肾母细胞瘤p53基因检测
作者：张卫星 宋东奎 李中凌 步星耀
单位：张卫星 宋东奎 李中凌(河南医科大学第一附属医院泌尿外科 郑州 450052)；步星耀(河南省人民医院外科 郑州 450005)
关键词：肾母细胞瘤；p53基因；Southern印迹分子杂交技术
河南医科大学学报000325 摘要 目的：对26例散发性肾母细胞瘤的p53基因缺失进行检测，并分析其与组织类型的关系。方法：采用Southern印迹分子杂交技术。结果：1例p53等位基因缺失为间变型肾母细胞瘤。结论：p53基因缺失可能与间变型肾母细胞瘤的发生有关。
分类号 R737.11
Deletion of p53 in Wilms' tumor
, http://www.100md.com ZHANG Weixing,SONG Dongkui,(Department of Urology, the First Affiliated Hospital， Henan Medical University,Zhengzhou 450052)
LI Zhongling,BU Xingyao
(Department of Surgery,the People's Hospital of Henan Province,Zhengzhou 450003)
Abstract Aim:To study p53 gene in 26 cases of sporadic Wilms'tumor. Methods:p53 gene was studied by Southern bolt hybridization with p53 cDNA probe.Results:One case with intragenic deletions of p53 gene was histologically classified as stroma predominated Wilms' tumor. Conclusion:The etiology of Wilms' tumor is complex, and the deletion of p53 gene may be correlated with the anaplasia of Wilms' tumor.
, 百拇医药
Key words nephroblastoma;p53 gene; Southern blot hybridization
特定染色体位点的基因缺失或突变是肿瘤发生发展过程中重要的遗传学变化。定位于17PB的p53基因，其缺失或突变与多种成人肿瘤的发生密切相关，而与肾母细胞瘤发生的相关性研究较少。作者采用Southern印迹分子杂交技术，检测散发性肾母细胞瘤p53基因缺失，探讨其对散发性肾母细胞瘤发生的影响。
1 材料与方法
1.1 标本来源 26例肾母细胞瘤手术切除标本，所有病例均无WAGR综合征和Beckwith-Wiedemann综合征的表现。2例肾标本(1例外伤肾，1例重复肾畸形)作为正常对照。
1.2 病理组织学分类 肿瘤组织石蜡包埋切片，HE染色，高倍镜下每例随机抽样计数10个视野，计算各型细胞所占的比例。以瘤细胞中占50%以上的细胞类型为优势类型，分间质细胞优势型和上皮细胞或母细胞优势型2组，并记录有无异源性成分，再参照NWTS-Ⅱ所制定的肿瘤间变标准分间变型和无间变型，间变型为组织结构差型(UH)，无间变型为组织结构好型(FH)。26例肾母细胞瘤，上皮优势型4例(FH2；UH2)，母细胞优势型14例(FH10；UH4)；间质优势型8例(FH8；UH0)。
, 百拇医药
1.3 试剂与方法 随机引物法同位素标记试剂盒为Boehringer Mannheim公司产品。Sephadex G100为Pharmacia公司产品。EcoRIHindⅢ为Clontech公司产品。(α-32P)dCT p53为Amersham公司产品。p53cDNA探针长2.9 kb。 基因突变检测：①提取基因组DNA；②DNA酶切分离；③Southern Blot；④探针制备及同位素标记；⑤杂交。
2 结果
正常肾组织DNA经EcoRI限制性核酸内切酶酶切及Southern印迹后，用32P同位素标记的人体特异性2.9 kb p53cDNA探针进行分子杂交所显示的杂交带分别在7.0 kb与2.5 kb 2条带。
从Southern结果看，26例散发性肾母细胞瘤有1例p53等位基因2.5 kb片段缺失。结合病理组织学分类，14例母细胞优势型，4例为UH，其中1例发生p53基因部分缺失，8例FH正常；4例上皮细胞优势型未发现缺失。
, 百拇医药
3 讨论
p53功能的丧失可通过基因的缺失或突变、病毒蛋白的结合、细胞癌基因蛋白结合等途径发生，其中以p53基因的缺失或突变最为常见[1～3]。肾母细胞瘤p53基因缺失和突变相对较少。Velasco等[4]发现培养的肾母细胞瘤细胞系有p53基因内合子Ⅰ缺失；Bardessy等[5]对140例肾母细胞瘤进行p53突变研究，结果有8例UH型肾母细胞瘤发生p53基因突变。本实验26例散发性肾母细胞瘤，4例UH，其中1例p53等位基因部分缺失。这些资料提示，p53基因改变可能与肾母细胞瘤间变有关。
基金项目：河南省科技攻关金资助项目 981170216
研究方向：泌尿系统肿瘤
作者简介：张卫星，男，42岁，大学本科，副教授，参考文献
, http://www.100md.com
[1]Bartek J,Iggo R,Vannon J,et al.Genetic and immunochemical analy-sis of mutant P53 in human breast cancer cell lines.Oncogene,1990,5:1 699.
[2]Iggo R,Bartek J,Lane O.Increased expression of mutation from of P53 oncogene in primary lung cancer.Cancer,1990,335:675
[3]Sarkis AS,Dalbagvi G,Corden cc,et al.Nuclear overexpression of P53 protein in transitional cell bladder carcinoma:a marker for disease progression. J Natl Cancer Inst,1993,85:53.
[4]Velasco S, D'Amico D,Schneider NR,et al.Molecular and cellular heterogenity of Wilins' tumer. Int J Cancer ，1993;53:672
[5]Bardessy N, Falkoff D,Petruzzi MJ,et al.Anaplastic Wilms' tumer,a subtype displaying poorprognosis, harbours P53 gene mutations.NatureGenetiss ，1994;7:91
1999-12-03收稿, http://www.100md.com
单位：张卫星 宋东奎 李中凌(河南医科大学第一附属医院泌尿外科 郑州 450052)；步星耀(河南省人民医院外科 郑州 450005)
关键词：肾母细胞瘤；p53基因；Southern印迹分子杂交技术
河南医科大学学报000325 摘要 目的：对26例散发性肾母细胞瘤的p53基因缺失进行检测，并分析其与组织类型的关系。方法：采用Southern印迹分子杂交技术。结果：1例p53等位基因缺失为间变型肾母细胞瘤。结论：p53基因缺失可能与间变型肾母细胞瘤的发生有关。
分类号 R737.11
Deletion of p53 in Wilms' tumor
, http://www.100md.com ZHANG Weixing,SONG Dongkui,(Department of Urology, the First Affiliated Hospital， Henan Medical University,Zhengzhou 450052)
LI Zhongling,BU Xingyao
(Department of Surgery,the People's Hospital of Henan Province,Zhengzhou 450003)
Abstract Aim:To study p53 gene in 26 cases of sporadic Wilms'tumor. Methods:p53 gene was studied by Southern bolt hybridization with p53 cDNA probe.Results:One case with intragenic deletions of p53 gene was histologically classified as stroma predominated Wilms' tumor. Conclusion:The etiology of Wilms' tumor is complex, and the deletion of p53 gene may be correlated with the anaplasia of Wilms' tumor.
, 百拇医药
Key words nephroblastoma;p53 gene; Southern blot hybridization
特定染色体位点的基因缺失或突变是肿瘤发生发展过程中重要的遗传学变化。定位于17PB的p53基因，其缺失或突变与多种成人肿瘤的发生密切相关，而与肾母细胞瘤发生的相关性研究较少。作者采用Southern印迹分子杂交技术，检测散发性肾母细胞瘤p53基因缺失，探讨其对散发性肾母细胞瘤发生的影响。
1 材料与方法
1.1 标本来源 26例肾母细胞瘤手术切除标本，所有病例均无WAGR综合征和Beckwith-Wiedemann综合征的表现。2例肾标本(1例外伤肾，1例重复肾畸形)作为正常对照。
1.2 病理组织学分类 肿瘤组织石蜡包埋切片，HE染色，高倍镜下每例随机抽样计数10个视野，计算各型细胞所占的比例。以瘤细胞中占50%以上的细胞类型为优势类型，分间质细胞优势型和上皮细胞或母细胞优势型2组，并记录有无异源性成分，再参照NWTS-Ⅱ所制定的肿瘤间变标准分间变型和无间变型，间变型为组织结构差型(UH)，无间变型为组织结构好型(FH)。26例肾母细胞瘤，上皮优势型4例(FH2；UH2)，母细胞优势型14例(FH10；UH4)；间质优势型8例(FH8；UH0)。
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1.3 试剂与方法 随机引物法同位素标记试剂盒为Boehringer Mannheim公司产品。Sephadex G100为Pharmacia公司产品。EcoRIHindⅢ为Clontech公司产品。(α-32P)dCT p53为Amersham公司产品。p53cDNA探针长2.9 kb。 基因突变检测：①提取基因组DNA；②DNA酶切分离；③Southern Blot；④探针制备及同位素标记；⑤杂交。
2 结果
正常肾组织DNA经EcoRI限制性核酸内切酶酶切及Southern印迹后，用32P同位素标记的人体特异性2.9 kb p53cDNA探针进行分子杂交所显示的杂交带分别在7.0 kb与2.5 kb 2条带。
从Southern结果看，26例散发性肾母细胞瘤有1例p53等位基因2.5 kb片段缺失。结合病理组织学分类，14例母细胞优势型，4例为UH，其中1例发生p53基因部分缺失，8例FH正常；4例上皮细胞优势型未发现缺失。
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3 讨论
p53功能的丧失可通过基因的缺失或突变、病毒蛋白的结合、细胞癌基因蛋白结合等途径发生，其中以p53基因的缺失或突变最为常见[1～3]。肾母细胞瘤p53基因缺失和突变相对较少。Velasco等[4]发现培养的肾母细胞瘤细胞系有p53基因内合子Ⅰ缺失；Bardessy等[5]对140例肾母细胞瘤进行p53突变研究，结果有8例UH型肾母细胞瘤发生p53基因突变。本实验26例散发性肾母细胞瘤，4例UH，其中1例p53等位基因部分缺失。这些资料提示，p53基因改变可能与肾母细胞瘤间变有关。
基金项目：河南省科技攻关金资助项目 981170216
研究方向：泌尿系统肿瘤
作者简介：张卫星，男，42岁，大学本科，副教授，参考文献
, http://www.100md.com
[1]Bartek J,Iggo R,Vannon J,et al.Genetic and immunochemical analy-sis of mutant P53 in human breast cancer cell lines.Oncogene,1990,5:1 699.
[2]Iggo R,Bartek J,Lane O.Increased expression of mutation from of P53 oncogene in primary lung cancer.Cancer,1990,335:675
[3]Sarkis AS,Dalbagvi G,Corden cc,et al.Nuclear overexpression of P53 protein in transitional cell bladder carcinoma:a marker for disease progression. J Natl Cancer Inst,1993,85:53.
[4]Velasco S, D'Amico D,Schneider NR,et al.Molecular and cellular heterogenity of Wilins' tumer. Int J Cancer ，1993;53:672
[5]Bardessy N, Falkoff D,Petruzzi MJ,et al.Anaplastic Wilms' tumer,a subtype displaying poorprognosis, harbours P53 gene mutations.NatureGenetiss ，1994;7:91
1999-12-03收稿, http://www.100md.com