妊高征患者与ACE基因缺失多态性研究
作者：洪卫 林向阳 徐玉兰 王楸 胡燕 陈云琴 帅茨霞
单位：(温州医学院附属第一医院，温州，325000)
关键词：妊高征；ACE基因
温州医学院学报000115 摘 要：目的：探讨血管紧张素转换酶(ACE)基因的缺失多态性与妊高征的关系。 方法：对52例妊高征患者(观察组)及100例正常产妇，应用聚合酶链反应技术检测ACE基因的缺失/插入多态性。 结果：观察组的缺失型纯合子(DD型)ACE基因占65%，高于对照组的16%；观察组的缺失型(D型)ACE等位基因出现频率为75%，亦高于对照组的33%(P<0.01)。结论：妊高征的发病与ACE基因的缺失多态性有关。
分类号：R714.24+6 文献标识码：A
文章编号：1000-2138(2000)01-0037-02
, 百拇医药
A study on the polymorphism deletion of the angiotension converting enzyme gene in pregnancy induced hypertension.
HONG Wei LIN Xiang-yang XU Yu-lan
(The First Affiliated Hospital of Wenzhon Medical College,Wenzhou 325000 )
Abstract：Objective：To study the relationship between polymorphism deletion and the angiotension converting enzyme (ACE) gene in pregnancy induced hypertension(PIH).Methods：Polymerase chain reaction(PCR) for detection of ACE gene polymorphism was performed to show the deletion/insertion between 52 cases with PIH and 100 normal subjects.Results：The frequency of D allele gene(0.75) and the percentage of ACE DD genotype(65%) were significantly higher in PIH patients than the frequency(0.32) and the percentage(16%) in the control population(P<0.01).Conclusion：ACE gene may contribute to the pasthogenesis of PIH.
, 百拇医药
Key words：pregnancy induced hypertension syndrome;ACE polymorphism▲
血清ACE(angiotension converting enzyme)活性与许多疾病有关。据有关资料报道，妊高征(PIH)有较强的遗传倾向，其ACE基因活性与ACE基因多态分布有关。本研究用聚合酶链反应(PCR)技术检测基因多态性并观察其与妊高征发病的关系。
1 对象和方法
1.1 对象 观察组为妊高征患者共52例，选自本院妇产科1997年12月至1998年6月的病例。其中重度PIH 16例，中度PIH 18例，轻度PIH 18例。PIH的诊断标准为妇产科学制定的PIH标准[1]。对照组选自来本院分娩的正常产妇100例。两组均无高血压、心脏病、肾病史，年龄均为23～32岁。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 DNA提取：采取新鲜静脉血(EDTA-2Na.抗凝)3ml,取出富含白细胞层，用Tris-Hcl破坏红细胞，用蛋白酶消化白细胞，最后用盐析法，冷乙醇提取絮状DNA。
1.2.2 试剂及仪器：PCR药盒由中国科学院细胞所提供，PCR热循环仪由美国Perkin Elmer公司生产。
1.2.3 PCR反应条件：引物为5′CTGGAGACCATCCCATCCTTTCT3’及5′GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT3'。PCR反应体系50μL，内含1U的Taq酶，在PCR自动循环仪(PE-4800)上按以下条件进行循环，变性94℃60s，退火56℃60s，延伸72℃90s，共30个循环，72℃再延伸5min。取扩增产物15μL，在含有0.5mg/L EB的20g/L琼脂糖凝胶中进行电泳(恒压100V，电泳液为1×TBE)20分钟后置紫外灯下观察结果。所得数据采用χ2检验。
, 百拇医药
1.2.4 统计分析：计算出各组等位基因型频率，并经Hardy-weinbery遗传平衡原理确认其样本之群体代表性，两组间等位频率之差别用χ2检验。
2 结果
两组DNA的标本PCR产物均显示出分子量相符的片段(190及490bp)，190bp片段为DD型，490bp片段为Ⅱ型，490bp和190bp片段杂合子为DI型[2]。
Ⅱ型ACE基因中，两个等位基因在16内含子内，均有长度为287bp的Alu重复序列插入，而DD型的两个等位基因中均无上述序列插入。
两组ACE基因缺失多态性检测及等位基因频率检测结果见表1、2。
表1 两组ACE基因缺失多态性检测结果 单位：例(%)
, 百拇医药
n
DD型
DI型
Ⅱ型
观察组
52***
34(65.4)
10(19.2)
8(15.4)
对照组
100
16(16.0)
34(34.0)
, 百拇医药
50(50.0)
与对照组比：***χ2＝38.7，P<0.001表2 两组ACE等位基因频率分布 单位：基因数(%)
总基因数
D型
Ⅱ型
观察组
104***
78(75.0)
26(25.0)
对照组
200
, 百拇医药
66(33.0)
134(67.0)
与对照组比：***χ2＝48.4，P<0.0013 讨论
3.1 ACE基因是血管紧张素Ⅰ形成血管紧张素Ⅱ过程中重要的限速酶。PIH有较强的遗传倾向，肾素—血管紧张素系统(RAS)在P1H发病过程中起一定作用[3]。现已知ACE基因多态性与循环ACE活性水平有明显关系，DD型者ACE水平最高，DI型次之，Ⅱ型最低，而且，此种关系呈共显性传递[4]。已有资料证明，DD型ACE基因与高血压、冠心病、心梗病有关[5]。本研究52例PIH患者，DD型ACE基因或D型等位基因占绝对优势。本研究结果表明，PIH与DD型或ACE等位基因D型有密切相关，由此可推测妊高征的遗传倾向与ACE基因的缺失多态性有关。
, 百拇医药 3.2 ACE基因普遍被认为是研究各类心血管病遗传易感性的主要候选基因，ACE基因缺失多态性可能是PIH遗传性分子生物学的基础之一[6]，但是否证实ACE基因DI型、Ⅱ型是否绝对不易患PIH病，还有待进一步研究证实。■
作者简介：洪卫(1949-)，女，浙江瑞安市人，副主任医师。
参考文献：
[1] 乐杰主编.妇产科学[M].第4版.北京：人民卫生出版社，1996.115-116.
[2] Cambien F，Poirier O,Lecerf L,et al.Deletion polymorphism in the gene for angiotensin-converting enzyme is a potent risk factor for myocardial infarction[J].Nature,1992,359：1540.
, 百拇医药
[3] 张琳，李检兰.妊娠高血压综合征与血管紧张素转换酶的关系[J].临床医学，1994，5：276-277.
[4] 项坤三.血管紧张素Ⅰ转换酶基因与糖尿病、心血管病的关系[J].中华内分泌代谢杂志，1997，1：49.
[5] Tiret L,Kee F,Poirier O,et al.Deletion polymorphism in angiotensin-converting enzyml gene associatecl with parental history of myocardial infarction[J].Lancet,1993，341：991-992.
[6] 朱铭伟，夏燕萍，程蔚蔚等.妊高征孕妇血管紧张素转换基因的缺失多态性研究[J].中华妇产科杂志，1998，33：83-84.
收稿日期：1999-11-19, 百拇医药
单位：(温州医学院附属第一医院，温州，325000)
关键词：妊高征；ACE基因
温州医学院学报000115 摘 要：目的：探讨血管紧张素转换酶(ACE)基因的缺失多态性与妊高征的关系。 方法：对52例妊高征患者(观察组)及100例正常产妇，应用聚合酶链反应技术检测ACE基因的缺失/插入多态性。 结果：观察组的缺失型纯合子(DD型)ACE基因占65%，高于对照组的16%；观察组的缺失型(D型)ACE等位基因出现频率为75%，亦高于对照组的33%(P<0.01)。结论：妊高征的发病与ACE基因的缺失多态性有关。
分类号：R714.24+6 文献标识码：A
文章编号：1000-2138(2000)01-0037-02
, 百拇医药
A study on the polymorphism deletion of the angiotension converting enzyme gene in pregnancy induced hypertension.
HONG Wei LIN Xiang-yang XU Yu-lan
(The First Affiliated Hospital of Wenzhon Medical College,Wenzhou 325000 )
Abstract：Objective：To study the relationship between polymorphism deletion and the angiotension converting enzyme (ACE) gene in pregnancy induced hypertension(PIH).Methods：Polymerase chain reaction(PCR) for detection of ACE gene polymorphism was performed to show the deletion/insertion between 52 cases with PIH and 100 normal subjects.Results：The frequency of D allele gene(0.75) and the percentage of ACE DD genotype(65%) were significantly higher in PIH patients than the frequency(0.32) and the percentage(16%) in the control population(P<0.01).Conclusion：ACE gene may contribute to the pasthogenesis of PIH.
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Key words：pregnancy induced hypertension syndrome;ACE polymorphism▲
血清ACE(angiotension converting enzyme)活性与许多疾病有关。据有关资料报道，妊高征(PIH)有较强的遗传倾向，其ACE基因活性与ACE基因多态分布有关。本研究用聚合酶链反应(PCR)技术检测基因多态性并观察其与妊高征发病的关系。
1 对象和方法
1.1 对象 观察组为妊高征患者共52例，选自本院妇产科1997年12月至1998年6月的病例。其中重度PIH 16例，中度PIH 18例，轻度PIH 18例。PIH的诊断标准为妇产科学制定的PIH标准[1]。对照组选自来本院分娩的正常产妇100例。两组均无高血压、心脏病、肾病史，年龄均为23～32岁。
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1.2 方法
1.2.1 DNA提取：采取新鲜静脉血(EDTA-2Na.抗凝)3ml,取出富含白细胞层，用Tris-Hcl破坏红细胞，用蛋白酶消化白细胞，最后用盐析法，冷乙醇提取絮状DNA。
1.2.2 试剂及仪器：PCR药盒由中国科学院细胞所提供，PCR热循环仪由美国Perkin Elmer公司生产。
1.2.3 PCR反应条件：引物为5′CTGGAGACCATCCCATCCTTTCT3’及5′GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT3'。PCR反应体系50μL，内含1U的Taq酶，在PCR自动循环仪(PE-4800)上按以下条件进行循环，变性94℃60s，退火56℃60s，延伸72℃90s，共30个循环，72℃再延伸5min。取扩增产物15μL，在含有0.5mg/L EB的20g/L琼脂糖凝胶中进行电泳(恒压100V，电泳液为1×TBE)20分钟后置紫外灯下观察结果。所得数据采用χ2检验。
, 百拇医药
1.2.4 统计分析：计算出各组等位基因型频率，并经Hardy-weinbery遗传平衡原理确认其样本之群体代表性，两组间等位频率之差别用χ2检验。
2 结果
两组DNA的标本PCR产物均显示出分子量相符的片段(190及490bp)，190bp片段为DD型，490bp片段为Ⅱ型，490bp和190bp片段杂合子为DI型[2]。
Ⅱ型ACE基因中，两个等位基因在16内含子内，均有长度为287bp的Alu重复序列插入，而DD型的两个等位基因中均无上述序列插入。
两组ACE基因缺失多态性检测及等位基因频率检测结果见表1、2。
表1 两组ACE基因缺失多态性检测结果 单位：例(%)
, 百拇医药
n
DD型
DI型
Ⅱ型
观察组
52***
34(65.4)
10(19.2)
8(15.4)
对照组
100
16(16.0)
34(34.0)
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50(50.0)
与对照组比：***χ2＝38.7，P<0.001表2 两组ACE等位基因频率分布 单位：基因数(%)
总基因数
D型
Ⅱ型
观察组
104***
78(75.0)
26(25.0)
对照组
200
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66(33.0)
134(67.0)
与对照组比：***χ2＝48.4，P<0.0013 讨论
3.1 ACE基因是血管紧张素Ⅰ形成血管紧张素Ⅱ过程中重要的限速酶。PIH有较强的遗传倾向，肾素—血管紧张素系统(RAS)在P1H发病过程中起一定作用[3]。现已知ACE基因多态性与循环ACE活性水平有明显关系，DD型者ACE水平最高，DI型次之，Ⅱ型最低，而且，此种关系呈共显性传递[4]。已有资料证明，DD型ACE基因与高血压、冠心病、心梗病有关[5]。本研究52例PIH患者，DD型ACE基因或D型等位基因占绝对优势。本研究结果表明，PIH与DD型或ACE等位基因D型有密切相关，由此可推测妊高征的遗传倾向与ACE基因的缺失多态性有关。
, 百拇医药 3.2 ACE基因普遍被认为是研究各类心血管病遗传易感性的主要候选基因，ACE基因缺失多态性可能是PIH遗传性分子生物学的基础之一[6]，但是否证实ACE基因DI型、Ⅱ型是否绝对不易患PIH病，还有待进一步研究证实。■
作者简介：洪卫(1949-)，女，浙江瑞安市人，副主任医师。
参考文献：
[1] 乐杰主编.妇产科学[M].第4版.北京：人民卫生出版社，1996.115-116.
[2] Cambien F，Poirier O,Lecerf L,et al.Deletion polymorphism in the gene for angiotensin-converting enzyme is a potent risk factor for myocardial infarction[J].Nature,1992,359：1540.
, 百拇医药
[3] 张琳，李检兰.妊娠高血压综合征与血管紧张素转换酶的关系[J].临床医学，1994，5：276-277.
[4] 项坤三.血管紧张素Ⅰ转换酶基因与糖尿病、心血管病的关系[J].中华内分泌代谢杂志，1997，1：49.
[5] Tiret L,Kee F,Poirier O,et al.Deletion polymorphism in angiotensin-converting enzyml gene associatecl with parental history of myocardial infarction[J].Lancet,1993，341：991-992.
[6] 朱铭伟，夏燕萍，程蔚蔚等.妊高征孕妇血管紧张素转换基因的缺失多态性研究[J].中华妇产科杂志，1998，33：83-84.
收稿日期：1999-11-19, 百拇医药