解脲脲原体的药物敏感性测定*
作者：杨介钻 陈柏坤 林明 高宇 朱尚理 周丽萍
单位：杨介钻 陈柏坤 周丽萍 温州医学院微生物学教研室(325027)； 林明 温州医学院附属第二医院妇科； 高宇 朱尚理 温州医学院附属第二医院皮肤性病科
关键词：
温州医学院学报/990254 解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)是人类泌尿生殖道最常见的寄生菌之一，在特定的环境下可以致病。近年来研究表明，约30%～40%非淋球菌性尿道炎(NGU)是由Uu所致，并且还与慢性前列腺炎、不孕、不育、流产、早产及死胎等有关。这已引起国内外有关学者广泛重视[1～3]。随着抗菌药物的广泛应用，临床分离的耐药菌株日渐上升。本实验测定近期分离的43株Uu菌株对八种药物的敏感性，并与Uu标准菌株(血清型第4型，ATCC编号为27816)相比较，现报告如下。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 调查对象 1998年7月至8月间，收集温州医学院附属第二医院妇产科门诊和皮肤性病科门诊，拟诊为Uu阳性患者71例。
1.2 菌株来源 标本采集、分离及鉴定方法按文献[4]进行。经确定为Uu后，液体培养基传代三代，-20℃短期保存备用。采集的71例临床标本，经确认为Uu阳性标本者43例(男5例，女38例；年龄21～51岁)。
1.3 标准株来源 Uu标准菌株由南京铁道医学院流行病学教研室提供。
1.4 药物来源及配制方法 8种抗菌药物均来自国内标准品，均在有效期内使用；药物配制，先根据药物溶解性溶解原药，再用无菌蒸馏水稀释至2 560mg/L。-20℃短期保存备用。
1.5 药物敏感性测定
, 百拇医药
1.5.1 支原体的复苏：取出-20℃保存的Uu，在常温下解冻，吸取50ul接种于2ml液体培养基中，以CO2罩缸培养16～24h后，吸取50ul接种于2ml液体培养基中备用。
1.5.2 在经化学方法处理后的96孔PVC血凝板上将药物倍比稀释至64～0.06mg/L，每孔含药物50μl，设不加药物的液体培养基50ul孔为对照。每孔接种上面备用的含2.5×103CCU/0.1ml支原体培养物50μl，混匀后，加无菌液状石蜡密封，每孔总积小于0.2ml[5]，然后置于37℃孵箱。
1.5.3 结果判断参照文献[5]。
2 结果
2.1 实验结果表明，8种抗菌药物中，对Uu标准株4型具有不同的抗菌作用，其中以美满霉素效果最好，最低抑菌浓度(MIC)为1mg/L,庆大霉素抗菌作用不明显，MIC为16mg/L。8种抗菌药物对43株临床标本的MIC分布情况见表1。另根据药物MIC的敏感耐药性判断标准[6]，43株临床标本Uu的敏感耐药性结果见表2。
, 百拇医药
表1 8种抗菌药物对43株Uu MIC(mg/L)分布情况(例) 药物
0.06
0.12
0.25
0.5
1
2
4
8
16
32
64
合计
, 百拇医药
红霉素
0
0
1
1
1
13
11
13
2
1
0
43(n1)
罗红霉素
, http://www.100md.com
0
1
1
3
8
13
15
1
0
1
0
43(n2)
阿奇霉素
2
, http://www.100md.com
1
0
5
11
6
3
14
1
0
0
43(n3)
美满霉素
15
11
, 百拇医药
6
2
2
1
1
0
4
1
0
43(n4)
环丙沙星
0
0
0
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0
2
2
7
14
4
10
4
43(n5)
氟嗪酸
0
0
0
0
, 百拇医药
1
7
11
11
7
5
1
43(n6)
庆大霉素
0
0
0
0
1
, http://www.100md.com
1
5
8
12
13
3
43(n7)
链霉素
0
0
0
2
13
11
, 百拇医药
7
4
2
4
0
43(n8)
合计
17
13
8
13
39
54
60
, 百拇医药
65
32
35
8
344
表2 43株Uu对8种抗菌药物的敏感耐药性分布情况 药物
敏感株数
耐药株数
红霉素
2
16
罗红霉素
27
, 百拇医药
2
阿奇霉素
10
15
美满霉素
38
5
环丙沙星
2
39
氟嗪酸
8
24
庆大霉素
, 百拇医药
7
36
链霉素
—
—
合计
94
137
注：“—”示药物敏感耐药性判断标准空缺
2.2 从表1、2可知，四环素类药美满霉素对Uu的敏感性与环丙沙星、氟嗪酸、庆大霉素等三种药对Uu的敏感性相比较有显著的差异(P<0.01,χ2=58.66,31.07,44.79)。大环内酯类药物，红霉素、罗红霉素、阿奇霉素等三种药物中，以罗红霉素对Uu的敏感性最好，它与同类的另二种药物比较有显著性(P<0.01,χ2=31.60,17.55)，而与美满霉素相比较时无显著性(P>0.05,χ2=0.44)。阿奇霉素对Uu的敏感耐药性与红霉素的相比较有显著性(P<0.01,χ2=4.34)。
, 百拇医药
2.3 本实验的43株临床标本，无明显症状者为11例，有症状者为32例，女性症状一般为白带增多，黄或伴有臭味，外阴搔痒，男性自述为排尿不适，尿道口有分泌物或无分泌物，时有搔痒感。由我们的实验结果得知见表3，有症状者和无明显症状者对美满霉素等8种抗菌药物的敏感耐药性均无显著性差别。
表3 有症状者和无明显症状者对8种药物的敏感耐药性分布比较 药物
无明显症状者
有症状者
敏感
耐药
敏感
耐药
红霉素
, 百拇医药
1
2
1
14
罗红霉素
8
0
19
2
阿奇霉素
3
1
7
14
, 百拇医药
美满霉素
11
0
27
5
环丙沙星
1
8
1
31
氟嗪酸
2
8
6
, http://www.100md.com
16
庆大霉素
0
11
7
25
链霉素
—
—
—
—
注：“—”示药物敏感耐药性判断标准空缺
3 讨论
, 百拇医药
随着国内NGU发病率的明显增高，这已引起国内外有关学者的重视，据吴移谋等报道，在男性NGU中，34.96%为Uu感染所致，在女性中46.9%为Uu所致[7]。支原体所致疾病，如治疗不彻底，可导致反复发作，可并发前列腺炎、附睾炎、男性不育、阴道炎、宫颈炎、输卵管炎[8，9]，因此，合理选用抗支原体药物是控制NGU的关键。在温州地区，女性生殖道感染者中，检出率占第一位的是Uu(37.2%，210/564)，而她们的性伴侣Uu检出率则更高(76%，19/25)[10]。而国内关于Uu如何治疗尚未定论，关于Uu的药物敏感性试验报道也少，我们对Uu的药物敏感性试验结果提示，美满霉素、罗红霉素应为本地区治疗由Uu引起的非淋球菌性尿道炎(NGU)首选药，至于选用哪一种药，则要临床医生酌情选用，另外可选用的药为阿奇霉素、红霉素。而庆大霉素、氟嗪酸、环丙沙星等药则有较多的耐药菌株，一般不予选用。这与骆丹等报道的，阿奇霉素对Uu作用最强，美满霉素对Uu的抗菌活性较差[5]有一定的差异，这可能与不同地区的人群感染了不同血清型别的Uu有关。由于链霉素的MIC敏感耐药性判断标准不明确，临床上不提倡选用，但从表1此药的MIC分布上，提示此药对Uu有一定的抑制作用。另从有症状者与无明显症状者对美满霉素等8种药物的敏感耐药性无差异性，提示Uu可能为条件致病病原体之一。
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*浙江省教委科研基金资助项目
4 参考文献
[1] Robert IJ.MacDermott.Bacterial vaginosis.Br J Obstet Gynaecol,1995,102(2)∶92
[2] Olah KS，Gee H.Prenatal Microbiological risk factors associated with pretern birth.Br J Obstet Gynaecol,1992,99(7)∶625
[3] Embree JE,Msc,Vernon WK,et al.Placental infection with mycoplasma hominis and ureaplasma urealyticum:clinical correlation.Obstet Gynaecol,1980,56∶475
, 百拇医药
[4] 夏克栋，周丽萍，郑斌云等.男性尿道炎解脲支原体感染及支原体分离鉴定.中华医学检验杂志，1990，13(2)∶102
[5] 骆丹，黄澍杰，谢礼豪等.解脲脲原体对七种抗菌药物的敏感性测定及其与相关耐药基因检测的比较.中华皮肤科杂志，1998，31(3)∶152
[6] 卫生部医政司编.全国临床检验操作规程。第2版.南京：东南大学出版社，1997.559～561
[7] 吴移谋，张卫东，余敏君等.从非淋菌性尿道炎患者中分离尿素分解支原体的研究.中华皮肤科杂志，1991，24∶251
[8] Limb DI.Mycoplasmas of the human urogential tract.Mec Lab Sci,1989,46∶146
[9] Brunner H,Weidner W,Schiefer HG.Studies on the role of Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma hominis prostatitis.J Infect Dis,1983,302∶1003
[10] 周丽萍，陈柏坤，杨介钻等.温州地区女性生殖道解脲脲原体感染调查.中国人兽共患病杂志，1998，14(2)∶72
(收稿：1998-09-07，修回：1998-11-02), http://www.100md.com
单位：杨介钻 陈柏坤 周丽萍 温州医学院微生物学教研室(325027)； 林明 温州医学院附属第二医院妇科； 高宇 朱尚理 温州医学院附属第二医院皮肤性病科
关键词：
温州医学院学报/990254 解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)是人类泌尿生殖道最常见的寄生菌之一，在特定的环境下可以致病。近年来研究表明，约30%～40%非淋球菌性尿道炎(NGU)是由Uu所致，并且还与慢性前列腺炎、不孕、不育、流产、早产及死胎等有关。这已引起国内外有关学者广泛重视[1～3]。随着抗菌药物的广泛应用，临床分离的耐药菌株日渐上升。本实验测定近期分离的43株Uu菌株对八种药物的敏感性，并与Uu标准菌株(血清型第4型，ATCC编号为27816)相比较，现报告如下。
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1 材料和方法
1.1 调查对象 1998年7月至8月间，收集温州医学院附属第二医院妇产科门诊和皮肤性病科门诊，拟诊为Uu阳性患者71例。
1.2 菌株来源 标本采集、分离及鉴定方法按文献[4]进行。经确定为Uu后，液体培养基传代三代，-20℃短期保存备用。采集的71例临床标本，经确认为Uu阳性标本者43例(男5例，女38例；年龄21～51岁)。
1.3 标准株来源 Uu标准菌株由南京铁道医学院流行病学教研室提供。
1.4 药物来源及配制方法 8种抗菌药物均来自国内标准品，均在有效期内使用；药物配制，先根据药物溶解性溶解原药，再用无菌蒸馏水稀释至2 560mg/L。-20℃短期保存备用。
1.5 药物敏感性测定
, 百拇医药
1.5.1 支原体的复苏：取出-20℃保存的Uu，在常温下解冻，吸取50ul接种于2ml液体培养基中，以CO2罩缸培养16～24h后，吸取50ul接种于2ml液体培养基中备用。
1.5.2 在经化学方法处理后的96孔PVC血凝板上将药物倍比稀释至64～0.06mg/L，每孔含药物50μl，设不加药物的液体培养基50ul孔为对照。每孔接种上面备用的含2.5×103CCU/0.1ml支原体培养物50μl，混匀后，加无菌液状石蜡密封，每孔总积小于0.2ml[5]，然后置于37℃孵箱。
1.5.3 结果判断参照文献[5]。
2 结果
2.1 实验结果表明，8种抗菌药物中，对Uu标准株4型具有不同的抗菌作用，其中以美满霉素效果最好，最低抑菌浓度(MIC)为1mg/L,庆大霉素抗菌作用不明显，MIC为16mg/L。8种抗菌药物对43株临床标本的MIC分布情况见表1。另根据药物MIC的敏感耐药性判断标准[6]，43株临床标本Uu的敏感耐药性结果见表2。
, 百拇医药
表1 8种抗菌药物对43株Uu MIC(mg/L)分布情况(例) 药物
0.06
0.12
0.25
0.5
1
2
4
8
16
32
64
合计
, 百拇医药
红霉素
0
0
1
1
1
13
11
13
2
1
0
43(n1)
罗红霉素
, http://www.100md.com
0
1
1
3
8
13
15
1
0
1
0
43(n2)
阿奇霉素
2
, http://www.100md.com
1
0
5
11
6
3
14
1
0
0
43(n3)
美满霉素
15
11
, 百拇医药
6
2
2
1
1
0
4
1
0
43(n4)
环丙沙星
0
0
0
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0
2
2
7
14
4
10
4
43(n5)
氟嗪酸
0
0
0
0
, 百拇医药
1
7
11
11
7
5
1
43(n6)
庆大霉素
0
0
0
0
1
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1
5
8
12
13
3
43(n7)
链霉素
0
0
0
2
13
11
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7
4
2
4
0
43(n8)
合计
17
13
8
13
39
54
60
, 百拇医药
65
32
35
8
344
表2 43株Uu对8种抗菌药物的敏感耐药性分布情况 药物
敏感株数
耐药株数
红霉素
2
16
罗红霉素
27
, 百拇医药
2
阿奇霉素
10
15
美满霉素
38
5
环丙沙星
2
39
氟嗪酸
8
24
庆大霉素
, 百拇医药
7
36
链霉素
—
—
合计
94
137
注：“—”示药物敏感耐药性判断标准空缺
2.2 从表1、2可知，四环素类药美满霉素对Uu的敏感性与环丙沙星、氟嗪酸、庆大霉素等三种药对Uu的敏感性相比较有显著的差异(P<0.01,χ2=58.66,31.07,44.79)。大环内酯类药物，红霉素、罗红霉素、阿奇霉素等三种药物中，以罗红霉素对Uu的敏感性最好，它与同类的另二种药物比较有显著性(P<0.01,χ2=31.60,17.55)，而与美满霉素相比较时无显著性(P>0.05,χ2=0.44)。阿奇霉素对Uu的敏感耐药性与红霉素的相比较有显著性(P<0.01,χ2=4.34)。
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2.3 本实验的43株临床标本，无明显症状者为11例，有症状者为32例，女性症状一般为白带增多，黄或伴有臭味，外阴搔痒，男性自述为排尿不适，尿道口有分泌物或无分泌物，时有搔痒感。由我们的实验结果得知见表3，有症状者和无明显症状者对美满霉素等8种抗菌药物的敏感耐药性均无显著性差别。
表3 有症状者和无明显症状者对8种药物的敏感耐药性分布比较 药物
无明显症状者
有症状者
敏感
耐药
敏感
耐药
红霉素
, 百拇医药
1
2
1
14
罗红霉素
8
0
19
2
阿奇霉素
3
1
7
14
, 百拇医药
美满霉素
11
0
27
5
环丙沙星
1
8
1
31
氟嗪酸
2
8
6
, http://www.100md.com
16
庆大霉素
0
11
7
25
链霉素
—
—
—
—
注：“—”示药物敏感耐药性判断标准空缺
3 讨论
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随着国内NGU发病率的明显增高，这已引起国内外有关学者的重视，据吴移谋等报道，在男性NGU中，34.96%为Uu感染所致，在女性中46.9%为Uu所致[7]。支原体所致疾病，如治疗不彻底，可导致反复发作，可并发前列腺炎、附睾炎、男性不育、阴道炎、宫颈炎、输卵管炎[8，9]，因此，合理选用抗支原体药物是控制NGU的关键。在温州地区，女性生殖道感染者中，检出率占第一位的是Uu(37.2%，210/564)，而她们的性伴侣Uu检出率则更高(76%，19/25)[10]。而国内关于Uu如何治疗尚未定论，关于Uu的药物敏感性试验报道也少，我们对Uu的药物敏感性试验结果提示，美满霉素、罗红霉素应为本地区治疗由Uu引起的非淋球菌性尿道炎(NGU)首选药，至于选用哪一种药，则要临床医生酌情选用，另外可选用的药为阿奇霉素、红霉素。而庆大霉素、氟嗪酸、环丙沙星等药则有较多的耐药菌株，一般不予选用。这与骆丹等报道的，阿奇霉素对Uu作用最强，美满霉素对Uu的抗菌活性较差[5]有一定的差异，这可能与不同地区的人群感染了不同血清型别的Uu有关。由于链霉素的MIC敏感耐药性判断标准不明确，临床上不提倡选用，但从表1此药的MIC分布上，提示此药对Uu有一定的抑制作用。另从有症状者与无明显症状者对美满霉素等8种药物的敏感耐药性无差异性，提示Uu可能为条件致病病原体之一。
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*浙江省教委科研基金资助项目
4 参考文献
[1] Robert IJ.MacDermott.Bacterial vaginosis.Br J Obstet Gynaecol,1995,102(2)∶92
[2] Olah KS，Gee H.Prenatal Microbiological risk factors associated with pretern birth.Br J Obstet Gynaecol,1992,99(7)∶625
[3] Embree JE,Msc,Vernon WK,et al.Placental infection with mycoplasma hominis and ureaplasma urealyticum:clinical correlation.Obstet Gynaecol,1980,56∶475
, 百拇医药
[4] 夏克栋，周丽萍，郑斌云等.男性尿道炎解脲支原体感染及支原体分离鉴定.中华医学检验杂志，1990，13(2)∶102
[5] 骆丹，黄澍杰，谢礼豪等.解脲脲原体对七种抗菌药物的敏感性测定及其与相关耐药基因检测的比较.中华皮肤科杂志，1998，31(3)∶152
[6] 卫生部医政司编.全国临床检验操作规程。第2版.南京：东南大学出版社，1997.559～561
[7] 吴移谋，张卫东，余敏君等.从非淋菌性尿道炎患者中分离尿素分解支原体的研究.中华皮肤科杂志，1991，24∶251
[8] Limb DI.Mycoplasmas of the human urogential tract.Mec Lab Sci,1989,46∶146
[9] Brunner H,Weidner W,Schiefer HG.Studies on the role of Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma hominis prostatitis.J Infect Dis,1983,302∶1003
[10] 周丽萍，陈柏坤，杨介钻等.温州地区女性生殖道解脲脲原体感染调查.中国人兽共患病杂志，1998，14(2)∶72
(收稿：1998-09-07，修回：1998-11-02), http://www.100md.com