转移性和非转移性乳腺癌组织中KAI1基因的表达
作者：李珊珊 任秀花 闫爱华 方伟岗 沈琼
单位：李珊珊(河南医科大学第一附属医院病理科,河南省肿瘤病理学重点实验室 郑州450052)；方伟岗(北京医科大学病理系 北京 100083)；闫爱华 任秀花 沈琼(河南医科大学癌前期研究室 郑州 450052)
关键词：基因，抑制，肿瘤转移；KAI1基因；乳腺肿瘤
河南医科大学学报000203摘 要：目的：探讨肿瘤转移抑制基因KAI1与乳腺癌转移的相关性。方法：运用原位杂交法观察KAI1 mRNA在转移性和非转移性乳腺癌组织中的表达。结果：在无淋巴结转移的12例乳腺癌病例中KAI1 mRNA阳性表达为9例，有淋巴结转移的8例中阳性表达1例。前者阳性率显著高于后者(P<0.05)。结论：KAI1基因的低表达或不表达可能是某些高转移潜能乳腺癌的特征。
分类号：R737.9
, 百拇医药
Expressions of KAI1 gene in breast cancer with and without metastasis
LI Shanshan
(Department of Pathology,the First Affiliated Hospital,Henan Medical University,Zhengzhou 450052)
REN Xiuhua,YAN Aihua,SHEN Qiong
(Department of Precancerous Studies,Henan Medical University,Zhengzhou 450052)
FANG Weigang
, 百拇医药
(Department of Pathology,Beijing Medical University,Beijing 100083)
Abstract：Aim:To study the correlation of KAI1 gene with metastatic behavior of breast cancer.Methods:Expressions of KAI1 gene were observed by using in situ hybridization.Results:Of 12 cases without lymph node metastasis,9 had positive staining of KAI1 mRNA,and of 8 cases with lymph node metastasis,1 showed positive expression.The former was more than the latter(P<0.05).Conclusion:No or reduced expressions of KAI1 gene may be a feature of some breast cancers with high metastatic potential.
, 百拇医药
Key words：gene,suppressor,neoplasm metastasis;KAI1 gene;breast neoplasm▲
KAI1基因的肿瘤转移抑制作用已逐渐被人们所认识，它的肿瘤转移抑制作用不只限于前列腺癌[1]。作者在以前的研究中也观察到KAI1基因与其它类型肿瘤转移抑制的相关性[2]。为使KAI1基因成为评估乳腺癌预后的因素。作者对KAI1基因与乳腺癌的转移抑制关系进行了研究。
1 材料与方法
1.1 标本来源 乳腺癌手术切除标本20例。来自河南医科大学第一附属医院1998年9月～1999年3月手术切除标本。浸润性导管癌18例，导管内癌2例；有淋巴结转移8例，无淋巴结转移12例。年龄23～71岁。
1.2 探针制备
, http://www.100md.com
1.2.1 质粒：PCMV.KAI1(美国国立卫生研究院提供)。
1.2.2 裸探针：采用PCR扩增质粒目的基因片段制备裸探针(1 030 bp)。KAI1引物：上游，5'-AGTCCTCCCTGCTGCTGTGTG-3',下游，5'-TCAGTCAGGGTGGG-
CAAGAGG-3’,退火温度60 ℃。
1.2.3 探针标记：以随机引物法标记地高辛-cDNA探针。
1.3 杂交 参见文献[3]。
1.4 结果判断 胞浆内着蓝紫色为阳性染色。
1.5 统计学分析 以χ2检验分析组间差异。
, 百拇医药 2 结果
结果显示：在阳性表达的病例中，阳性信号呈蓝紫色，位于胞浆内。20例乳腺癌标本中KAI1 mRNA阳性表达占10例，阴性10例。其中无淋巴结转移的12例中，KAI1阳性表达为9例(占75%)；在有淋巴结转移的8例标本中。阳性表达1例(占12.5%)，χ2检验显示：不伴有淋巴结转移的与伴有淋巴结转移的乳腺癌病例KAI1 mRNA的表达具有显著性差异(P<0.05)，即在转移性乳腺癌病例中KAI1阳性表达率低于非转移性乳腺癌病例。
3 讨论
KAI1基因属于一个结构特殊的蛋白家族—TM4SF(transmembrane 4 superfamily)[4]。这个新的肿瘤转移抑制基因的转移抑制作用在作者以前的研究中已进行了报道[2]。KAI1基因的转移抑制作用不只限于最初发现的前列腺癌，它与其它组织类型肿瘤的转移抑制亦相关[2]，但也不是所有肿瘤的转移抑制都与之相关，作者现还未能证实KAI1基因与人黑色素瘤以及与人食管癌转移抑制的相关性[3,5]。最近作者又对KAI1基因与人乳腺癌转移的相关性进行了研究，观察了KAI1 mRNA在伴有淋巴结转移和无淋巴结转移的人乳腺癌组织中的表达，结果显示：两组病例间KAI1 mRNA表达差异有显著性(P<0.05)，因此推测KAI1基因的低表达或不表达，可能是某些高转移潜能乳腺癌的特征，但尚需扩大标本数量进一步证明。这一结果与其他学者的研究相吻合，Wei等[6]的Nothern印迹杂交结果显示：在非转移性乳腺癌细胞中，KAI1 mRNA的表达高于转移性乳腺癌细胞。Yang等[7]也发现在转染了含有KAI1基因的11号染色体的乳腺癌细胞MDA-MB-435，其KAI1 mRNA的表达量是其亲代克隆的2倍，这些转染细胞克隆在无胸腺裸鼠体内的转移能力明显低于它们的亲代细胞。尽管各研究所采用的方法不同，但结果是一致的。因此认为KAI1基因在抑制乳腺癌转移发生中可能起着主导基因的作用。
, 百拇医药
除了乳腺癌之外，KAI1基因也与肺癌等的转移抑制相关[2]，那么KAI1基因是如何影响肿瘤的浸润和转移的？作为TM4SF成员，在KAI1蛋白的结构中也具有4个高度保守的疏水区(穿膜区)[1]，人们发现TM4SF蛋白可与多种成分结合并在细胞表面形成大的复合体，特别是与整合素的结合[8,9]，因此推测TM4SF蛋白通过调节整合素的功能，从而影响细胞的粘附，同时TM4SF蛋白本身也具有调节细胞粘附的作用。众所周知，粘附在肿瘤转移中的作用越来越引起人们的关注，肿瘤细胞只有与细胞外基质成分粘附，才能实现细胞的浸润和转移。TM4SF蛋白可调节整合素家族与细胞外基质的粘附，使得肿瘤细胞不能与细胞外基质粘附，从而抑制肿瘤转移的发生。
KAI1基因在转移性乳腺癌组织中的低表达或不表达，提示人们将其作为评估乳腺癌预后的指标，以发现高危险人群，鉴别高转移潜能的乳腺癌病例。最近有作者认为KAI1和MRP-1/CD9是评估乳腺癌患者预后的有用指征[10,11]。本结果也为KAI1成为评估乳腺癌预后的指标提供了理论依据。
, 百拇医药
基金项目：博士研究生课题
参考文献：
[1]White A,Lamb PW,Barrett JC.Frequent downregulation of the KAI1(CD82) metastasis suppressor protein in human cancer cell lines.Oncogene,1998,16:3143
[2]李珊珊,方伟岗,钟镐镐,等.肿瘤转移抑制基因KAI1在不同转移潜能癌细胞中的表达.中华医学杂志，1999，9:708
[3]李珊珊，方伟岗,晏梅，等.转移性和非转移性食管癌组织中KAI1基因的表达.河南医科大学学报，2000，35(2)：103
[4]Wright MD,Tomlinson MG.The ins and outs of the transmembrane 4 superfamily.Immunol Today,1994,15:588
, 百拇医药
[5]李珊珊，方伟岗,任秀花，等.KAI1和nm23与人黑色素瘤细胞转移潜能的相关性.河南医科大学学报，2000，35(2)：105
[6]Wei LL,Yang X,Phillips K,et al.Analysis of KAI1 mRNA expression in human breast cancer cell lines.Proc Am Assoc Cancer Res,1996,37:76
[7]Yang X,Welch DR,Phillips KK,et al.KAI1,a putative marker for metastatic potential in human breast cancer.Cancer Lett,1997,119:149
[8]Hemler ME,Mannion BA,Berditchevski F.Association of TM4SF proteins with integrins:relevance to cancer.Biochim Biophys Acta,1996,1287:67
, 百拇医药
[9]Berditchevski F,Zutter MM,Hemler ME.Characterization of novel complexes on the cell surface between integrins and proteins with 4 transmembrane domains.Mol Biol Cell,1996,7:193
[10]Huang CL,Kohno N,Ogawa E,et al.Correlation of reduction in MRP-1/CD9 and KAI1 expression with recurrences in breast cancer patients.AM J Pathol,1998,153(3):973
[11]Miyake M,Nakano K,Itoi S,et al.Motility-related protein-1(MRP-1/CD9) reduction as a factor of poor prognosis in breast cancer.Cancer Res,1996,56:1244
(收稿日期：1999-12-25), 百拇医药
单位：李珊珊(河南医科大学第一附属医院病理科,河南省肿瘤病理学重点实验室 郑州450052)；方伟岗(北京医科大学病理系 北京 100083)；闫爱华 任秀花 沈琼(河南医科大学癌前期研究室 郑州 450052)
关键词：基因，抑制，肿瘤转移；KAI1基因；乳腺肿瘤
河南医科大学学报000203摘 要：目的：探讨肿瘤转移抑制基因KAI1与乳腺癌转移的相关性。方法：运用原位杂交法观察KAI1 mRNA在转移性和非转移性乳腺癌组织中的表达。结果：在无淋巴结转移的12例乳腺癌病例中KAI1 mRNA阳性表达为9例，有淋巴结转移的8例中阳性表达1例。前者阳性率显著高于后者(P<0.05)。结论：KAI1基因的低表达或不表达可能是某些高转移潜能乳腺癌的特征。
分类号：R737.9
, 百拇医药
Expressions of KAI1 gene in breast cancer with and without metastasis
LI Shanshan
(Department of Pathology,the First Affiliated Hospital,Henan Medical University,Zhengzhou 450052)
REN Xiuhua,YAN Aihua,SHEN Qiong
(Department of Precancerous Studies,Henan Medical University,Zhengzhou 450052)
FANG Weigang
, 百拇医药
(Department of Pathology,Beijing Medical University,Beijing 100083)
Abstract：Aim:To study the correlation of KAI1 gene with metastatic behavior of breast cancer.Methods:Expressions of KAI1 gene were observed by using in situ hybridization.Results:Of 12 cases without lymph node metastasis,9 had positive staining of KAI1 mRNA,and of 8 cases with lymph node metastasis,1 showed positive expression.The former was more than the latter(P<0.05).Conclusion:No or reduced expressions of KAI1 gene may be a feature of some breast cancers with high metastatic potential.
, 百拇医药
Key words：gene,suppressor,neoplasm metastasis;KAI1 gene;breast neoplasm▲
KAI1基因的肿瘤转移抑制作用已逐渐被人们所认识，它的肿瘤转移抑制作用不只限于前列腺癌[1]。作者在以前的研究中也观察到KAI1基因与其它类型肿瘤转移抑制的相关性[2]。为使KAI1基因成为评估乳腺癌预后的因素。作者对KAI1基因与乳腺癌的转移抑制关系进行了研究。
1 材料与方法
1.1 标本来源 乳腺癌手术切除标本20例。来自河南医科大学第一附属医院1998年9月～1999年3月手术切除标本。浸润性导管癌18例，导管内癌2例；有淋巴结转移8例，无淋巴结转移12例。年龄23～71岁。
1.2 探针制备
, http://www.100md.com
1.2.1 质粒：PCMV.KAI1(美国国立卫生研究院提供)。
1.2.2 裸探针：采用PCR扩增质粒目的基因片段制备裸探针(1 030 bp)。KAI1引物：上游，5'-AGTCCTCCCTGCTGCTGTGTG-3',下游，5'-TCAGTCAGGGTGGG-
CAAGAGG-3’,退火温度60 ℃。
1.2.3 探针标记：以随机引物法标记地高辛-cDNA探针。
1.3 杂交 参见文献[3]。
1.4 结果判断 胞浆内着蓝紫色为阳性染色。
1.5 统计学分析 以χ2检验分析组间差异。
, 百拇医药 2 结果
结果显示：在阳性表达的病例中，阳性信号呈蓝紫色，位于胞浆内。20例乳腺癌标本中KAI1 mRNA阳性表达占10例，阴性10例。其中无淋巴结转移的12例中，KAI1阳性表达为9例(占75%)；在有淋巴结转移的8例标本中。阳性表达1例(占12.5%)，χ2检验显示：不伴有淋巴结转移的与伴有淋巴结转移的乳腺癌病例KAI1 mRNA的表达具有显著性差异(P<0.05)，即在转移性乳腺癌病例中KAI1阳性表达率低于非转移性乳腺癌病例。
3 讨论
KAI1基因属于一个结构特殊的蛋白家族—TM4SF(transmembrane 4 superfamily)[4]。这个新的肿瘤转移抑制基因的转移抑制作用在作者以前的研究中已进行了报道[2]。KAI1基因的转移抑制作用不只限于最初发现的前列腺癌，它与其它组织类型肿瘤的转移抑制亦相关[2]，但也不是所有肿瘤的转移抑制都与之相关，作者现还未能证实KAI1基因与人黑色素瘤以及与人食管癌转移抑制的相关性[3,5]。最近作者又对KAI1基因与人乳腺癌转移的相关性进行了研究，观察了KAI1 mRNA在伴有淋巴结转移和无淋巴结转移的人乳腺癌组织中的表达，结果显示：两组病例间KAI1 mRNA表达差异有显著性(P<0.05)，因此推测KAI1基因的低表达或不表达，可能是某些高转移潜能乳腺癌的特征，但尚需扩大标本数量进一步证明。这一结果与其他学者的研究相吻合，Wei等[6]的Nothern印迹杂交结果显示：在非转移性乳腺癌细胞中，KAI1 mRNA的表达高于转移性乳腺癌细胞。Yang等[7]也发现在转染了含有KAI1基因的11号染色体的乳腺癌细胞MDA-MB-435，其KAI1 mRNA的表达量是其亲代克隆的2倍，这些转染细胞克隆在无胸腺裸鼠体内的转移能力明显低于它们的亲代细胞。尽管各研究所采用的方法不同，但结果是一致的。因此认为KAI1基因在抑制乳腺癌转移发生中可能起着主导基因的作用。
, 百拇医药
除了乳腺癌之外，KAI1基因也与肺癌等的转移抑制相关[2]，那么KAI1基因是如何影响肿瘤的浸润和转移的？作为TM4SF成员，在KAI1蛋白的结构中也具有4个高度保守的疏水区(穿膜区)[1]，人们发现TM4SF蛋白可与多种成分结合并在细胞表面形成大的复合体，特别是与整合素的结合[8,9]，因此推测TM4SF蛋白通过调节整合素的功能，从而影响细胞的粘附，同时TM4SF蛋白本身也具有调节细胞粘附的作用。众所周知，粘附在肿瘤转移中的作用越来越引起人们的关注，肿瘤细胞只有与细胞外基质成分粘附，才能实现细胞的浸润和转移。TM4SF蛋白可调节整合素家族与细胞外基质的粘附，使得肿瘤细胞不能与细胞外基质粘附，从而抑制肿瘤转移的发生。
KAI1基因在转移性乳腺癌组织中的低表达或不表达，提示人们将其作为评估乳腺癌预后的指标，以发现高危险人群，鉴别高转移潜能的乳腺癌病例。最近有作者认为KAI1和MRP-1/CD9是评估乳腺癌患者预后的有用指征[10,11]。本结果也为KAI1成为评估乳腺癌预后的指标提供了理论依据。
, 百拇医药
基金项目：博士研究生课题
参考文献：
[1]White A,Lamb PW,Barrett JC.Frequent downregulation of the KAI1(CD82) metastasis suppressor protein in human cancer cell lines.Oncogene,1998,16:3143
[2]李珊珊,方伟岗,钟镐镐,等.肿瘤转移抑制基因KAI1在不同转移潜能癌细胞中的表达.中华医学杂志，1999，9:708
[3]李珊珊，方伟岗,晏梅，等.转移性和非转移性食管癌组织中KAI1基因的表达.河南医科大学学报，2000，35(2)：103
[4]Wright MD,Tomlinson MG.The ins and outs of the transmembrane 4 superfamily.Immunol Today,1994,15:588
, 百拇医药
[5]李珊珊，方伟岗,任秀花，等.KAI1和nm23与人黑色素瘤细胞转移潜能的相关性.河南医科大学学报，2000，35(2)：105
[6]Wei LL,Yang X,Phillips K,et al.Analysis of KAI1 mRNA expression in human breast cancer cell lines.Proc Am Assoc Cancer Res,1996,37:76
[7]Yang X,Welch DR,Phillips KK,et al.KAI1,a putative marker for metastatic potential in human breast cancer.Cancer Lett,1997,119:149
[8]Hemler ME,Mannion BA,Berditchevski F.Association of TM4SF proteins with integrins:relevance to cancer.Biochim Biophys Acta,1996,1287:67
, 百拇医药
[9]Berditchevski F,Zutter MM,Hemler ME.Characterization of novel complexes on the cell surface between integrins and proteins with 4 transmembrane domains.Mol Biol Cell,1996,7:193
[10]Huang CL,Kohno N,Ogawa E,et al.Correlation of reduction in MRP-1/CD9 and KAI1 expression with recurrences in breast cancer patients.AM J Pathol,1998,153(3):973
[11]Miyake M,Nakano K,Itoi S,et al.Motility-related protein-1(MRP-1/CD9) reduction as a factor of poor prognosis in breast cancer.Cancer Res,1996,56:1244
(收稿日期：1999-12-25), 百拇医药