DNA银染法常出现的问题及解决办法
作者：朱名安 周新
单位：朱名安 郧阳医学院生物化学教研室 十堰 442000 ；周新 湖北医科大学附属第二医院医学检验系
关键词：
郧阳医学院学报990329 银染法是一种检测微量DNA的理想方法。该法既经济、简便、快速、灵敏，又具有无污染、分辨率高、结果可永久保存等优点[1，2]，适合于各种实验室开展应用。但是，在染色过程中，常可能出现一些问题，令结果的判断难以达到满意的效果。根据我们两年来的反复实践，探索出了一些常见问题的解决办法，现介绍如下：
1 显影不清晰或不显影
在样本或PCR扩增产物中，只有5 ng或更少的DNA均可经银染法清晰地显示出来。在操作过程中，应控制条件在最佳范围内，否则可能出现显影不清晰或不显影。这种问题可能为0.2%硝酸银染色后漂洗时间过长或漂洗过度，如果将漂洗时间控制在10 s左右完成，每步均用去离子水漂洗，可避免此类现象发生。一旦出现这种情况，可先用10%醋酸中止反应，再用去离子水洗弃中止液，然后进行硝酸银复染，重复漂洗、显影及中止反应步骤，一般仍能得到较为满意的效果，可省去再次电泳步骤。
2 背景发黄，颜色过深
这种现象可能有以下原因：(1)硝酸银染色后，漂洗时间过短或去离子水加的太少，多余的硝酸银未被漂弃；(2)硝酸银染色时间过长；(3)加显影液后显影时间过长，未及时用10%醋酸中止反应。可采取以下措施予以避免：(1)控制硝酸银染色步骤在30 min、温度30 ℃左右，加入的去离子水要盖过胶片0.5 cm以上，漂洗在10 s左右完成。(2)显影清晰后，及时中止反应，再用去离子水反复漂洗。(3)用预冷的显影液(4 ℃)可延缓显影时间，便于予控制显影过程及中止反应时间。(4)显影清晰后，用大量去离子水反复漂洗胶片，可省去止反应步骤，且条带更为清晰。
3 显影不均匀
在各个反应步骤中，均需轻轻摇晃，使胶片各处反应均匀，以避免显影不均匀发生。
总之，只要严格遵守操作，控制上述易出现问题的关键步骤及采取相应的补救措施，可得到满意结果。
参考文献
1 Braudt B,Greger V,Yandell,et al.A simple and nonradioactive method for detecting the Rb1.20 DNA polymorphism in the retinoblastoma gene. Am J Hum Genet,1992,51(6):1451
2 高玉彤，李茂德.检验微卫星不稳定性的银染色方法.临床与实验病理学杂志，1998，14(2)：193
(1999-03-14 收稿), http://www.100md.com
单位：朱名安 郧阳医学院生物化学教研室 十堰 442000 ；周新 湖北医科大学附属第二医院医学检验系
关键词：
郧阳医学院学报990329 银染法是一种检测微量DNA的理想方法。该法既经济、简便、快速、灵敏，又具有无污染、分辨率高、结果可永久保存等优点[1，2]，适合于各种实验室开展应用。但是，在染色过程中，常可能出现一些问题，令结果的判断难以达到满意的效果。根据我们两年来的反复实践，探索出了一些常见问题的解决办法，现介绍如下：
1 显影不清晰或不显影
在样本或PCR扩增产物中，只有5 ng或更少的DNA均可经银染法清晰地显示出来。在操作过程中，应控制条件在最佳范围内，否则可能出现显影不清晰或不显影。这种问题可能为0.2%硝酸银染色后漂洗时间过长或漂洗过度，如果将漂洗时间控制在10 s左右完成，每步均用去离子水漂洗，可避免此类现象发生。一旦出现这种情况，可先用10%醋酸中止反应，再用去离子水洗弃中止液，然后进行硝酸银复染，重复漂洗、显影及中止反应步骤，一般仍能得到较为满意的效果，可省去再次电泳步骤。
2 背景发黄，颜色过深
这种现象可能有以下原因：(1)硝酸银染色后，漂洗时间过短或去离子水加的太少，多余的硝酸银未被漂弃；(2)硝酸银染色时间过长；(3)加显影液后显影时间过长，未及时用10%醋酸中止反应。可采取以下措施予以避免：(1)控制硝酸银染色步骤在30 min、温度30 ℃左右，加入的去离子水要盖过胶片0.5 cm以上，漂洗在10 s左右完成。(2)显影清晰后，及时中止反应，再用去离子水反复漂洗。(3)用预冷的显影液(4 ℃)可延缓显影时间，便于予控制显影过程及中止反应时间。(4)显影清晰后，用大量去离子水反复漂洗胶片，可省去止反应步骤，且条带更为清晰。
3 显影不均匀
在各个反应步骤中，均需轻轻摇晃，使胶片各处反应均匀，以避免显影不均匀发生。
总之，只要严格遵守操作，控制上述易出现问题的关键步骤及采取相应的补救措施，可得到满意结果。
参考文献
1 Braudt B,Greger V,Yandell,et al.A simple and nonradioactive method for detecting the Rb1.20 DNA polymorphism in the retinoblastoma gene. Am J Hum Genet,1992,51(6):1451
2 高玉彤，李茂德.检验微卫星不稳定性的银染色方法.临床与实验病理学杂志，1998，14(2)：193
(1999-03-14 收稿), http://www.100md.com