转移性和非转移性食管癌组织中KAI1基因的表达
作者：李珊珊 方伟岗 晏梅 高冬玲 任秀花 闫爱华 沈琼
单位：李珊珊 晏梅 高冬玲(河南医科大学第一附属医院病理科,河南省肿瘤病理学重点实验室 郑州450052)；方伟岗(北京医科大学病理系 北京 100083；方伟岗(北京医科大学病理系 北京 100083)；闫爱华 任秀花 沈琼(河南医科大学癌前期研究室 郑州 450052)
关键词：基因，抑制，肿瘤转移；KAI1基因；食管肿瘤
河南医科大学学报000204
摘 要：目的：探讨KAI1基因与食管癌转移的关系。方法：应用原位杂交法分析KAI1基因在有淋巴结转移和无淋巴结转移的食管癌组织中的表达。结果：在有淋巴结转移和无淋巴结转移的食管癌组织中KAI1 mRNA的表达未见显著差异 (P>0.05)，且KAI1 mRNA表达与食管癌的分化无关(P>0.05)。结论：KAI1基因对食管癌转移的发生无抑制作用；KAI1基因的表达也与食管癌的分化无关。
, http://www.100md.com
分类号：R735.1
Expressions of KAI1 gene in metastatic and nonmetastatic esophageal cancer tissues
LI Shanshan,YAN Mei,GAO Dongling
(Department of Pathology,the First Affiliated Hospital,Henan Medical University,Zhengzhou 450052)
FANG Weigang
(Department of Pathology,Beijing Medical University,Beijing 100083)
, 百拇医药
REN Xiuhua,YAN Aihua,SHEN Qiong
(Department of Precancerous Studies,Henan Medical University,Zhengzhou 450052)
Abstract：Aim:To investigate the correlation of KAI1 gene with metastatic behavior of esophageal cancer.Methods:Expressions of KAI1 gene were examined by using in situ hybridization.Results:KAI1 mRNA expressions showed no difference between esophageal cancer with and without lymph node metastasis(P>0.05) and was not correlated with differentiation of esophageal cancer(P>0.05).Conclusion:KAI1 gene may not correlate with metastatic suppression and differentiation of esophageal cancer.
, 百拇医药
Key words：gene,suppressor,neoplasm; KAI1 gene; esophageal neoplasm▲
KAI1作为一个新的肿瘤转移抑制基因[1]，越来越引起人们的关注。该基因在结构上属于一个特殊的蛋白家族——TM4SF(transmembrane 4 superfamily or tetraspan superfamily)[2，3]，TM4SF蛋白具有4个高度保守的疏水区(跨膜位点)及一个大的细胞外N-糖基化位点，参与细胞与细胞和(或)细胞与细胞外基质的反应。这些特性对于肿瘤细胞的浸润和转移都有一定的关系。研究表明：KAI1基因表达降低与肿瘤细胞的浸润和转移有关。食管癌是河南省最常见的恶性肿瘤之一，食管癌的转移是否与KAI1基因功能的降低有关，作者对此进行了研究。
1 材料与方法
1.1 材料 食管癌手术切除标本20例，分别来自河南医科大学第一附属医院及河南省肿瘤医院。20例均为鳞状细胞癌，其中分化I级4例，分化II级14例，分化III级2例。有淋巴结转移7例，无淋巴结转移13例。
, 百拇医药
1.2 方法(原位杂交)
1.2.1 探针制备：质粒，PCMV.KAI1(美国国立卫生研究院董刚博士惠赠)。以碱裂解法提取质粒DNA。PCR法(聚合酶链反应)扩增质粒目的基因片段。KAI1引物及反应条件见文献[4]，扩增片段为1 030 bp。探针标记，采用随机引物法标记Dig-cDNA探针。
1.2.2 杂交：组织的前处理，切片脱蜡至水。37 ℃蛋白酶K(100 mg/L)消化15 min，PBS洗。室温0.2 mol/L HCl 10 min，PBS洗，逐级乙醇脱水。杂交处理,滴加杂交液(将探针加入预杂交液中混匀，100 ℃变性，冰浴)，置于纯甲酰胺的湿盒中，42 ℃孵育20 h。杂交后处理，将切片置于2×SSC，15 min×2。1×SSC,15 min。Dig缓冲液I洗，15 min×2。Dig缓冲液III洗，3 min×2，显色,以BCIP/NBT显色，37 ℃避光15～30 min。自来水中止反应，中性树胶封片。光镜观察。
, 百拇医药
1.2.3 实验对照：设置阳性对照，并以杂交液中不加DIG标记的KAI1 cDNA探针作为阴性对照。
1.2.4 结果判断：胞浆内着蓝紫色为阳性染色。
1.2.5 统计学处理：χ2检验。
2 结果
食管鳞状细胞癌20例，其中检出阳性16例，阴性4例(表1)。阳性信号呈蓝紫色位于细胞胞浆内。
表1 食管癌KAI1原位杂交结果与癌转移及分化的相关性 原位杂交
例数
淋巴结转移
癌分化
, 百拇医药
+
-
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
+
16
6
10
3
11
2
-
4
, http://www.100md.com
1
3
1
3
0
统计学处理：KAI1 mRNA在有淋巴结转移和无淋巴结转移的食管癌标本中的阳性表达差异无显著性(P>0.05)；KAI1 mRNA的表达与癌分化程度无关(P>0.05)。
3 讨论
KAI1基因是1995年由Dong等[1]报道的一个新的肿瘤转移抑制基因。已有报道其转移抑制作用不只限于前列腺癌，也与其它类型肿瘤的转移抑制相关[5,6]。为了评估KAI1基因与食管癌转移的相关性，了解KAI1基因表达与食管癌转移的关系，作者利用原位杂交法观察了KAI1 mRNA在伴有淋巴结转移和无淋巴结转移的食管癌标本中的表达。结果表明：在20例标本中，KAI1检出阳性16例。KAI1 mRNA阳性信号呈蓝紫色位于胞浆内。16例中有淋巴结转移的6例，无淋巴结转移的10例，两者差异无显著性(P>0.05)。另外，对KAI1基因表达与食管癌分化程度之间的关系进行了观察，20例标本分化I级的4例中有3例KAI1 mRNA阳性表达，分化Ⅱ级的14例中11例表达，分化Ⅲ级的2例均表达KAI1 mRNA。统计学处理也未能证实癌分化与KAI1基因表达有关(P>0.05)。因此认为食管癌转移的发生可能不取决于癌细胞中KAI1 mRNA表达的降低。
, http://www.100md.com
Guo等[7]利用Northern blot及原位杂交法对上消化道肿瘤包括食管和胃进行了这方面的研究，本结果与他们的结果一致，没有发现KAI1基因与食管癌转移抑制的相关性。他们认为KAI1对转移的影响可能取决于癌细胞的表型。但Uchida等[8]利用免疫组化的方法得出了与本研究相反的结论。在他们的研究中KAI1基因的低表达可以促进食管鳞状细胞癌的淋巴结转移。不仅结论不同，本研究及Guo所使用的研究方法与Uchida亦有别。造成这种差异的原因尚不太清楚，还有待进一步研究。
肿瘤侵袭转移是肿瘤细胞与宿主细胞间一系列复杂多步骤相互作用的结果。此过程涉及多种基因及其产物的作用。象转移这种复杂过程，单一基因变化是必要的，但它又不足以彻底改变肿瘤转移潜能，其它基因或胚胎因素也可能同时参与调控。 基金项目：博士研究生课题
参考文献：
[1]Dong JT,Lamb PW,Rinker-Schaeffer CW,et al.KAI1,a metastasis suppressor gene for prostate cancer on human chromosome 11p11.2.Science,1995,268:884
, 百拇医药
[2]Hemler ME,Mannion BA,Berditchevski F.Association of TM4SF proteins with integrins:relevance to cancer.Biochim Biophys Acta,1996,1287:67
[3]李珊珊，方伟岗.TM4SF的生物学功能及肿瘤转移抑制作用.国外医学.肿瘤学分册，1997,24:283
[4]Dong JT,Suzuki H,Pin SS,et al.Down-regulation of the KAI1 metastasis suppressor gene during the progression of human prostatic cancer infrequently involves gene mutation or allelic loss.Cancer Res,1996,56:4387
, http://www.100md.com
[5]Takaoka A,Hinoda Y,Rinker-Schaeffer CW,et al.Reduced invasive and metastatic potentials of KAI1-transfected melanoma cells.Jpn J Cancer Res,1998,89:397
[6]Yu Y,Yang JL,Markovic B,et al.Loss of KAI1 messenger RNA expression in both high-grad and invasive human bladder cancers.Clin Cancer Res,1997,3:1056
[7]Guo XZ,Friess H,Maurer C,et al.KAI1 is unchanged in metastatic and nonmetastatic esophageal and gastric cancer.Cancer Res,1998,58:753
[8]Uchida S,Shimada Y,Watanabe G,et al.Motility-related protein(MRP-1/CD9) and KAI1 expression inversely correlate with lymph node metastasis in oesophageal squamous cell carcinoma.Br J Cancer,1999,79:1168
(收稿日期：1999-12-25), 百拇医药
单位：李珊珊 晏梅 高冬玲(河南医科大学第一附属医院病理科,河南省肿瘤病理学重点实验室 郑州450052)；方伟岗(北京医科大学病理系 北京 100083；方伟岗(北京医科大学病理系 北京 100083)；闫爱华 任秀花 沈琼(河南医科大学癌前期研究室 郑州 450052)
关键词：基因，抑制，肿瘤转移；KAI1基因；食管肿瘤
河南医科大学学报000204
摘 要：目的：探讨KAI1基因与食管癌转移的关系。方法：应用原位杂交法分析KAI1基因在有淋巴结转移和无淋巴结转移的食管癌组织中的表达。结果：在有淋巴结转移和无淋巴结转移的食管癌组织中KAI1 mRNA的表达未见显著差异 (P>0.05)，且KAI1 mRNA表达与食管癌的分化无关(P>0.05)。结论：KAI1基因对食管癌转移的发生无抑制作用；KAI1基因的表达也与食管癌的分化无关。
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分类号：R735.1
Expressions of KAI1 gene in metastatic and nonmetastatic esophageal cancer tissues
LI Shanshan,YAN Mei,GAO Dongling
(Department of Pathology,the First Affiliated Hospital,Henan Medical University,Zhengzhou 450052)
FANG Weigang
(Department of Pathology,Beijing Medical University,Beijing 100083)
, 百拇医药
REN Xiuhua,YAN Aihua,SHEN Qiong
(Department of Precancerous Studies,Henan Medical University,Zhengzhou 450052)
Abstract：Aim:To investigate the correlation of KAI1 gene with metastatic behavior of esophageal cancer.Methods:Expressions of KAI1 gene were examined by using in situ hybridization.Results:KAI1 mRNA expressions showed no difference between esophageal cancer with and without lymph node metastasis(P>0.05) and was not correlated with differentiation of esophageal cancer(P>0.05).Conclusion:KAI1 gene may not correlate with metastatic suppression and differentiation of esophageal cancer.
, 百拇医药
Key words：gene,suppressor,neoplasm; KAI1 gene; esophageal neoplasm▲
KAI1作为一个新的肿瘤转移抑制基因[1]，越来越引起人们的关注。该基因在结构上属于一个特殊的蛋白家族——TM4SF(transmembrane 4 superfamily or tetraspan superfamily)[2，3]，TM4SF蛋白具有4个高度保守的疏水区(跨膜位点)及一个大的细胞外N-糖基化位点，参与细胞与细胞和(或)细胞与细胞外基质的反应。这些特性对于肿瘤细胞的浸润和转移都有一定的关系。研究表明：KAI1基因表达降低与肿瘤细胞的浸润和转移有关。食管癌是河南省最常见的恶性肿瘤之一，食管癌的转移是否与KAI1基因功能的降低有关，作者对此进行了研究。
1 材料与方法
1.1 材料 食管癌手术切除标本20例，分别来自河南医科大学第一附属医院及河南省肿瘤医院。20例均为鳞状细胞癌，其中分化I级4例，分化II级14例，分化III级2例。有淋巴结转移7例，无淋巴结转移13例。
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1.2 方法(原位杂交)
1.2.1 探针制备：质粒，PCMV.KAI1(美国国立卫生研究院董刚博士惠赠)。以碱裂解法提取质粒DNA。PCR法(聚合酶链反应)扩增质粒目的基因片段。KAI1引物及反应条件见文献[4]，扩增片段为1 030 bp。探针标记，采用随机引物法标记Dig-cDNA探针。
1.2.2 杂交：组织的前处理，切片脱蜡至水。37 ℃蛋白酶K(100 mg/L)消化15 min，PBS洗。室温0.2 mol/L HCl 10 min，PBS洗，逐级乙醇脱水。杂交处理,滴加杂交液(将探针加入预杂交液中混匀，100 ℃变性，冰浴)，置于纯甲酰胺的湿盒中，42 ℃孵育20 h。杂交后处理，将切片置于2×SSC，15 min×2。1×SSC,15 min。Dig缓冲液I洗，15 min×2。Dig缓冲液III洗，3 min×2，显色,以BCIP/NBT显色，37 ℃避光15～30 min。自来水中止反应，中性树胶封片。光镜观察。
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1.2.3 实验对照：设置阳性对照，并以杂交液中不加DIG标记的KAI1 cDNA探针作为阴性对照。
1.2.4 结果判断：胞浆内着蓝紫色为阳性染色。
1.2.5 统计学处理：χ2检验。
2 结果
食管鳞状细胞癌20例，其中检出阳性16例，阴性4例(表1)。阳性信号呈蓝紫色位于细胞胞浆内。
表1 食管癌KAI1原位杂交结果与癌转移及分化的相关性 原位杂交
例数
淋巴结转移
癌分化
, 百拇医药
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Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
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统计学处理：KAI1 mRNA在有淋巴结转移和无淋巴结转移的食管癌标本中的阳性表达差异无显著性(P>0.05)；KAI1 mRNA的表达与癌分化程度无关(P>0.05)。
3 讨论
KAI1基因是1995年由Dong等[1]报道的一个新的肿瘤转移抑制基因。已有报道其转移抑制作用不只限于前列腺癌，也与其它类型肿瘤的转移抑制相关[5,6]。为了评估KAI1基因与食管癌转移的相关性，了解KAI1基因表达与食管癌转移的关系，作者利用原位杂交法观察了KAI1 mRNA在伴有淋巴结转移和无淋巴结转移的食管癌标本中的表达。结果表明：在20例标本中，KAI1检出阳性16例。KAI1 mRNA阳性信号呈蓝紫色位于胞浆内。16例中有淋巴结转移的6例，无淋巴结转移的10例，两者差异无显著性(P>0.05)。另外，对KAI1基因表达与食管癌分化程度之间的关系进行了观察，20例标本分化I级的4例中有3例KAI1 mRNA阳性表达，分化Ⅱ级的14例中11例表达，分化Ⅲ级的2例均表达KAI1 mRNA。统计学处理也未能证实癌分化与KAI1基因表达有关(P>0.05)。因此认为食管癌转移的发生可能不取决于癌细胞中KAI1 mRNA表达的降低。
, http://www.100md.com
Guo等[7]利用Northern blot及原位杂交法对上消化道肿瘤包括食管和胃进行了这方面的研究，本结果与他们的结果一致，没有发现KAI1基因与食管癌转移抑制的相关性。他们认为KAI1对转移的影响可能取决于癌细胞的表型。但Uchida等[8]利用免疫组化的方法得出了与本研究相反的结论。在他们的研究中KAI1基因的低表达可以促进食管鳞状细胞癌的淋巴结转移。不仅结论不同，本研究及Guo所使用的研究方法与Uchida亦有别。造成这种差异的原因尚不太清楚，还有待进一步研究。
肿瘤侵袭转移是肿瘤细胞与宿主细胞间一系列复杂多步骤相互作用的结果。此过程涉及多种基因及其产物的作用。象转移这种复杂过程，单一基因变化是必要的，但它又不足以彻底改变肿瘤转移潜能，其它基因或胚胎因素也可能同时参与调控。 基金项目：博士研究生课题
参考文献：
[1]Dong JT,Lamb PW,Rinker-Schaeffer CW,et al.KAI1,a metastasis suppressor gene for prostate cancer on human chromosome 11p11.2.Science,1995,268:884
, 百拇医药
[2]Hemler ME,Mannion BA,Berditchevski F.Association of TM4SF proteins with integrins:relevance to cancer.Biochim Biophys Acta,1996,1287:67
[3]李珊珊，方伟岗.TM4SF的生物学功能及肿瘤转移抑制作用.国外医学.肿瘤学分册，1997,24:283
[4]Dong JT,Suzuki H,Pin SS,et al.Down-regulation of the KAI1 metastasis suppressor gene during the progression of human prostatic cancer infrequently involves gene mutation or allelic loss.Cancer Res,1996,56:4387
, http://www.100md.com
[5]Takaoka A,Hinoda Y,Rinker-Schaeffer CW,et al.Reduced invasive and metastatic potentials of KAI1-transfected melanoma cells.Jpn J Cancer Res,1998,89:397
[6]Yu Y,Yang JL,Markovic B,et al.Loss of KAI1 messenger RNA expression in both high-grad and invasive human bladder cancers.Clin Cancer Res,1997,3:1056
[7]Guo XZ,Friess H,Maurer C,et al.KAI1 is unchanged in metastatic and nonmetastatic esophageal and gastric cancer.Cancer Res,1998,58:753
[8]Uchida S,Shimada Y,Watanabe G,et al.Motility-related protein(MRP-1/CD9) and KAI1 expression inversely correlate with lymph node metastasis in oesophageal squamous cell carcinoma.Br J Cancer,1999,79:1168
(收稿日期：1999-12-25), 百拇医药