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编号:10266455
尼莫通对大鼠三叉神经刺激后血浆神经肽变化的影响
http://www.100md.com 《临床神经病学杂志》 2000年第3期
     作者:张志坚 许国英 慕容慎行 吴秀丽 林珉婷

    单位:福建医科大学附属第一医院神经内科 350005

    关键词:尼莫通;大鼠;三叉神经刺激;神经肽

    临床神经病学杂志000301 【摘要】 目的 观察尼莫通对三叉神经刺激后血浆神经肽变化的影响。方法 30只SD大鼠随机分为假手术组、刺激组及尼莫通组。采用放射免疫法测定各组血浆中P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)、神经肽Y(NPY)、降钙素基因相关肽(CGRP)、β-内啡肽(β-EP)、强啡肽A(DynA)与亮啡肽(LEK)含量。结果 与假手术组比较,刺激组NPY、CGRP、SP与VIP升高;与刺激组比较,尼莫通组SP、NPY降低,β-EP升高。结论 三叉神经受刺激后,引起血管舒缩的神经肽大量释放,尼莫通可部分地抑制这种释放,并可导致镇痛物质β-EP的升高。

    Effects of nimotop on plasma neuropeptides in rats after trigeminal stimulation
, 百拇医药
    Zhang Zhijian Xu Guoying Murong Shenxing et al

    (Department of Neurology, First Affiliated Hospital of Fujian Medical University, Fuzhou 350005)

    【Abstract】 Objective To observe the effects of nimotop on plasma neuropeptides in rats after trigeminal stimulation.Methods 30 SD rats were divided into pseudo-operation group, trigeminal stimulation group and nimotop treatment group.The plasma levels of substance P(SP), vasoactive intestinal peptide(VIP),neuropeptide Y (NPY),calcitonin gene-related peptide(CGRP),β-endorphin (β-EP),dynorphin A (DynA) and leu-enkephalin (LEK) in each group were determined with radioimmunoassay method.Results Compared with pseudo-operation group,the levels of NPY,CGRP,SP and VIP in trigeminal stimulation group were significantly increased;compared with trigeminal stimulation group, the levels of SP and NPY in nimotop treatment group were significantly decreased while the level of β-EP increased.Conclusion There was plenty of neuropeptide release of vasomotion after trigeminal stimulation. Administration of nimotop might antagonize the change, and raised the plasma level of β-EP.
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    【Key words】 Nimotop Rat Trigeminal stimulation Neuropeptides

    目前有许多证据表明偏头痛的发病源于神经系统。三叉神经激活后所释放的神经肽及其对头颅血管所起的效应成为关注的热点。因此,三叉神经刺激动物模型被广泛应用。除了在这些模型上观察三叉神经激活后各种神经肽的改变以探讨偏头痛的发病机理外,尚探讨各种药物对这些肽类的含量及效应的影响,以寻求或验证防治偏头痛的有效药物。为此,我们应用大鼠三叉神经刺激模型,观察尼莫通对大鼠三叉神经刺激后血浆神经肽含量的影响,现将结果报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 动物及分组 30只健康雄性SD大鼠(上海西普尔必凯实验动物有限公司提供,清洁级),体重250~350 g,随机分为假手术组、三叉神经刺激组(刺激组)与应用尼莫通组(尼莫通组),每组各10只。
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    1.2 方法

    1.2.1 动物模型 用5%水合氯醛麻醉(0.4 g/kg)后,将大鼠固定在手术台上,腹股沟处剃毛切口,分离出股动脉并插管。按Dimitriadou的方法[1],将大鼠固定在立体定向仪(江湾Ⅰ型C,上海第二军医大学制造)上,门齿固定杆设在-2.5 mm。头顶正中切口,充分暴露前囟。在前囟旁3.0~3.2 mm(据动物大小可变动)、后3.2 mm颅骨处钻一直径2 mm孔。操作定向仪将不锈钢双极电极由钻孔处垂直插入,深度在硬脑膜下9.2 mm(达三叉神经节)。应用生理电子刺激仪(SDQ-1型,蚌埠实用技术研究所产)进行电刺激。刺激电流1.0 mA,频率5 Hz,波宽5 ms,持续5分钟后采集血样。假手术组的电极只插入4.5 mm深度,不做电刺激。尼莫通组经股动脉导管给予尼莫通注射液0.025 ml+生理盐水1 ml,随即行电刺激,其余操作同刺激组。

    1.2.2 样本测定 每毫升血样放入抑肽酶500单位,1%肝素10 μl,迅速低温离心,取血浆置-70℃保存待测。所有血液样本均采用放射免疫法测定P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)、神经肽Y(NPY)、降钙素基因相关肽(CGRP)、β-内啡肽(β-EP)、强啡肽A(DynA)与亮啡肽( LEK)。放免药盒由第二军医大学神经生物学教研室提供。操作均按药盒说明书进行。
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    1.2.3 统计学处理 数据用均数±标准差(±s)表示,资料在微机上用SPSS软件包进行t检验。

    2 结 果

    大鼠三叉神经刺激后、先用尼莫通再予电刺激之后血中神经肽的变化见表1。与假手术组对比,刺激组NPY、CGRP、SP与VIP均升高,差异有显著性意义(P<0.05~0.01);尼莫通组LEK、β-EP、VIP与CGRP升高,差异有显著性意义(P<0.05~0.01)。与刺激组比,尼莫通组SP、NPY降低,β-EP升高,差异均有显著性意义(均P<0.05)。

    表1 刺激组及尼莫通组大鼠血中神经肽变化(±s,ng/L)

    假手术组
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    (n=10)

    刺激组

    (n=10)

    尼莫通组

    (n=10)

    SP

    271.1±118.3

    560.8±507.4*

    183.7±79.9

    LEK

    3530.0±1021.2

    4241.9±779.2
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    5076.0±1526.7*

    VIP

    156.4±98.2

    381.7±243.6*

    318.7±156.5*

    NPY

    745.2±217.1

    1180.3±426.8**

    858.4±163.8

    β-EP
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    519.0±232.7

    551.6±384.3

    984.8±381.9**△

    DynA

    276.3±172.9

    398.8±164.5

    297.7±127.8

    CGRP

    126.4±37.6

    236.2±131.9*

    232.5±93.0**
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    与假手术组比*P<0.05,**P<0.01;与刺激组比 P<0.05

    3 讨 论

    在几种哺乳动物及人类,均已发现 SP与CGRP共存于三叉神经节的同一神经元内。CGRP是已知最强的血管扩张剂。SP的前体为前速激肽原,致血管扩张作用仅次于CGRP。刺激猫的三叉神经节可使CGRP与SP释放增加[2],同时颅内外血流亦增加。三叉神经痛患者在做半月神经节热凝时出现刺激侧面部潮红,同时肘静脉血中CGRP与SP含量显著升高[3]。本实验结果显示大鼠三叉神经受刺激后SP与CGRP含量升高。这些证据皆支持CGRP与SP很可能参与偏头痛发病机理的观点。本实验在三叉神经刺激前给大鼠施用尼莫通,发现与刺激组比,其SP含量降低,CGRP含量不变,提示钙拮抗剂可能影响SP的释放,但具体机理不明。推测SP作为一级感觉神经元的递质,与伤害信息的传递有关。一般尼莫通具有抗细胞损伤作用,使伤害减少,从而使SP水平相应降低。
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    动物的去神经实验显示颅内血管的大多数交感神经纤维来自同侧颈上神经节,且多分布在动脉。NPY与酪氨酸羟化酶的双重免疫染色显示该两种物质同存于血管周围交感神经纤维中。体外实验证实NPY的血管收缩效应强过同样浓度去甲肾上腺素,故认为NPY是交感神经缩血管物质中最强的一种。但在动物模型与偏头痛患者中进行的有关NPY含量研究结果不甚一致[4,5]。本实验检测结果表明三叉神经激活可伴有交感纤维激活并释放NPY,这种物质的升高可因刺激前给予尼莫通而受到抑制。此结果支持了NPY可能参与偏头痛发病的观点,同时又对钙拮抗剂扩张血管的机理提出新的看法。以往认为钙拮抗剂主要为拮抗钙离子进入血管平滑肌而达到舒血管的作用,但从本实验结果来看可能还有其它机理。有人经颈动脉注入NPY,可在不影响糖代谢的情况下引起显著、持续地皮质血流减少,故认为NPY有直接收缩血管的作用[6]。因此,NPY含量的减少无疑使致血管收缩的因素减少,尼莫通可使NPY含量降低,间接起着防止血管痉挛的作用。

    VIP亦具扩血管效应。哺乳动物的脑动脉具有含VIP免疫活性的神经分布。有动物实验显示刺激三叉神经节引起大部分颅内外血管扩张,血流增加,实验者认为这种血管扩张大部通过面神经中副交感神经来实现[7],而VIP是此副交感神经所释放的最终递质[8]。刺激猫的三叉神经后,颈静脉血中VIP含量增高[9]。本研究结果显示三叉神经刺激后,大鼠血中VIP含量增高,且刺激前施用尼莫通并不改变这种升高。此表明副交感神经在三叉激活后亦可能参与了偏头痛的发病机理,但尼莫通对这个系统似乎无甚影响。
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    β-EP属内啡肽,具多种生理功能,为已知最强的内源性吗啡样镇痛物质。在偏头痛病人中的研究提示β-EP水平较低[10]。本实验中示大鼠三叉神经受刺激后,β-EP水平无明显改变,但在刺激前应用尼莫通后其水平大为提高,此结果意味着尼莫通可能有提高机体痛阈作用,但其升高β-EP机理不明。LEK属脑啡肽,其前体为前脑啡肽,广泛存在于神经系统的各级水平。在中枢内,含脑啡肽的神经元大部是参与构成局部的神经通路,起着调节内分泌与运动、参与感觉整合等功能。因此,含LEK神经元与神经系统各部均有联系。本实验显示大鼠在三叉神经受刺激后, LEK含量不升高,但在刺激前应用尼莫通之后, LEK含量较假手术组升高,这种升高可能提示中枢神经系统的调节活动呈活跃状态。DynA具有抗伤害作用,其在整个中枢神经系统的分布类似脑啡肽,但无后者广泛。本实验没有发现在三叉神经刺激后,或刺激前给予尼莫通等情况下DynA有所变化。

    本研究显示大鼠三叉神经受刺激后的血管效应是受多重因素影响的。在刺激前应用尼莫通可使SP与NPY含量降低,这可能反映了尼莫通的抗损伤与血管舒张的作用机理。尼莫通可使β-EP水平提高的结果具较大意义,但需进一步探讨其机理。
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    本课题由福建省教委资助项目,课题编号J96033

    参 考 文 献

    1,Dimitriadou V,Buzzi MG,Moskowitz MA,et al.Trigeminal sensory fiber stimulation induces morphological changes reflecting secretion in rat dura mater mast ells.Neuroscience,1991,44:97

    2,Goadsby PJ,Edvinsson L,Ekman R.Release of vasoactive peptides in the extracerebral circulation of humans and the cat during activation of the trigeminovascular system.Ann Neurol, 1988,23:193
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    3,Nicolodi M,Del Bianco E.Sensory neuropeptides (substance P,calcitonin gene-related peptide) and vasoactive intestinal polypeptide in human saliva:their pattern in migraine and cluster headache.Cephalalgia, 1990,10:39

    4,Gallai V,Sarchielli P,Trequattrini A,et al.Neuropeptide Y in juvenile migraine and tension-type headache.Headache, 1994,34:35

    5,Goadsby PJ,Edvinsson L,Ekman R.Vasoactive peptide release in the extracerebral circulation of human during migraine headache.Am Neurol, 1990,28:183
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    6,Tuor UI, Kelly PA,Edvinsson L, et al. Neuropeptide Y and the cerebral circulation. J Cereb Blood Flow Metab, 1990,10:591

    7,Goadsby PJ,Duckworth JW.Effect of stimulation of trigeminal ganglion on regional cerebral blood flow in cats.Am J Physiol, 1987,235:R270

    8,Goadsby PJ,Sheuey S.High frequency stimulation of the facial nerve results in local cortical releast of vasoactive intestinal polypeptide in the anesthetised cat.Neurosci Left, 1990,112:282
, http://www.100md.com
    9,Goadsby PJ,Edvinsson L.Peripheral and central trigeminovascular activation in at is blocked by the serotonin (5HT)-1 D receptor agonist 311C90.Headache, 1994,34:394

    10,Pinessi L,Piazza D,Vaula G,et al.Plasma beta-endorphin and caffeine consumption in chronic hemicrania.Minerva Medica, 1990,81:691

    收稿1999-04-09

    修回2000-02-12, 百拇医药