-
8.59
-
Cu
0.75～1.31
, 百拇医药
1.0
7.23
84.1
Ni
0.048
0.048
8.42
98.0
Cr
0.037
0.048
9.12
106.1
, 百拇医药
Zn
14.2
20.0
8.22
95.6
4.4 测定结果
本次实验应用此方法对某铝厂工人进行了红细胞中硒含量测定，测得对照组工人RBC Se含量平均为453.0±62.3μg/KgHb(n=29);氟暴露工人RBCSe含量平均为410.8±64.6μg/KgHb(n=31),两者之间差异有显著意义,表明氟暴露对工人红细胞中硒含量有一定的影响。
小结：用HG-AAS测定红细胞中硒含量具有操作简便，测量速度快，干扰少等特点，从本次研究结果可看出方法灵敏度、准确度、精密度等均能满足微量分析的要求，具有一定的推广使用价值。 参考文献
1 夏奕明，赵新娥.硒的化学形式对人血中含硒成分的影响.营养学报，1993，15(2)：157
2 郝守进综述.氢化物原子吸收法测定硒的研究进展.国外医学卫生学分册，1992，19(2)：98
3 张裕增.大白鼠红细胞膜和红细胞中钙锌测定方法探讨.中国卫生检验杂志，1995，5(4)：216
4 李盛亮主编.原子吸收光谱法.上海科学技术出版社，1989，56：138
(1998-12-11 收稿), http://www.100md.com