低温贮存离体颅骨方法的探讨——附20例分析
作者：段华汛 刘立军 汤合莲 方培海 杨成义 王坤
单位：段华汛 刘立军 方培海 杨成义 王坤 郧阳医学院教学医院襄樊市第一人民医院 神经外科；汤合莲 病理科 襄樊 441000
关键词：低温保藏；颅骨；脑损伤
郧阳医学院学报990310中国图书资料分类法分类号 R651.15
目前颅脑损伤开颅术后骨缺损的修补采用自体骨瓣回植的方法愈渐增多，运用简便实用的方法贮存离体颅骨能为临床提供更多的自体骨回植机会。笔者根据低温贮存骨瓣需具备的基本条件，选用生活冰箱的冷冻室作为贮存容器，经20例临床应用观察，取得良好的治疗效果。
1 资料与方法
本组20例闭合性颅脑损伤，均有脑挫伤及颅内血肿，急诊手术去骨瓣减压。其中男性16例，女性4例；年龄9～53岁，平均31.7岁。手术取骨瓣范围6～8 cm×8～10cm，骨瓣取下后彻底清除其外表骨膜组织，并以生理盐水洗净表面血污，擦干水迹置入消毒甘油中浸泡30 min，取出擦干，用无菌小纱块包裹，再以备好的无菌塑料袋或无菌手术手套包裹两层，并注上患者姓名及取骨时间，立即送入冰箱冷冻室速冻。贮存温度-20 ℃，持续保持18～108d。用时取出，以40 ℃恒温生理盐水复温，而后将其放入1：1000洗必泰液中浸泡20～30min，在骨瓣上贯穿钻十余个小孔备用。
, 百拇医药
2 结果
2.1 细菌培养
每例低温贮存骨瓣再植前取出咬除约黄豆大小骨作细菌培养，温箱35 ℃恒温培养7 d后观察，均无细菌生长。
2.2 治疗效果
20例分别在首次开颅后的术后18～108 d作骨瓣回植手术，术后常规使用抗生素1周，无1例出现颅内感染情况，手术切口甲级愈合。术后追踪观察，3个月20例，半年17例，1年16例(4例失访)。术后及术后3个月、半年、1年分别摄颅骨X线片，与前片比较，3例骨瓣边缘有骨质吸收(即骨瓣缘与骨窗缘间隙稍有增宽)的现象。余13例的共同表现是骨瓣与骨窗缝密度逐渐增高，线影逐渐模糊，骨瓣密度基本无变化，无明显骨质密度减低迹象。
3 讨论
尽管颅骨缺损修补材料种类繁多，但在恢复颅骨正常形态，保持其生物相容性，满足人体生理及心理需要方面，最佳修补材料仍莫过于自体骨瓣的回植，寻找简便有效可靠的方法贮存离体骨瓣，是为颅骨缺损修复提供最佳修补材料的关键，低温贮存已在再植骨瓣的保存方面显露优势。目前采用的深低温贮骨方法效果可靠[1，2]，其既能保持骨瓣的生物活性，又可避免细菌污染之优点。但深低温设备价值昂贵，尚不能在基层医院普及利用。有报道国外学者以-20 ℃低温贮存骨运用于临床收到良好效果[3]，且也已有研究证明-20 ℃、-70 ℃、-196 ℃低温贮存的骨临床移植效果没有明显不同[3]。因此，选用-20 ℃低温环境贮存设体颅骨有一定的可行性。目前市场供应的生活冰箱，其工作性能基本可使冷冻室制冷效果达-20 ℃左右，具有冷藏骨的基本条件，可作为骨冷藏容器使用。
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低温贮存过程中，降温速率对冷藏的组织细胞存活率有较大影响。有关资历料认为，组织细胞在降温处理时，降温速率在1 ℃/min以下，则对细胞损害大；而降温速率在1～10 ℃/min时，则细胞成活率较高[3]。经测试薄层包裹的35 ℃骨瓣置于-20 ℃冰箱冷冻室中，其降温速率在2～3 ℃/min以下，属于对细胞损害较少的降温速率范围。
保持骨瓣在贮存过程中的无菌状态是保证骨瓣回植质量的重要环节，低温贮存在防细菌污染方面有独到之处。因为细菌代谢是在酶催化下进行，在低温环境中，菌体内酶的生物活性完全受到抑制，细菌代谢已处于静止状态。一般细菌的低温生存极限为-7°C[4]，尽管嗜冷菌可在较低温环境中生存，但在-20°C环境中，其生长繁殖完全中止，所以经多层包裹的骨瓣在-20°C贮存过程中可免受细菌侵袭。本组20例骨瓣冷藏后细菌培养无细菌生长，可佐证冰箱冷冻室的低温能保持骨瓣的无菌状态。此外，依据低温贮存的需要，将骨瓣贮存前后作相应的技术处理有助于保证骨瓣冷藏及回植的质量 。贮存前用防冻剂甘油浸泡骨瓣，有保护骨细胞减少冻害损伤作用[3]；先以无菌纱块包裹骨瓣可避免骨瓣与包装袋直接接触，以保持降温前骨瓣外周的干燥环境，有隔菌作用。但纱块包裹不可太厚，否则，冰点下骨瓣内水份气化，纱块有吸湿作用，不利于骨瓣内水份的保存；双层包装袋包裹，一则能隔菌，二则也可减少水份散发；在骨瓣回植前用1：1000洗必泰液浸泡骨瓣，是防止骨瓣在存取过程万一被细菌污染而采取的补偿灭菌措施；骨瓣在回植前，在其上钻十余个小孔，是为了使其回植后尽早恢复骨瓣板障的血液供应，以维持复温后骨瓣的生物活性。此外，贮存骨瓣的冰箱冷冻室最好专用，以避免其他物品的频繁存取增加细菌对骨瓣包裹体外表的污染机会。
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总之，笔者应用冰箱冷冻室贮存离体颅骨20例回植临床观察，确已获得良好效果，无一不良反应发生。在基层医院，利用-20 ℃冷冻室的生活冰箱贮存离体颅骨实为一种可行方法，为自体颅骨修补颅骨缺损提供了一个可行的途径。
参考文献
1 胡开树，蔡学见，陈静立.深低温冷藏自体颅骨成形的应用.中华神经外科杂志，1996，5：307
2 张 弘，刘芷明，朱 侠.自体颅骨低温冷藏再植研究与应用.中华神经外科杂志，1994，4：205
3 章崧英，王泽时，郑斯涌.实用低温学.北京：科学出版社，1994.38～183
4 余 贺.医学微生物学.北京：人民卫生出版社，1983.58
(1998-10-13 收稿), 百拇医药
单位：段华汛 刘立军 方培海 杨成义 王坤 郧阳医学院教学医院襄樊市第一人民医院 神经外科；汤合莲 病理科 襄樊 441000
关键词：低温保藏；颅骨；脑损伤
郧阳医学院学报990310中国图书资料分类法分类号 R651.15
目前颅脑损伤开颅术后骨缺损的修补采用自体骨瓣回植的方法愈渐增多，运用简便实用的方法贮存离体颅骨能为临床提供更多的自体骨回植机会。笔者根据低温贮存骨瓣需具备的基本条件，选用生活冰箱的冷冻室作为贮存容器，经20例临床应用观察，取得良好的治疗效果。
1 资料与方法
本组20例闭合性颅脑损伤，均有脑挫伤及颅内血肿，急诊手术去骨瓣减压。其中男性16例，女性4例；年龄9～53岁，平均31.7岁。手术取骨瓣范围6～8 cm×8～10cm，骨瓣取下后彻底清除其外表骨膜组织，并以生理盐水洗净表面血污，擦干水迹置入消毒甘油中浸泡30 min，取出擦干，用无菌小纱块包裹，再以备好的无菌塑料袋或无菌手术手套包裹两层，并注上患者姓名及取骨时间，立即送入冰箱冷冻室速冻。贮存温度-20 ℃，持续保持18～108d。用时取出，以40 ℃恒温生理盐水复温，而后将其放入1：1000洗必泰液中浸泡20～30min，在骨瓣上贯穿钻十余个小孔备用。
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2 结果
2.1 细菌培养
每例低温贮存骨瓣再植前取出咬除约黄豆大小骨作细菌培养，温箱35 ℃恒温培养7 d后观察，均无细菌生长。
2.2 治疗效果
20例分别在首次开颅后的术后18～108 d作骨瓣回植手术，术后常规使用抗生素1周，无1例出现颅内感染情况，手术切口甲级愈合。术后追踪观察，3个月20例，半年17例，1年16例(4例失访)。术后及术后3个月、半年、1年分别摄颅骨X线片，与前片比较，3例骨瓣边缘有骨质吸收(即骨瓣缘与骨窗缘间隙稍有增宽)的现象。余13例的共同表现是骨瓣与骨窗缝密度逐渐增高，线影逐渐模糊，骨瓣密度基本无变化，无明显骨质密度减低迹象。
3 讨论
尽管颅骨缺损修补材料种类繁多，但在恢复颅骨正常形态，保持其生物相容性，满足人体生理及心理需要方面，最佳修补材料仍莫过于自体骨瓣的回植，寻找简便有效可靠的方法贮存离体骨瓣，是为颅骨缺损修复提供最佳修补材料的关键，低温贮存已在再植骨瓣的保存方面显露优势。目前采用的深低温贮骨方法效果可靠[1，2]，其既能保持骨瓣的生物活性，又可避免细菌污染之优点。但深低温设备价值昂贵，尚不能在基层医院普及利用。有报道国外学者以-20 ℃低温贮存骨运用于临床收到良好效果[3]，且也已有研究证明-20 ℃、-70 ℃、-196 ℃低温贮存的骨临床移植效果没有明显不同[3]。因此，选用-20 ℃低温环境贮存设体颅骨有一定的可行性。目前市场供应的生活冰箱，其工作性能基本可使冷冻室制冷效果达-20 ℃左右，具有冷藏骨的基本条件，可作为骨冷藏容器使用。
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低温贮存过程中，降温速率对冷藏的组织细胞存活率有较大影响。有关资历料认为，组织细胞在降温处理时，降温速率在1 ℃/min以下，则对细胞损害大；而降温速率在1～10 ℃/min时，则细胞成活率较高[3]。经测试薄层包裹的35 ℃骨瓣置于-20 ℃冰箱冷冻室中，其降温速率在2～3 ℃/min以下，属于对细胞损害较少的降温速率范围。
保持骨瓣在贮存过程中的无菌状态是保证骨瓣回植质量的重要环节，低温贮存在防细菌污染方面有独到之处。因为细菌代谢是在酶催化下进行，在低温环境中，菌体内酶的生物活性完全受到抑制，细菌代谢已处于静止状态。一般细菌的低温生存极限为-7°C[4]，尽管嗜冷菌可在较低温环境中生存，但在-20°C环境中，其生长繁殖完全中止，所以经多层包裹的骨瓣在-20°C贮存过程中可免受细菌侵袭。本组20例骨瓣冷藏后细菌培养无细菌生长，可佐证冰箱冷冻室的低温能保持骨瓣的无菌状态。此外，依据低温贮存的需要，将骨瓣贮存前后作相应的技术处理有助于保证骨瓣冷藏及回植的质量 。贮存前用防冻剂甘油浸泡骨瓣，有保护骨细胞减少冻害损伤作用[3]；先以无菌纱块包裹骨瓣可避免骨瓣与包装袋直接接触，以保持降温前骨瓣外周的干燥环境，有隔菌作用。但纱块包裹不可太厚，否则，冰点下骨瓣内水份气化，纱块有吸湿作用，不利于骨瓣内水份的保存；双层包装袋包裹，一则能隔菌，二则也可减少水份散发；在骨瓣回植前用1：1000洗必泰液浸泡骨瓣，是防止骨瓣在存取过程万一被细菌污染而采取的补偿灭菌措施；骨瓣在回植前，在其上钻十余个小孔，是为了使其回植后尽早恢复骨瓣板障的血液供应，以维持复温后骨瓣的生物活性。此外，贮存骨瓣的冰箱冷冻室最好专用，以避免其他物品的频繁存取增加细菌对骨瓣包裹体外表的污染机会。
, http://www.100md.com
总之，笔者应用冰箱冷冻室贮存离体颅骨20例回植临床观察，确已获得良好效果，无一不良反应发生。在基层医院，利用-20 ℃冷冻室的生活冰箱贮存离体颅骨实为一种可行方法，为自体颅骨修补颅骨缺损提供了一个可行的途径。
参考文献
1 胡开树，蔡学见，陈静立.深低温冷藏自体颅骨成形的应用.中华神经外科杂志，1996，5：307
2 张 弘，刘芷明，朱 侠.自体颅骨低温冷藏再植研究与应用.中华神经外科杂志，1994，4：205
3 章崧英，王泽时，郑斯涌.实用低温学.北京：科学出版社，1994.38～183
4 余 贺.医学微生物学.北京：人民卫生出版社，1983.58
(1998-10-13 收稿), 百拇医药